广州医科大学附属第三医院 510150
【摘 要】目的：探讨DNA错配修复基因与大肠癌的相关性病例研究。方法：选取2014年03月~2016年03月我院收治的80例大肠癌患者，均给予PCR SSCP、DNA序列分析检测，分析患者hMSH2突变、微卫星不稳定性。结果：经检测，生殖系细胞hMSH2突变、肿瘤细胞hMSH2突变、DNA序列分析错义突变、DNA序列分析同义突变依次为8例、4例、3例及2例；患者微卫星不稳定12例。结论：大肠癌患者存在微卫星不稳定及hMSH2基因突变，与大肠癌发生具有明确相关性，可为大肠癌诊治提供参考。
【关键词】DNA错配修复基因；大肠癌；基因突变；病例；相关性
【中图分类号】R735.34【文献标识码】A【文章编号】2096-0867（2016）14-126-01
在人类DNA错配修复基因中，hMSH2（Human mut S homolog）为新发现之一，其属于啤酒酵母菌MSH蛋白与细菌MutS人类同源体，也是DNA错配修复系统的主成员[1]。在DNA错配修复系统中，hMLH、HPMS与GTBP等均与HNPCC存在明显相关性。根据近年来的研究，大肠癌的发生于hMSH2突变可能有关系[2]。本研究选取我院的80例大肠癌患者，对hMSH2外显子基因突变进行检测，探讨微卫星稳定性与Hmsh2基因突变与大肠癌发生的相关性，为临床提供有价值的参考，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选取2014年03月~2016年03月我院收治的80例大肠癌患者，男性46例，女性34例，年龄45~78岁，平均年龄（56.4±10.5）岁；病程1个月~4年，平均病程为（1.2±0.5）年，均取肝素抗凝血与手术切除肿瘤标本证实。所有患者均未接受放化疗治疗，将肝素抗凝血分离淋巴细胞产喉，行SDS与蛋白酶K消化，经石蜡包埋、组织切片、二甲苯脱蜡处理后，常规提取患者DNA。
1.2 方法
1.2.1 微卫星DNA检测 采用染色体2PD2S123微卫星标记物对患者行检测，取血中正常细胞，与肿瘤细胞基因组微卫星DNA变化。检测操作具体如下：在10lPCR反应体积重加入a-32P标记，以94℃、58℃、72℃为反应条件，依次反应1min、2min、1min，经35次循环后延长72℃反应条件反应7min[3]。在反应扩增产物中，混入2倍缓冲液，以热变性上样~变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，置于-70℃条件下放射自显影，仔细观察洗片。
1.2.2 hMSH2突变检测 hMSH2检测采用PCR-SSCP法，以外显子7、8、12、14、15为检测对象。PCR反应物与微卫星DNA检测反应物相同，反应条件为15℃40W3~h，凝胶置于-70℃放射自显影[4]。
1.2.3 DNA序列分析 外显子8/15突变者有5例，标记引物为r32-P，可于PCR扩增产物纯化后直接用于PCR检测，根据说明书规范操作。PCR双脱氧末端终止产物，采用变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳分析[5]。
1.3 统计学方法 采用SPSS16.0软件包进行数据分析与处理， 计数数据采用百分率（%）形式进行分析。
2 结果
2.1 微卫星DNA分析 本研究中，80例患者中，微卫星DNA患者不稳定12例，占比为15.0%（12/80）。
2.2 HMSH2突变检测结果 经检测，生殖系细胞hMSH2突变、肿瘤细胞hMSH2突变、DNA序列分析错义突变、DNA序列分析同义突变依次为8例、4例、3例及2例，占比依次为10.0%、5.0%、3.75%与2.5%。具体见表1。
2.3 DNA序列分析结果 外显子82例患者中，在生殖细胞中，1例患者第450位密码子出现错义突变，DNA变化为：TTT→TCT；氨基酸变化为：苯丙氨酸→丝氨酸。同时，1例患者第453位密码子出现错义突变，突变密码子为：ATG→ATC；氨基酸变化为：蛋氨基酸→异亮氨酸。外显子151例患者，第827位密码子出现同义突变，突变密码子为：GGG→GGT，但甘氨酸未发生变化。
3 讨论
大量的临床研究证实，肿瘤的发生及进展，由多基因参与，同时也是多阶段进展过程。人体细胞的系列机理具有稳定性，从而保证遗传物质的稳定性，而在DNA错配修复系统中，修复碱基错配属于系统中的一员。根据目前对大肠杆菌MMR系统的研究，甲基指导系统修复途径是最为活跃的，这一途径能够启动2Kb外切修复反应[5]。而这一反应则主要依赖MutSHL与Mutu基因产物。DNA突变中相关的蛋白质主要包括：核酸外切酶I、DNA解旋酶II、DNA多聚酶III全酶、单链DNA结合蛋白与DNA连接酶。
近年来，在研究中，DNAMMR引起了研究者的注意和重视。主要是因为发现了DNAMMR突变与HNPCC的相关性。HNPCC属于一种家族性大肠癌，根据西方国家权威统计数据，此种大肠癌约占大肠癌比例的5%，截至目前，我国商无资料可参考。由于文献报道中hMSH2突变位点不集中，外显子5,7~15研究均有报道可查。本研究以散发性大肠癌作为研究对象，主要对HMSH2的7、8、12、14与15外显子突变。检测结果显示：（1）微卫星DNA结果：80例患者中，微卫星DNA患者不稳定12例，占比为15.0%（12/80）；（2）HMSH2突变检测结果 ：生殖系细胞hMSH2突变、肿瘤细胞hMSH2突变、DNA序列分析错义突变、DNA序列分析同义突变依次为8例、4例、3例及2例，占比依次为10.0%、5.0%、3.75%与2.5%；（3）3 DNA序列分析结果 外显子82例患者中，在生殖细胞中，1例患者第450位密码子出现错义突变，DNA变化为：TTT→TCT；氨基酸变化为：苯丙氨酸→丝氨酸。同时，1例患者第453位密码子出现错义突变，突变密码子为：ATG→ATC；氨基酸变化为：蛋氨基酸→异亮氨酸。外显子151例患者，第827位密码子出现同义突变，突变密码子为：GGG→GGT，但甘氨酸未发生变化，提示DNA错配修复基因与大肠癌的发生具有明显的相关性。
综上所述，大肠癌是一种发病率和5年生存率较低的疾病，经研究，发现DNA错配修复基因与大肠癌发生有明显相关性。本研究证实了这一点，可为大肠癌的个性化治疗提供参考借鉴。
参考文献：
[1]钟子劭,王静.DNA错配修复基因与大肠癌相关性的研究进展[J].现代消化及介入诊疗,2015,24(04):452-454.
[2]赵小娟,高志芹.错配修复基因与大肠癌相关性的研究进展[J].临床肿瘤学杂志,2014,15（07）:664-668.
[3]刘兴顺,程牛亮.DNA错配修复系统基因多态性与大肠癌易感[J].医学综述,2016,24(09):1480-1482.
[4]项芳芳,毛高平.大肠癌与抑癌基因相关性的研究现状[J].世界华人消化杂志,2012,21(05):40-44.
[5]李金田,王亚平,张军妮等.错配修复基因变异与中国人散发性大肠癌发病年龄之间的关系[J].中国癌症杂志,2013,24（03）:12-14.
[6]王瑜,童晶,杨磊,丁彦青.大肠癌错配修复基因缺失与5-氟尿嘧啶敏感性的关系[J].广东医学,2014,06（05）:828-832.
作者简介：谭学贤 女 广东广州 病理科 本科学历 1985年10月29日 病理技师 广州市荔湾区多宝路63号广州医科大学附属第三医院病理科 510150 肿瘤学
论文作者:谭学贤
论文发表刊物:《系统医学》2016年14期
论文发表时间:2016/11/19
标签：突变论文; 密码子论文; 患者论文; 大肠癌论文; 相关性论文; 基因论文; 序列论文; 《系统医学》2016年14期论文;