黑龙江省塔河县十八站医院
【摘 要】沙门菌属是一群通常寄居在人或动物肠道中，形态、培养、生化反应和抗原结构相似的革兰阴性杆菌。广泛分布于自然界，可从人和世界各地所有动物中分离得到。沙门菌属是肠杆菌科中最复杂的菌属。
【关键词】沙门菌属；检验
1生物学特性
1.1形态染色
革兰阴性直杆菌，较细长，大小为宽0．6～2．0μm，长l．0～4．0μm。多具有周身鞭毛，能运动，有时也会出现无鞭毛的突变型。无芽孢，无荚膜，有菌毛。
1.2培养和生化反应
兼性厌氧，最适生长温度35～37℃，最适生长pH为6．8～7．8。对营养要求不高，在普通营养琼脂上生长的菌落为圆形、光滑、湿润、半透明、边缘整齐的S型菌落。在肠道选择性培养基上菌落为小至中等，透明或半透明，乳糖不发酵，与志贺菌的菌落相似，有些能产生硫化氢的菌株，在ss琼脂上形成中心黑色的菌落。对葡萄糖、麦芽糖和甘露醇发酵，不发酵乳糖和蔗糖。
2细菌学检验
2.1标本采集与注意事项
根据疾病的类型、病情和病程的不同分别采集不同的标本。分离培养原则上于发病第1周采血，第2周取粪便或尿液，全程均可做骨髓培养。副伤寒病程短，采样时间可相对提前。血清学诊断应在病程的不同时期分别采集2—3份标本。①血液和骨髓液：肠热症患者，在病程第1周内采取静脉血液；第1～3周内亦可采集骨髓液。②粪便或直肠拭子：伤寒患者，在病程2周后；胃肠炎患者在急性期、早期采集新鲜粪便，并且最好在药物治疗前，取粪便黏液、脓血或可疑部分。带菌者用直肠拭予采集直肠表面黏膜。③尿液和其他体液：应无菌导尿或采集中段尿、胆汁、脑脊液、胸腔积液、腹水等，3 000转／分钟离心30分钟，取沉淀做培养用。④呕吐物或食物：固体的呕吐物或食物，先用无菌剪刀剪碎，放人加细砂的乳钵中进一步磨碎，再加入l0倍量的无菌生理盐水混匀，备接种用。液体标本可直接用于培养。
2.2检验方法
2.2.1直接检测
①显微镜检查：为革兰阴性杆菌。同时排除肠球菌。②检测抗原：采用SPA协同凝集试验、胶乳凝集试验、对流免疫电泳和ELISA等方法，来快速早期诊断粪便、血液或尿液中的沙门菌等可溶性抗原。③检测核酸：采用分子生物学技术，基因探针可检出标本中的伤寒沙门菌量为l 000个，而PCR法对标本中含10个伤寒沙门菌就可检出。
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2.2.2分离培养
分离培养可根据具体条件选用合适的培养基。
①血液和骨髓液：静脉血5 ml或骨髓液0．5 ml分别注入50 ml的胆汁葡萄糖肉汤或胰化酪蛋白大豆肉汤中，35～37％培养，每日观察，阳性者多在2～4天内出现。②粪便或肛拭：最好做床边接种，如不能立即培养，则用卡一布运送培养基或甘油盐水保存液送检。一部分粪便接种于增菌液内，另一部分标本直接划线接种于肠道选择或鉴别培养基上，以提高标本检出率。③其他非粪便标本：各种体液取其离心后的沉淀物，各种分泌液拭子以及经预处理后的呕吐物或食物等标本，接种于增菌液或划线接种于肠道选择或鉴别培养基上。这些材料，除注意沙门菌的培养外，还应注意其他病原菌的分离培养。
3．鉴定与分型
3.1生化鉴定
疑为沙门菌的可疑菌落，可用手工或商品化的生化反应试剂盒进行生化鉴定，常用三糖铁琼脂（TSIA）和赖氨酸铁琼脂来初步鉴定。并做触酶、氧化酶及硝酸盐还原试验；再以沙门菌诊断血清做玻片凝集试验即可作出初步鉴定。本菌在TSIA上典型的生化模式为：碱（K）／酸（A）、葡萄糖产气，硫化氢阳性（K／A++），枸橼酸盐+／-，脲酶-，吲哚-，动力+，V-P阴性，鸟氨酸+。少数菌株为乳糖发酵型，呈A／A，这些菌株的硫化氢往往阴性。在赖氨酸铁琼脂上的典型的生化模式为K／K和硫化氢阳性，但亦存在赖氨酸和硫化氢阴性的菌株（甲型副伤寒沙门菌）。凡临床分离株乳糖、吲哚阳性，或脲酶阳性者，均不考虑为沙门菌。初步反应疑为沙门菌的菌株须经全面生化反应证实和血清学分型后才能发出报告。
3.2血清学分型
用抗血清对所分离菌种的菌体O抗原、表面Vi抗原、第l相和第Ⅱ相H抗原进行凝集试验（0：Vi：第l相H：第Ⅱ相H）。沙门菌的血清学分型鉴定，应在生化反应符合沙门菌属定义的基础上进行。鉴定试验步骤：首先用A～F多价O抗血清与沙门菌分离株做玻片凝集试验，进行分群（血清群A、B、cl、c2、D等），确定其是否在A～F 6个O群内。因为95％以E的沙门菌临床分离株都属A～F群，这样可得到一个快速、初步的鉴定结果，对临床早期诊断有重要意义。多价抗血清凝集之后再用分别代表每个O血清群的单价因子血清定群，有5种重要的临床分离株：甲型副伤寒沙门菌、鼠伤寒沙门菌、肖氏沙门菌、猪霍乱沙门菌和伤寒沙门菌分别属于A、B、B、C和D血清群。再按照确定的0群，分别用H因子血清检测第1相和第Ⅱ相H抗原，综合0、H及Vi因子血清的检查结果，判断沙门菌的血清型。
5细菌鉴别
沙门菌在克氏双糖管中，斜面不发酵和底层产酸产气（但伤寒沙门菌产酸不产气），硫化氢阳性或阴性，动力阳性，可与大肠埃希菌、志贺菌等鉴别。在双糖铁培养基上，沙门菌属与变形杆菌属生化反应很相似，为了鉴别这两属细菌，可将双糖铁斜面上的培养物接种到尿素培养基中。37℃培养2～4小时，若为变形杆菌，则因迅速分解尿素产生碱性反应，使培养基变红；沙门菌因不分解尿素，故在尿素培养基中，虽然培养24小时，但培养基仍不变红。以此相鉴别。
参考文献：
[1]杨福江，王玉平，吴永宁，沈建忠.沙门菌变性高效液相色谱法鉴定和分型研究[J].现代预防医学，2011年04期
[2]李爱华.沙门菌属stn基因LAMP快速检测方法的研究[D].郑州大学，2013年
论文作者:陈伟宏
论文发表刊物:《航空军医》2016年第6期
论文发表时间:2016/6/15
标签：沙门论文; 血清论文; 培养基论文; 标本论文; 粪便论文; 生化论文; 抗原论文; 《航空军医》2016年第6期论文;