长沙市第三医院 湖南长沙 410015
摘要：目的：研究探讨肺癌患者外周血AKAP12基因甲基化水平的检测结果及临床应用价值。方法：选取我院收治的肺癌患者（均为非小细胞肺癌）50例作为研究对象，采用MS-HRM法对患者外周血AKAP12基因甲基化水平进行检测，观察患者的甲基化程度，并比较其检测结果与肺癌患者的性别、年龄、病理分期、细胞分化程度之间的关系。结果：经MS-HRM法检测50例肺癌患者的外周血标本AKAP12基因甲基化情况，可见29例患者发生甲基化，占58.0%，其中，以甲基化程度在1%-20%的患者所占比例最高，为51.72%。分别比较肺癌患者的外周血AKAP12基因甲基化情况与患者病理资料的关系，可见患者的性别、年龄比较均不存在明显差异（P＞0.05）。但病理分期高（Ⅲ期、Ⅳ期）的外周血AKAP12基因甲基化的发生率显著高于病理分期低的患者；细胞分化程度为中高分化的患者甲基化发生率显著高于低分化的患者，比较均有统计学差异（P＜0.05）。结论：肺癌患者外周血AKAP12基因甲基化水平与肿瘤的进展之间息息相关。
关键词：肺癌；外周血AKAP12基因；甲基化水平
肺癌是临床上常见恶性肿瘤之一，也是造成患者死亡人数最多的肿瘤之一，尤其是随着环境污染等问题的加重，肺癌的发病率也逐渐升高，并有年轻化趋势[1]，但是肺癌早期症状并不十分显著，往往在发现就诊的时候已经发展为晚期，失去了治疗的最佳时机，即使经治疗后五年生存率也特别低。因而对肺癌患者的早期诊断具有十分重要的意义。通过血液标本中异常DNA的检测诊断疾病是临床诊断的新思路和新方法[2]。本文就我院收治的肺癌患者作为研究对象，探讨外周血AKAP12基因甲基化水平检测的临床应用价值。具体报告如下。
1资料与方法
1.1一般资料
选取我院收治的肺癌患者50例作为研究对象，所有患者均经手术病理检查确诊为非小细胞肺癌。其中，男29例，女21例，患者的年龄分布在26岁到77岁之间，平均年龄为（48.1±3.3）岁。按照临床病理分期标准，Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期的患者分别有7例、16例、25例和2例。按照细胞分化程度分，高中分化30例，低分化患者20例。
1.2方法
采集患者的外周血2-3ml，常规离心分离后，将获得的标本置于零下80℃的冰箱中进行保存。按照上海莱枫公司全血基因组DNA提取试剂盒的操作说明对外周血标本中的细胞游离DNA进行常规提取，并使用紫外分光光度计对DNA的浓度和纯度等进行测量DNA，要求其光密度值在1.80-2.00之间，调节DNA的浓度（10ng/μL），将DNA溶液置于零下20℃的冰箱中保存。取DNA样本1ng，严格按照杭州景杰生物科技公司生产的DNA甲基化修饰试剂盒的说明书对DNA进行甲基化修饰。在MethyPrimer软件的指导下，由上海生工生物工程服务有限公司公司对引物进行设计、合成。AKAP12启动自取甲基化扩增条件，经PCR基因扩增仪扩增后对其进行MS-HRM测定：使用Rotor-Gene 6000行高分辨率溶解曲线分析，记录溶解温度每上升0.1℃的值，并使用MS-HRM标准曲线图来对待测样本的甲基化程度进行测定。以不同浓度的甲基化标准品经MS-HRM方法做重复性检测，并对其相符程度进行观察。
观察患者外周血AKAP12基因的甲基化程度，并比较其检测结果与肺癌患者的性别、年龄、病理分期、细胞分化程度之间的关系。
1.3统计学方法
本次实验数据采用SPSS12.0软件进行统计学分析，其中计量资料对比采用t检验，计数资料对比采用卡方检验，以p＜0.05为差异有统计学意义。
2结果
HRM标准曲线的两次检测的重复性高，经MS-HRM法检测50例肺癌患者的外周血标本AKAP12基因甲基化情况，可见29例患者发生甲基化，占58.0%，其中，以甲基化程度在1%-20%的患者所占比例最高，为51.72%（15/29），其余依次是甲基化程度在21%-60%，甲基化程度在60%以上的患者，分别占44.83%（13/29）、3.45%（1/29）。
分别比较肺癌患者的外周血AKAP12基因甲基化情况与患者的性别、年龄之间的关系，可见男性患者与女性患者，老年患者（≥60岁）和非老年患者（＜60岁）之间均不存在明显差异，比较无统计学意义（P＞0.05）。但病理分期高（Ⅲ期、Ⅳ期）的外周血AKAP12基因甲基化的发生率显著高于病理分期低（Ⅰ期、Ⅱ期）的患者；细胞分化程度为中高分化的患者甲基化发生率显著高于低分化的患者，比较均有统计学差异（P＜0.05）。见表1。
3讨论
AKAP12全称为A激酶锚定蛋白12，属于A型激酶锚定蛋白家族的一员，早在上世纪九十年代初已被发现并在重症肌无力患者的血清中分离获得[3]，A激酶锚定蛋白12是蛋白激酶A和蛋白激酶C组成部分，正常情况下，其会在上皮组织中有不同程度的表达，在机体中主要发挥锚定重要信号蛋白的作用，并参与信号转导、G蛋白偶联受体蛋白信号转导、蛋白定向、细胞凋亡等一系列的过程。并有研究显示，在多种肿瘤中，均有A激酶锚定蛋白12基因表达水平降低，A激酶锚定蛋白含量下降的情况出现[4]，则提示A激酶锚定蛋白12基因的活性与肿瘤的发生、发展可能存在一定的关系。另一方面，肿瘤患者的外周血中高水平的游离DNA中，有相当一部分的来源是坏死、凋亡的肿瘤细胞，则通过检测肿瘤患者外周血中AKAP12基因的异常甲基化水平则可为肿瘤的诊断、治疗、预后判断提供一定的依据。
本文采用MS-HRM法对肺癌患者外周血 AKAP12基因甲基化水平进行检测发现58.0%的患者外周血中均有AKAP12基因甲基化的情况出现，其中96.55%的患者甲基化程度在60%以下。而将患者的外周血AKAP12基因甲基化水平与患者的性别、年龄、病理分期、细胞分化程度等进行相关性分析，则可见其与患者的年龄、性别并无显著关系，但不同病理分期、不同细胞分化程度的肺癌患者，其AKAP12基因甲基化水平差异十分显著，病情越严重，则甲基化发生率越高，提示通过检测肺癌患者外周血AKAP12基因的甲基化情况可以对肺癌的分期和恶性程度等进行评估。
参考文献：
[1]姚群峰，陈馨，薛津若，等.肺癌患者MTHFR基因多态性与抑癌基因过甲基化的关系[J].大家健康，2010，37（5）：531-532.
[2]胡灼君，胡宏波，刘大鹰，等.p16 基因启动子甲基化联合检测在肺癌早期诊断中的临床意义[J].中国病理生理杂志，2009，25（10）：1941-1942.
[3]廖和和，张云锋，吴树强.肺癌患者外周血AKAP12基因甲基化水平的检测及意义[J].重庆医学，2014，43（15）：1834-1835.
[4]韩丰立，辛涛，宋立强，等．非小细胞肺癌中AKAP12基因的表达与甲基化研究［J］．现代肿瘤医学，2014，22（8）：1815-1816．
论文作者:谭双香
论文发表刊物:《健康世界》2015年11期供稿
论文发表时间:2016/2/1
标签：患者论文; 肺癌论文; 基因论文; 甲基化论文; 外周血论文; 程度论文; 病理论文; 《健康世界》2015年11期供稿论文;