(1佳木斯大学医学院研究生院；2佳木斯大学附属第一医院；黑龙江佳木斯 154000)
摘要：目的:探讨甘草酸二铵对小鼠脑出血后的脑水肿的相关影响。研究方法:选取健康雄性昆明小鼠56只随机分成实验组A、B、C、D、E和F(对照组)、G(空白对照组),共7组,每组8只。A、B、C、D、E实验组小鼠腹腔注射甘草酸二铵20ml/kg,每24小时重复注射一次,于脑出血造模后6h、1d、2d、3d、7d行相应神经功能学评分后处死小鼠,F组小鼠模拟脑出血模型并腹腔注射20mg/kg生理盐水,每24小时重复注射一次,并于实验组相应时间神经功能学评分后处死小鼠,G组小鼠只进行相应手术操作并于腹腔注射20mg/kg生理盐水,于实验组对应时间神经功能学评分后处死小鼠。取脑组织行脑含水量的检测,结果:甘草酸二胺组在与生理盐水组及假手术组脑组织含水量、组间相比较 P 均 < 0. 05。结论:甘草酸二铵对小鼠急性脑出血具有明显的保护作用，能明显减轻脑水肿。
【关键词】小鼠脑出血；脑水肿；甘草酸二铵
高血压性脑出血是由于脑组织中细小动脉由于高血压的长期压迫作用下并在已在长期慢性病程的基础上发生的出血 [2] 。有研究发现脑出血后引起的脑水肿将会对脑组织产生第二次危害,目前对脑出血后引起的脑水肿缺乏有效广泛适用的药物,越来越多的研究者开始注意到中药在治疗方面的功效。甘草酸二铵是甘草中皂苷类成分含有量最高的成分,甘草酸主要是由甘草次酸和葡萄糖醛酸组成。已有的研究表明它具有抑制炎症反应、抗击病毒侵袭、抵抗氧化、抑制肿瘤的发生及发展、也具有一定的免疫功能及护肝功效等多种药理功能.对消化道出血也有较好的作用,有研究报道甘草酸二铵对脑缺血再灌注损伤后的脑组织有比较好的修复功能，有研究证实当甘草酸二胺应用在脑梗死中能明显的降低患者的神经功能缺失程度，提高患者生活水平 ,与抑制脑水肿的发生有关。但甘草酸二铵在脑出血保护作用未见报道。
材料与方法:
1.1材料
实验动物: 雄性昆明小鼠56 只,8 周龄,体质量18 ~ 22 g,购于哈尔滨医科大学实验动物学部
主要试剂及仪器:甘草酸二铵注射液;10%水合氯醛;4%多聚甲醛等。
仪器:小鼠立体定位仪；小鼠显微手术操作器械；超低温冰箱-80℃, 100℃烤箱;电子天平；光学显微镜等。
1.2小鼠脑出血模型的制作:
小鼠脑出血模型制作，并断尾法取血，利用微量注射射仪汲取新鲜血液约50ul,迅速插入已钻好的孔内,向内进针5mm(相当于尾状核部位)以10ul/min的速度注血,留针10min后迟缓性退针(约30s),钻孔以骨蜡封闭,缝合头皮。整个过程保持无菌操作。实验组小鼠给予腹腔注射20mg/kg的甘草酸二铵进行干预,对照组只进行相关手术操作向腹腔内注射20mg/kg的生理盐水,之后每间隔24h重复处理一次。 实验组小鼠分别在术后6h、1d、2d、3d、7d评分后处死取脑。脑出血模型成功的标准为以脑组织石蜡切片在显微镜先观察到较明显的的血肿为准。
1.3分组处理:A、B、C、D、E实验组小鼠腹腔注射甘草酸二铵20ml/kg,每24小时重复注射一次,于脑出血后6h、1d、2d、3d、7d行相应评分后处死小鼠,F组小鼠模拟脑出血模型并腹腔注射20mg/kg生理盐水,每24小时重复注射一次, G组小鼠只进行相应手术操作并于腹腔注射20mg/kg生理盐水。并于实验组相应时间行神经评分后处死小鼠。
1.4相关观察指标
神经功能评分后处死小鼠并迅速取出大脑,分离脑组织，放置在电子天平中称量其湿重并记录，称重后将脑组织放置在100 ℃烤箱中24 h,取出并称量大脑干重。脑组织含水量= ( 脑组织湿重- 脑组织干重) /脑组织湿重× 100%
1. 5统计学方法:采纳SPSS19.0统计软件行统计学处置,数据以均数±标准误体现。用单因素方差分析方法对原始数据进行统计学分析,当P值<0.05则具备统计学意义。
2.结果:
脑水肿作为小鼠脑出血后较早出现的病理变化，在早至出血后20~45分钟即明显增加[1]。作为间接反应脑水肿的指标,小鼠脑含水量在脑出血不同时间点均有显著增高。如表1.3、脑出血后不同时间点甘草酸二铵治疗组在于生理盐水治疗组的脑组织含水量的相比中显著减轻，均有显著的统计学差异(p＜0.05)。
3讨论：
高血压性脑出血是由于脑组织中细小动脉由于高血压的长期压迫作用下并在已在长期慢性病程的基础上发生的出血。[2] 多引起脑实质内出血,是病死率和致残率都较高的疾病,其大多为基底节区出血,目前认可的标准是小脑幕上血肿量<30ml,小脑幕下血肿量<10ml时可以非手术医治而行药物医治,有研究发现脑出血后引起的脑水肿将会对脑组织产生第二次危害。
脑组织水肿是在脑出血后对脑组织造成损伤的表现之一,可导致高颅压、造成脑组织的二次损伤、严重着可导致脑疝并危及生命[3,4]。脑水肿可分为渗透压性、细胞性、血管源性和脑积水性四种水肿方式，渗透压性脑水肿原因多为颅脑外伤或鞍区占位性病变，引起相应激素分泌功能障碍，从而导致血管加压素大量释放，促肾上腺皮质激素分泌相对偏低而造成在低血钠的状态下出现尿Na+（＞780mmmol/24h）增多的一场现象。细胞性脑水肿过去成为细胞毒性水肿，多因为脑组织功能不足引起，从而造成细胞的严重损害。从而导致细胞膜上钠钾泵的功能失调，当损伤或是在缺氧的状态下，此酶的活性明显降低，从而影响到细胞内钠、钾离子在细胞内外的分布情况。有研究表明脑水肿对脑组织的各种细胞的影响中对星形胶质细胞影响最大，但其中的机制还需进一步的实验研究证实。血管源性水肿是临床上最为常见的类型，本研究结果阐明甘草酸二铵注射液在急性脑出血小鼠减轻脑水肿方面发挥着一定作用，具体机制需要进一步实验证实。
通过本实验的研究得知，甘草酸二铵在对急性脑出血带来的继发性损伤有一定抑制作用，其中具体的作用机制可能与降低脑水肿有一定相关性。
参考文献：
[1]Allan SM，RothwellNJ．Inflammation in central nervous system injury[J]．PhilosTrans R Soc Lond BBiol Sci，2003；358：1669—1677
[2]赵继宗，神经外科学（M），北京，人民卫生出版社，2014,561-562，
[3］Xi G，Keep ＲF，Hoff JT． Mechanisms of brain injury after intrace-rebral haemorrhage［J］． Lancet Neurol，2006，5( 1) : 53-63．
5) : 894-908．。
[4] Yang Y，Zhang Y，Wang Z，et al． Attenuation of acute phase in-jury in rat intracranial hemorrhage by cerebrolysin that inhibits brain edema and inflammatory response ［J］． Neurochem Ｒes，2015，41( 4) : 748-757．
论文作者:王德超1,李明军2通讯作者
论文发表刊物:《医师在线》2018年3月下第6期
论文发表时间:2018/6/29
标签：小鼠论文; 脑出血论文; 组织论文; 实验组论文; 甘草酸论文; 生理盐水论文; 脑水肿论文; 《医师在线》2018年3月下第6期论文;