湖南省耒阳市第三人民医院 428100
摘要：目的：探究不同加样量对酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）检测结果的影响。方法：选取120例确诊乙型肝炎患者的HBcAb阳性标本，并选择同期来院健康体检者120例HbcAb阴性标本，分别采用6种加样量进行ELISA检测，分析检测结果。结果：阳性组患者酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测乙型肝炎的病毒核心抗体（HBcAb）的阳性率为100%，假阴性率为0%，不同加样量的检测结果无显著性差异（P>0.05）；阴性组中常规加样量的阴性率为100%，假阳性率为0%，第2～6组的假阳性率分别为0.83%、8.33%、15.83%、18.33%、27.50%，与第1组相比，第2组加样量的检测结果与第1组无显著性差异（P>0.05），第3～6组与第1组相比差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论：采用酶联免疫测定法检测乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）时，不同加样量对检测结果具有显著影响，实际操作中可直接采用10uL血清进行检查，对检测结果无影响。
关键词：加样量；酶联免疫吸附测定法；乙型肝炎；病毒核心抗体
酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测具有操作方便、检测迅速等优势，成为临床检测常用方法之一[1，2]。但是ELISA检测结果容易受到加样量的影响而导致初检与复检符合率较低，因此限制了应用ELISA进行批量检测的应用[3]。在应用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测乙型肝炎的病毒核心抗体（HBcAb）时，一般常采用1：30的稀释方法对待测标本进行检查，但是这种检测方法复杂，而且会存在人为误差因素的干扰，对检测结果精度和速度均会产生影响[4，5]。为了探究不同加样量对ELISA检测HbcAb的影响，笔者进行了相关分析，现将报道如下。
1 资料与方法
1.1 临床标本
选取2014年1月至2015年6月我院确诊乙型肝炎的120例患者的病毒核心抗体（HbcAb）阳性标本以及同期来院健康体检者120例HbcAb阴性标本作为本研究的标本。其中120例乙型肝炎患者均已经过临床病理检查确诊，健康体检者则均无患有其他感染性疾病。
1.2 研究方法
本次研究采用的酶标仪科华ST－360W，洗板机科华96W型，所采用的乙型肝炎病毒核心抗体（HbcAb）试剂为上海科华公司生产的试剂盒。加样方式分为6种，其中第1种加样方式为常规检测加样量，即按照1：30倍稀释；第2～6种加样方式则是直接加入10uL、20uL、30uL、40uL、50uL的血清进行检测。每次实验均连续做阳性和阴性的对照试验，试验过程中严格按照试剂盒的使用说明书进行操作。
1.3 统计学方法
采用SPSS19.0统计学分析软件进行相关数据处理，计数资料组间比较采用χ2检验，以P<0.05作为差异有统计学意义的标准。
2 结果
2.1 阳性组检测结果分析
阳性组患者酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测乙型肝炎的病毒核心抗体（HBcAb）的阳性率为100%，假阴性率为0%，不同加样量的检测结果无显著性差异（P>0.05），详见表1。
3 讨论
酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）过程中加入的待测样本与酶标记物的时间是同时的，这样就能保证待测标本与酶标记物能够处于相同的载体抗原竞争的水平，从而保证了检测结果的精确性[6-8]。目前临床上常采用的酶联免疫吸附测定法检测乙型肝炎病毒核心抗体所采用的检测方法是将标本进行1：30的稀释，也就是取10uL血清加入到已经备好的290uL生理盐水中混合。这种加样方法不仅需要检测人员精确的测量，而且检测步骤复杂，不仅存在人为因素的干扰，在批量检测时将加重检测人员的工作量[9，10]。
本组研究采用6种加样量进行酶联免疫吸附测定法检测乙型肝炎病毒核心抗体的效果研究。结果表明采用直接加入10uL血清进行检测的第2种加样量与常规加样量的检测结果无明显差异性，而分别加入20uL、30uL、40uL、50uL的血清第3～6种加样量的检测结果则与第1种检测结果具有明显的差异性，提示采用直接加入20uL、30uL、40uL、50uL的血清的检测方法会影响到检测结果的精度。分析认为，由于加入血清量过度后导致血清与乙型肝炎核心抗原发生非特异性结合，在检测中加入酶标抗体后会导致其与乙型肝炎核心抗原的结合率降低，因此造成阴性组样本的假阳性率升高。考虑到不同的检测需求应该采用合理的检测加样量，若在进行批量检测时可以采用直接加入10uL血清的检测方式进行酶联免疫吸附测定法检测，这样获得的数据不会对检测结果造成较大的影响。
综上所述，采用酶联免疫测定法检测乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）时，不同加样量对检测结果具有显著影响，实际操作中可直接采用10uL血清进行检查，对检测结果无影响。
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论文作者:何泽平
论文发表刊物:《健康世界》2015年18期
论文发表时间:2016/2/24
标签：乙型肝炎论文; 抗体论文; 核心论文; 免疫论文; 血清论文; 阳性论文; 病毒论文; 《健康世界》2015年18期论文;