1.牡丹江市第一人民医院 157011；2.黑龙江省林业职业技术学校 157011
摘要：目的：建立甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力检测方法。方法：用双抗体夹心ELISA法检测试剂对甲型肝炎灭活疫苗及效力试验参比进行检测，以检测OD值为反应指标，用生物检定双平行线法的基本原理进行统计分析，计算待检疫苗对应于效力参比品的相对效力（R值）。结果：样品HAAg含量与检测OD值之间具有高度的相关性，验证了4个指标全部通过了验证；用所建立的体外相对效力试验检测法对32批次甲肝灭活疫苗进行检测，结果与小鼠体内效力检测结果具有良好一致性，均能反映疫苗相对效力，两种方法检测相对效力（R值）之间无明显差别。结论：所建立的甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力试验是一种灵敏、特异、方便、快捷的效力测定方法，可应用于甲型肝炎灭活疫苗效力检测。
关键词：甲型肝炎灭活疫苗效力；抗原检测；研究及应用
Abstract：Objective：to establish a method to determine the relative potency of Inactivated Hepatitis A Vaccine in vitro. Methods：the method of double antibody sandwich ELISA kit to test Inactivated Hepatitis A Vaccine and the effect of reference for testing，to detect the OD value of reaction index，the basic principle of biological verification of parallel method for statistical analysis，the calculation to be detected corresponding to the relative effectiveness of vaccine effectiveness than ginseng the product（R）. Results：with a high degree of correlation between the HAAg content of the sample and detection OD，verified the 4 indicators all through the verification；with the established in vitro relative potency test detection method for 32 batches of inactivated hepatitis A vaccine was detected in mice results and potency testing results have good consistency，are can reflect the relative effectiveness of the vaccine，two methods for the detection of the relative potency（R）. conclusion：no obvious difference between Inactivated Hepatitis A Vaccine established in vitro The relative potency test is a sensitive，specific，convenient and rapid method for the determination of potency in Inactivated Hepatitis A Vaccine
Keywords：Inactivated Hepatitis A Vaccine effect；antigen detection；research and Application
灭活疫苗动物体内效力检测周期一般均较长，且结果受多种因素的影响，所以WHO及国际生物制品标准化协会推荐尽量不用动物法进行生物制品质量检定。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆我所甲型肝炎灭活疫苗工艺成熟完善、产品质量稳定可控，为此，参照相关规定及原则，建立双平行线体外相对效力试验检测方法，用于甲型肝炎灭活疫苗的效力价。
1.材料与方法
1.1材料
甲型肝炎病毒抗原（HAAg）检测采用双抗体夹心ELISA法检测试剂，本所自制；甲型肝炎病毒抗体检测采用竞争法ELISA检测试剂，本所自制；灭活疫苗病毒解离剂：参照2005年版《中国药典》三部附录H1配制；试验参比品按国家药品标准（国药标字S-016号）进行制备及全面检定，合格后经标定使用。
1.2方法
精密量取待检样品0.1ml，加入0.1ml病毒解离剂，混匀，于20—28℃放置30min。将处理后的参考品和供试晶用供试品稀释液进行2倍比系列稀释，取适宜稀释度用甲肝病毒抗原检测试剂进行检测，每个稀释度做2个复孔，100微升/孔，湿盒中37℃湿盒中保温2h，用洗板机洗板4—5次；加酶结物100微升/孔，37℃湿盒中保温1h，用洗板机洗板4—5次；加显色液100微升／孔，370C保温避光放置10min；加入终止液50微升／孔；酶标仪检测各孔A值。用我所甲肝病毒抗原El。ISA检测试剂对待检样品进行检测，对样品稀释度的对数值与相对应OD值及OD值的对数分别进行直线四归分析，计算各自的尺2值。小鼠体内相对效力检测：将待检疫苗每批多支混合后作2倍系列稀释，取3个合适的稀释度接种小鼠，每个稀释度接种小鼠10只，每只腹腔注射1.0ml；试验同时设效力试验参比品作为对照。4周后采血，分离血清，用甲型肝炎病毒抗体ELISA检测试剂盒测定小鼠血清的抗-HAV抗体，用Reed-Muarch法进行统计分析，分别计算待检品及参比晶的ED，再计算待枪品ED与参比品的ED的比值。按照量反应双平行线测定法原理，建立（4，4）法体外相对效力检测方法。首先按病毒解裂方法对待枪样品及效力参比品分别进行甲肝病毒抗原检测，然后以各稀释度实测OD值为反应值（参比品为S1-S4，待检品为Tl～T4），按量反应平行线测定法计算待检样品与参比品的相对效力（R值）。对所建屯的量反应平行线测定法进行可靠性验证，验证指标为：回归、偏离平行、二次曲线、反二次曲线4项。要求同归应非常显著（P<0.01），偏离平行、二次曲线、反二次曲线三项均应不显著（P>0.05）。
2.结果
样品HAAg含量与检测OD值之间具有高度的相关性，R2≥0．97，适用于建立双平行线检定方法；通过对3批样品3人次检测结果分析，验证了所建直方法的可靠性，回归、偏离平行、二次曲线、反二次曲线4个指标全部通过了验证；用所建立的体外相对效力试验检测法对32批次甲肝灭活疫苗进行检测，结果与小鼠体内效力检测结果具有良好一致性，均能反映疫苗相对效力，两种方法检测相对效力（R值）之间无明显差别（t=1．0354，P=0．3045）。
3.结语
所建立的甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力试验是一种灵敏、特异、方便、快捷、符合发展趋势的效力测定方法，可应用于甲肝灭活疫苗效力检测，取代现行的动物试验法。该方法的应用，解决了使用动物所带来的影响因素多、重复性差、检定周期长的不利因素，缩短检测时间约30天，间接延长了疫苗的有效期，这对于进一步保证疫苗质量具有重要的现实意义。
参考文献：
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论文作者:张龙丰,张玲珠
论文发表刊物:《中国误诊学杂志》2017年第6期
论文发表时间:2017/6/12
标签：效力论文; 疫苗论文; 肝炎论文; 灭活论文; 甲型论文; 体外论文; 小鼠论文; 《中国误诊学杂志》2017年第6期论文;