丁玉峰 刘世芬 程振田
[摘 要] 目的:探讨注射用甲磺酸桂哌齐特能否减少局灶性缺氧大鼠的脑梗塞面积。方法: 建立局灶性缺氧大鼠模型，分别为伪手术组、模型组、马来酸桂哌齐特注射液阳性对照组（29 mg.kg-1）及注射用甲磺酸桂哌齐特高（45 mg.kg-1）、中（22.5 mg.kg-1）、低（11.25mg.kg-1）三个剂量组，观察神经症状评分、梗塞面积、梗塞率等指标。结果:与模型对照组相比，注射用甲磺酸桂哌齐特45、22.5 mg.kg-1剂量和马来酸桂哌齐特注射液29 mg.kg-1静脉注射给药，可明显降低局灶性脑缺血模型大鼠大脑梗塞面积（0.12±0.02 vs 0.13±0.02 g；0.12±0.01 vs 0.13±0.02 g；0.12±0.01 vs 0.13±0.02 g；p均<0.05）和梗塞率（17.1±2.8 vs 19.7±1.9 %；18.2±1.3 vs 19.7±1.9%；17.8±1.9 vs 19.7±1.9%；p均<0.05），明显减轻模型大鼠的神经症状（3.0±1.2 vs 4.0±0.7；3.2±0.9 vs 4.0±0.7；3.0±1.1 vs 4.0±0.7；p均<0.05）；11.25mg.kg-1剂量亦有一定的作用，但与对照组比较无显著性差异（P>0.05）。结论: 注射用甲磺酸桂哌齐特可显著降低局灶性脑缺血模型大鼠大脑梗塞面积和梗塞率，明显减轻模型大鼠的神经症状。
[关键词]甲磺酸桂哌齐特 局灶性缺氧 大鼠
DOI:10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2014.48.020
作者单位： 262500，山东青州，山东省潍坊市益都中心医院
The Effect of Methanesulfonic Acid Cinepazideon on Infarction Area of Focal Hypoxia Rats
Ding Yufeng, Liu Shifen, Cheng Zhentian
Abstract: Objective To investigate the effect of methanesulfonic acid cinepazideon on the infarction area of focal hypoxia rats. Methods 60 SD rats were randomly divided into six groups: model group, sham group, cinepazide maleate treatment group (29 mg.kg-1) and three methanesulfonic acid cinepazideon treatment group (45 mg.kg-1, 22.5 mg.kg-1, 11.25mg.kg-1 respectively in each group). Infarction area and neurologic function were calculated after treatment. Results Comparing with the model group, the infarction area (0.12±0.02 vs. 0.13±0.02 g; 0.12±0.01 vs. 0.13±0.02 g; 0.12±0.01 vs. 0.13±0.02 g; p all<0.05) and infraction rate （17.1±2.8 vs. 19.7±1.9 %; 18.2±1.3 vs. 19.7±1.9%；17.8±1.9 vs. 19.7±1.9%；p all <0.05）were significantly reduced in groups of methanesulfonic acid cinepazideon treatment group (45 mg.kg-1, 22.5 mg.kg-1) and cinepazide maleate treatment group (29 mg.kg-1). The neurologic function (3.0±1.2 vs. 4.0±0.7; 3.2±0.9 vs. 4.0±0.7; 3.0±1.1 vs. 4.0±0.7; p all<0.05）were also improved in groups of methanesulfonic acid cinepazideon treatment group(45 mg.kg-1, 22.5 mg.kg-1) and the cinepazide maleate treatment group. The methanesulfonic acid cinepazideon treatment group (11.25mg.kg-1) was also effective in some degree, but with no significant diference compred with the model group. Conclusion Methanesulfonic acid cinepazideon can significantly reduce the infarction area and infarction rate of focal hypoxia rats, and improve their neurological function.
Key words: methanesulfonic acid cinepazideon; focal hypoxia; rat
脑梗塞是危及人类健康的主要疾病之一，其导致的致死、致残给家庭带来沉重的经济压力和精神负担。脑梗塞表现为局灶性脑组织的缺血坏死，因而在疾病发生后给予积极的改善微循环治疗能够降低致死、致残的发生。桂哌齐特具有弱的钙离子拮抗作用，能够扩张脑血管，具有一定的抑制血小板聚集、抗自由基的作用，能够改善微循环灌注。临床研究发现，马来酸桂哌齐特注射液治疗急性脑梗塞的总有效率达90.19%，显著高于对照组[1]，另有研究也发现，马来酸桂哌齐特对急性脑梗塞患者的神经功能恢复有一定的疗效[2]。然而马来酸桂哌齐特因存在潜在的安全性风险（粒细胞缺乏和白细胞减少）限制了临床应用。甲磺酸桂哌齐特就是根据已上市的马来酸桂哌齐特改变酸根而来。目前关于甲磺酸桂哌齐特注射液对脑梗塞的基础性机制研究尚未有报道，因而，本研究主要探讨注射用甲磺酸桂哌齐特是否对减少局灶性缺氧大鼠的脑梗塞面积有效。
1. 材料与方法
1.1 材料 注射用甲磺酸桂哌齐特（济南地维医药科技有限公司，62.5mg/支，060801）、马来酸桂哌齐特注射液（北京四环制药有限公司，2ml:80mg，20060505）、红四氮唑（天津市科密欧化学试剂开发中心）、磷酸氢二钾（天津市广成化学试剂有限公司）、水合氯醛（青岛宇龙海藻有限公司）、SD大鼠（250-300g，山东鲁抗医药股份有限公司）、AY220型电子分析天平（岛津有限公司）、YB502型电子天平（上海海康电子仪器厂）。
1.2动物分组 SD大鼠60只，按体重随机分为6组，分别为伪手术组、模型组、马来酸桂哌齐特注射液阳性对照组，注射用甲磺酸桂哌齐特高、中、低三个剂量组，每组10只。
1.3 给药剂量选择及依据 阳性对照组给药：马来酸桂哌齐特注射液，临床用药一次4支（320mg）,按成人70kg和大鼠200g等效剂量折算系数法可得大鼠用药剂量为：320mg×0.018×5≈29mg.kg-1，故本试验马来酸桂哌齐特注射液用药剂量为29mg.kg-1。
注射用甲磺酸桂哌齐特组给药：本品是由马来酸桂哌齐特注射液改变酸根制成的冻干粉针剂，每支62.5mg，参考马来酸桂哌齐特注射液临床用量，按成人70kg和大鼠200g等效剂量折算系数法可得大鼠用药剂量为：250mg×0.018×5=22.5mg.kg-1，此剂量可作为试验中剂量，故本试验可设注射用甲磺酸桂哌齐特高、中、低剂量分别为45、22.5、11.25mg.kg-1。
1.4 实验过程 将动物用水合氯醛（350mg.kg-1）腹腔注射麻醉，将大鼠仰卧固定，沿颈正中作约2cm长皮肤切口，分离出右侧颈总动脉并穿缝线2根备用，再分离出颈外动脉，结扎之。在颈外动脉下方小心分离出颈内动脉。在已分离的颈总动脉近心端结扎，远心端用微动脉夹暂时阻断血流，于颈总动脉上剪一小口，将鱼线插入小口，将动脉夹取下，将鱼线缓缓推入至前脑动脉（约20mm）再往回拉约2mm即至大脑中脑动脉口，长约18mm（自颈内外动脉分叉处算起），用缝线结扎固定鱼线。缝合肌肉和皮肤，手术完毕后立即给予相应的药物溶液10ml.kg-1，伪手术组和模型组给予等容积的生理盐水。12h后对其神经症状进行评分， 24h后将动物断头取脑，置于冰冷的生理盐水（0-4℃），10min后，去嗅球、小脑及低位脑干后，沿冠状切5片，将其置于5ml溶液中（内含1.5ml2%TTC及0.1mmol/LK2HPO4），37℃下避光温孵30min（染色），取出放入10%福尔马林溶液中避光保存。正常脑组织呈玫瑰红色，缺血区呈白色。根据由重量求面积法，求出梗塞范围（重量表示）。
1.5 神经症状评分标准 0分：正常，无神经功能缺损； 1分：左侧前爪不能完全伸展，轻度神经功能缺损；2分：行走时，大鼠向左侧（瘫痪侧）转圈，中度神经功能缺损； 3分：行走时，大鼠身体向左侧（瘫痪侧）倾倒。重度神经功能缺损； 4分：不能自发行走，有意识丧失。5分：死亡。
1.6 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件，实验数据以±s表示，采用单因素方差分析及Tukey’s post-hoc 分析。以P≤0.05为有统计学差异。
2. 结果
本研究结果发现，注射用甲磺酸桂哌齐特45 mg.kg-1、22.5mg.kg-1剂量和马来酸桂哌齐特注射液29mg.kg-1静脉注射给药，可明显降低局灶性脑缺血模型大鼠大脑梗塞面积和梗塞率，明显减轻模型大鼠的神经症状，与模型对照组比较有显著性差异（P<0.05）；11.25mg.kg-1剂量亦有一定的作用，但与对照组比较无显著性差异（P>0.05）。具体结果见表1所示。
表1注射用甲磺酸桂哌齐特对局灶性脑缺血模型大鼠梗塞The面积及神经症状的影响（n=10）
Tab 1 The effect of methanesulfonic acid cinepazideon on infarction area and neurological symptoms of rats（n=10）
*P<0.05与模型对照组比较
*P<0.05 compare to model group.
3. 讨论
本研究结果显示，注射用甲磺酸桂哌齐特可显著降低局灶性脑缺血模型大鼠大脑梗塞面积和梗塞率，明显减轻模型大鼠的神经症状。
最新的《中国心血管报告》指出，全国心血管病人数约为2.3亿，每年约有350万人死于心血管病。2010-2030年，心肌梗死、脑卒中、糖尿病等血管相关疾病的负担预计增长近50%，而脑梗塞引起的致死、致残性事件为国家和家庭带来沉重的医疗负担和经济压力。脑梗塞常见的病理生理基础为局部血管病变，导致管腔狭窄、管壁增厚、斑块形成，在诱发因素的作用下，斑块破裂，造成血管闭塞，导致脑梗塞的发生，因而，如何改善脑部供血、改善梗塞周围损伤脑组织的缺血状态，成为减轻脑梗塞后遗症的重要治疗手段。
桂哌齐特具有弱的钙离子拮抗作用，能够扩张脑血管，具有一定的抑制血小板聚集、抗自由基的作用，能够改善微循环灌注。既往的临床研究发现马来酸桂哌齐特注射液能够改善急性脑梗塞的症状及神经功能[1,2]。在颅脑损伤方面[3,4]，马来酸桂哌齐特能改善急性中重型颅脑损伤后脑血管痉挛，减轻伤灶脑水肿体积，提高患者的清醒率和预后良好率，并且患者的生活质量有较大改善，癫痫及其他不良事件发生率低，提示了马来酸桂哌齐特对脑功能的恢复起到了重要作用。
然而马来酸桂哌齐特因存在潜在的安全性风险（粒细胞缺乏和白细胞减少）限制了临床应用，此外，马来酸盐溶解性好，但其稳定性不及甲磺酸盐，既往文献报道[5]马来酸桂哌齐特稳定性欠佳，见光易反应生成顺式马来酸桂哌齐特而影响疗效。甲磺酸桂哌齐特就是根据已上市的马来酸桂哌齐特改变酸根而来，系国家四类新药。邹浩军等人[6]的研究发现甲磺酸桂哌齐特能够不同程度的降低缺血再灌注损伤大鼠模型的脑含水量和脑指数，减轻脑水肿，并且能够降低氧化应激的水平。在本研究中，我们发现甲磺酸桂哌齐特能够显著降低脑梗塞大鼠模型的梗塞面积和梗塞率，并且能够改善神经功能症状，提示甲磺酸桂哌齐特在急性脑梗塞中的治疗应用前景。然而，本研究中，我们并没有进行深入的机制探讨，如局部脑组织的氧化应激水平的测定，需要进一步深入的完善机制研究，从而真正服务于临床诊治。
综上，注射用甲磺酸桂哌齐特可显著降低局灶性脑缺血模型大鼠大脑梗塞面积和梗塞率，明显减轻模型大鼠的神经症状，具体机制需要进一步的探讨。
参考文献
[1] 程琼,雷惠新,江秀龙等.马来酸桂哌齐特注射液治疗急性脑梗死的临床研究[J].海南医学,2003,15:88-90.
[2] 刘江.马来酸桂哌齐特注射液治疗急性脑梗死的临床观察[J].中华临床医学月刊,2003, 14(11):1303-1304.
[3] 彭彪.马来酸桂哌齐特治疗急性中、重度颅脑损伤的临床观察[J].中华临床医学研究杂志,2003,76(9):12589.
[4] 王旭辉.马来酸桂哌齐特对急性中重型颅脑损伤患者的疗效观察[J].神经疾病与精神卫生,2004,4(2):96-98.
[5] 陈景生,都健,孟庆伟等.马来酸桂哌齐特冻干制剂制备及质量稳定性研究[J].化学与生物工程,2009,6(26):48-50.
[6] 邹浩军,林莉莉,魏伟.甲磺酸桂哌齐特对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用及其机制的研究[J].江苏医药,2013,39(10):1144-1146.
（收稿日期：2014-10-08）
（本文编辑：陈新石）
论文作者:丁玉峰,,刘世芬,,程振田
论文发表刊物:《中华医学杂志》2014年12月48期
论文发表时间:2015/7/22
标签：马来论文; 大鼠论文; 注射液论文; 甲磺酸论文; 剂量论文; 模型论文; 注射用论文; 《中华医学杂志》2014年12月48期论文;