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摘要：目的：检测新型香菇多糖分子MPSSS的免疫毒性。材料方法：制备小鼠脾细胞单细胞悬液，用MTT法检测香菇多糖对小鼠脾细胞的抑制率，对照组为多西他赛及香菇多糖Lentinan。结果：MPSSS和Lentinan均可以促进脾细胞增殖，且前者促增殖效果更好，而多西他赛明显抑制脾细胞。结论：MPSSS不具备免疫毒性，可以促进脾细胞增殖，且效果优于临床已经应用的Lentinan，该分子可作为临床抗肿瘤的候选分子。
关键词：香菇多糖；脾细胞；多西他赛；抑制
1 前言
人类迄今为止从未停止过对于癌症的疗法的探索。其中，人体免疫细胞如B 细胞及T细胞，巨噬细胞，NK细胞和树突状细胞都可以对肿瘤细胞进行免疫防护。尤其是T细胞，可以对恶性肿瘤进行细胞免疫。多年来，研究人员研究出了多种治疗癌细胞的方法，如靶向治疗等。但是国内临床上主要用的都是化疗，放疗或者切除，尤其是化疗。但化疗药不光针对肿瘤细胞，对病人机体的杀伤程度也很强，使病人有恶心，呕吐，及腹泻等消化道症状，导致毛发的脱落还有骨髓抑制性及全身过敏反应【1】。因此，如果有新兴技术对治疗癌症效果更佳，我们应该推广该技术到临床。目前，我国学者近年来发现了新型香菇多糖分子MPSSS，但是其免疫毒性尚未得到检测。1968年日本千原吴郎首次从香菇中提取出了香菇多糖【2】。目前已得到了广泛的临床应用。本研究拟研究MPSSS的免疫毒性，并与化疗药及Lentinan进行比较，为香菇多糖MPSSS的新药研究提供基础数据。
2试验材料
一块活体雌性小白鼠脾脏，两块毛玻璃片，PBS细胞培养液，离心管与离心机，国产香菇多糖MPSSS溶液,日本香菇多糖letinan溶液，多西他赛注射液，滴管枪，测试用96孔板，光学显微镜。
【日本香菇多糖】：商品名：天地欣，计量为1毫克*10支
【多西他赛】：江苏恒瑞医药股份有限公司生产，剂量为0.5毫升20毫克。
【PBS】：稀释所用PBS为HyClone生产，计量为500毫升。
3试验假设
根据我们对于传统化疗药物弊端的理解，常规化疗药物如多西他赛不仅对于肿瘤细胞有一定量的杀伤作用，还会对人体自身免疫细胞产生攻击作用，导致放疗患者易出现掉发，食欲不振，头晕恶心等副作用。然而采用新型香菇多糖疗法其目的为利用并促进自身B免疫细胞的活性及识别肿瘤细胞的能力诱导主动抗癌，故将会规避传统化疗药物攻击自身免疫细胞的风险。小鼠脾脏为机体免疫器官，经研磨取样培养将会获得大量活体免疫B细胞，故我们假设MPSSS溶液与Letinan溶液都会促进B细胞数量的增长而多西他赛溶液会导致B细胞的大量死亡。
4 试验方法
4-1 提取脾脏白细胞并稀释
1)麻醉杀死一只实验室用雌性小白鼠，取小鼠新鲜脾脏，浸入PBS并于冷藏状态下放置一小时；
2) 用两块毛玻璃板挤压脾脏，将挤压出的血液以及淋巴液在PBS中稀释；
3) 将溶液用滴管移入离心管，并把液体总体积配至4毫升；
4) 离心三分钟，使用红细胞裂解液，一分钟后为防止免疫细胞被解裂再次稀释至5毫升；迅速放入离心机中；最后得到免疫B细胞稀释液。
5) 吸走稀释液上层浊液，利用移液器将下层白色细胞团吸起并置于测试用96孔板横3纵4的12个孔中。
4-2 细胞分组
1) 用移液器取100微升的培养液分别注射于测试用96孔板第一行三个对应位点。将本组设为对照组，标记为C1,C2,C3。
2) 用移液器分别取100微升的国产香菇多糖MPSSS置于第二列的三个位点中，标记为M1，M2,M3。
3)分别取1微升的化疗药物多西他赛置于第三列的三个位点中，标记为D1,D2,D3。
4)分别取5微升的日产香菇多糖Letinan置于第四列的三个位点，标记为L1,L2,L3。该三组设为实验组。
5 实验结果
5-1观察结果
经观察培养板发现，M组细胞聚集体积略大于C组，L组细胞聚集较C组细胞聚集体积相近，D组细胞很少，不堆积，观察不到明显细胞聚集物。
5-2 试验数据分析
A: 样本中细胞总数 单位: 个
B: 样本中活细胞总数 单位: 个
C: 样本中细胞活率 单位: %
相比较而言，多西他赛的毒性最强。三组实验结果平均之后，加入国产香菇多糖的实验组细胞活率比日产的实验组要高出约12.60%，比对照组高出11.93%，比加入多西他赛的实验组高出约35.52%，符合试验猜想。
6 结论
在本次试验中, 与香菇多糖相比，常规化疗药物的癌症治疗会对病人机体免疫系统造成一定的杀伤力，容易破坏其免疫细胞。因此对于非晚期病人临床应用香菇多糖进行治疗效果会更好。同时由结果可知国产香菇多糖作用下的免疫白细胞的活率比日产的平均高出12.60%。证明了国产香菇多糖MPSSS药效好于日产香菇多糖Letinan。因此，在后续的临床应用中，应推广本国研发的香菇多糖。
作为人类21世纪的头号杀手肿瘤的新型疗法香菇多糖疗法已经到来，目前已经处于临床试验阶段。相信不久的未来，香菇多糖这一新型疗法将为人类带去肿瘤治疗的新福音。
参考文献：
[1]周耀明.香菇多糖的提取方法探索[D].江苏食品技术学院, 文章编号：1007-2764（2004）03-0098-036
[2]王国佳，曹红. 香菇多糖的研究进展[A].解放军药学学报,2011.10.10.第27卷 第5期
论文作者:谢竞宁1, 焦梓翔2,王晨睿3, 廖培语4,,尹天
论文发表刊物:《中国医学人文》2019年第03期
论文发表时间:2019/5/15
标签：多糖论文; 细胞论文; 香菇论文; 免疫论文; 脾脏论文; 实验组论文; 溶液论文; 《中国医学人文》2019年第03期论文;