黑龙江省医院 耳鼻喉科 150036
【摘 要】目的 研究基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinases，MMP-9）和基质金属蛋白酶组织抑制剂（issue inhibitors of matrixmetalloproteinases，TIMPs），在鼻腔内翻性乳头状瘤中表达及其意义，探讨其在鼻腔内翻性乳头状瘤形成中的作用。方法 观察组为30例经鼻内镜手术治疗鼻腔内翻性乳头状瘤的患者的内翻性乳头状瘤组织；对照组为15例行鼻中隔矫正术患者（既往无慢性鼻一鼻窦炎病史）钩突处粘膜作为正常对照。所选患者术前6周未使用全身或局部糖皮质激素及其他鼻用药物，用免疫组化法检测两组标本中MMP -9和T1MP-1的蛋白表达情况，并对结果进行统计学分析。结果 基质金属蛋白酶-9（MMP -9）在鼻腔内翻性乳头状瘤中表达较正常钩突处粘膜明显增高，基质金属蛋白酶组织抑制剂TIMPs 在鼻腔内翻性乳头状瘤中表达较正常钩突处粘膜明显减少。结论 MMP -9在鼻腔内翻性乳头状瘤组织中的高表达，TIMP1在鼻腔内翻性乳头状瘤组织中的低表达或不表达，可能是促进鼻腔内翻性乳头状瘤形成和发展的一个重要因素。
【关键词】MMP-9；TIMP-1；鼻腔内翻性乳头状瘤；免疫组化法检测
Expression of matrix metalloproteinase -9 in nasal inverted papilloma. Jin-hua，Zhang Zhi-guang，Gao Hui Jiao Yin Hui.Wang.Ran An.the Department of ENT of Heilongjiang Hospital，Heilongjiang Harbin，150036，China
Corresponding：Gao Zhi-guang，Email：940012617@qq.com
[Abstract] Objective To study the matrix metalloproteinase -9（MMP -9）expression and significance in nasal inverted papilloma，investigate itsfunction in the formation of nasal inverted papilloma. MethodsThe observation group consisted of 30 patients with nasal endoscopic operation for treatment of nasal inverted papilloma in patients with inverted papilloma tissue；The control group consisted of 15 cases of submucous correction of nasal septum in patients（those without chronic nasal sinusitis history a）uncinate process mucosa as control at.The selected patients didn’t use systemic or localglucocorticoid hormone and other nasal drugs before 6 weeks，MMP -9 protein expression of two groups of specimensare detected with the method of immuno detection，and the results were statistically analyzed. Results The matrix metalloproteinase -9（MMP -9）was significantly higher than that ofnormal mucosa of uncinate. Conclusion MMP -9 in nasal inverted papilloma tissues with highexpression may be an important factorof the promotion of nasal inverted papilloma and of the formation and development of process at higherexpression in nasal inverted papilloma.
[key word]MMP一9；Nasal inverted papilloma；Ixrmmnohistochemistry
鼻腔内翻性乳头状瘤多发生于鼻窦或鼻腔侧壁粘膜，多具有破坏力，侵入颅内者较少见，其病因及发病机制尚不清楚。多数学者认为鼻腔内翻性乳头状瘤是一种良性型的真性肿瘤，容易复发和恶变成癌，如未发生恶变者，鼻窦骨壁一般不发生明显破坏[1]。基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinases，MMP-9）通过降解基底膜的主要成分IV型胶原，参与细胞外基质的代谢，在许多组织重建中发挥重要的生理作用。而MMP-9活性异常，可大量破坏细胞外基质成分，在诸如牙周病、肿瘤浸润及转移、肝纤维化、骨关节病和风湿性关节炎等的病理改变中起着重要的重要[2，3，4]。组织抑制剂（ T1MPs）是近年来发现的抑制MMPs活性的多功能因子家族，是一组低分子量的糖蛋白，广泛分布于组织和体液中，可由成纤维细胞、上皮细胞、内皮细胞等产生和分泌。已发现的T1MPs 酶有 5种，是组织中 MMPs 主要的内源性抑制因子，能特异地抑制 MMPs家族的基质降解酶，通过对 MMPs的抑制在正常细胞外基质重塑和各种病理过程中，如肿瘤的侵袭、扩散转移、组织纤维化中发挥重要作用。本研究通过检测MMP -9和TIMP1在鼻腔内翻性乳头状瘤组织中的表达，探讨MMP -9和TIMP1在鼻腔内翻性乳头状瘤发病机制中的作用及意义。
1. 对象与方法
1.1标本来源
2015年10月一2016年12月在我科住院接受鼻内镜手术并且术后定期随访（>3个月）的30例鼻腔内翻性乳头状瘤患者。男21例，女9例；年龄40一68岁，平均51岁。选择标准：单侧鼻部CT检查阳性，在内镜检查和手术中发现鼻腔内翻性乳头状瘤来源鼻腔侧壁。另取15例行鼻中隔矫正术患者（既往无慢性鼻一鼻窦炎病史），男10例，女5例；年龄20一54岁，平均34岁。钩突处粘膜作为正常对照。所选患者术前6周未使用全身或局部糖皮质激素及其他鼻用药物。
1.2免疫组化染色
观察组标本取自鼻腔内翻性乳头状瘤组织，对照组标本取自鼻中隔矫正术患者钩突处粘膜。术中获取鼻腔内翻性乳头状瘤组织后行石蜡包埋，连续切片，制成4 um厚的切片。常规苏木精伊红染色。免疫组织化学染色：组织切片常规脱蜡至水，0. 1 mol/L磷酸盐缓冲液（PBS pH 7. 4）洗3次，每次3 -5min微波炉构椽酸盐缓冲液抗原修复lOmin后，免疫组织化学染色方法参照试剂盒说明书依次进行，其中一抗MMP-9和一抗 TIMP1分别用PBS以1：250的浓度稀释，DAB显色，苏木精复染，脱水，透明，中性树胶封片。用PBS代替一抗作阴性对照，以已知的阳性片作为阳性对照。免疫组织化学结果MMP-9和TIMP1阳性标准为在细胞浆中呈清晰棕黄色颗粒，以胞浆为主，计数100倍镜下随意5个视野阳性表达细胞数所占的比例，阳性细胞数：<10% 为阴性（一）；11%一25%为低度表达（+）；26%-50%中度表达（++）；>50%为强阳性表达（+++）。观察 MMP-9和TIMP1的表达，判定结果并进行统计学的分析。
1.3统计学分析
应用SPSS15统计软件处理数据。2种组织MMP-9和TIMP1阳性率的比较采用X2检验，检验水准ɑ= 0 05半定量分析采用秩和检验，P<0.05为有统计学意义。
2 结果
免疫组化染色结果鼻腔内翻性乳头状瘤组织中MMP-9阳性染色为胞浆中出现棕黄色颗粒（图2）。鼻腔内翻性乳头状瘤组织中TIMP1染色为胞浆中少量出现棕黄色颗粒（图1）。鼻腔内翻性乳头状瘤与正常鼻腔钩突黏膜组织中MMP-9阳性表达分别为27例（90％）、3例（20％），半定量分析中，鼻腔内翻性乳头状瘤与正常鼻腔钩突黏膜组织鼻腔内翻性乳头状瘤与正常鼻腔钩突黏膜组织 MMP-9比较差异有统计学意义（z为- 4.356，P<0.001）（表1）。鼻腔内翻性乳头状瘤与正常鼻腔钩突黏膜组织中TIMP1阴性为20例（66％）、12例（80％），半定量分析中，鼻腔内翻性乳头状瘤与正常鼻腔钩突黏膜组织鼻腔内翻性乳头状瘤与正常鼻腔钩突黏膜组织 MMP-9比较差异有统计学意义（z为- 4.356，P<0.001）（表2）。
图-1 图-2
图-1（鼻腔内翻性乳头状瘤T1MP1免疫染色阳性定位在细胞浆，少量呈棕黄色颗粒状 LSAB×100）
图-2（鼻内翻性乳头状瘤MMP-9免疫染色阳性定位在细胞浆，呈棕黄色颗粒状 LSAB×100）
3 讨论
MMP-9作为基质金属蛋白酶家族重要成员之一，酶底物特性表现广泛能对细胞外众多基质成分进行降解包含基底膜关键成分：Ⅳ型胶原。相关研究发现，肿瘤细胞内MMP-9的表达情况和肿瘤细胞侵袭转移能力存在相关性，Sangi[5] 在对鼻咽癌的研究中发现，MMP-9阳性表达率在淋巴结转移组中明显高于无淋巴结转移组，低分化鳞癌高于高分化鳞癌，提示MMP-9参与了鼻咽癌的转移。研究表明，于肿瘤细胞浸润、转移过程中，人体内金属蛋白酶释放、活化非细胞外基质发生降解充分条件，由于MMP活性能被TIMPs（组织金属蛋白酶抑制剂）相关内源性物质抑制。而 TIMP1作为TIMPs家族首位成员，属于糖蛋白，能和活性胶原酶及活化间质溶素、MMP-9不断形成复合物，并对其活性进行抑制。
鼻腔内翻性乳头状瘤是来源于上皮组织，具有复发和恶变倾向良性肿瘤，临床上虽未恶变，但多见鼻内翻性乳头状瘤向上领窦及筛窦侵及.鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤几乎全部是有被覆基膜完整的上皮带明显增生构成，这些增生上皮向上皮下间质内呈内生性生长，上皮常为多层，由鳞状上皮或混合有黏液细胞的纤毛柱状上皮构成。
MMP-9和TIMP1如何导致鼻粘膜的病理性改变以及在鼻腔内翻性乳头状瘤形成中的主要作用，我们从以下二方面考虑：①MMP-9和TIMP1于人体内形成的基质合成、降解平衡，因鼻腔内翻性乳头状瘤中伴有一些因素导致MMP-9表达过量、表达程度高于 TIMP1情况下，此平衡出现变化，造成基质降解，研究中我们发现MMP-9呈阳性表达，TIMP1呈阴性表达情况下，异常增多的MMP-9通过降解细胞外间质成分，导致固有层结缔组织疏松，进而使上皮团块向固有层深处呈乳头状或指状分支，弥漫生长.②另一些病理改变，我们的研究发现，在正常鼻粘膜少见有MMP-9的阳性表达，在鼻腔内翻性乳头状瘤组织中基底膜附近的细胞大量表达MMP-9，基底膜以外的组织几乎没有MMP-9阳性细胞（图4）。光学显微镜可见上皮细胞（大部分为基底细胞）表达MMP-9.鼻腔内翻性乳头状瘤上皮带明显增生、炎细胞的大量浸润则似乎更有助于上皮细胞、炎细胞产生大量的MMP-9，TIMP1表达明显减少，鼻腔内翻性乳头状瘤的病理改变中既有由于MMP-9增多，TIMP1减少导致的结果，又有使MMP-9增多TIMP1减少的原因。
本研究结果表明在鼻内翻性乳头状瘤组织中MMP-9的高表达，TIMP1的低表达或不表达，可能是MMP-9的高活性能够水解骨基质内胶原，参与骨质的降解，使腔鼻内翻性乳头状瘤表现出侵润性和破坏性，具有类似恶性肿瘤的生物学特征。本研究还发现鼻内翻性乳头状瘤如伴有局部上皮重度不典型增生，MMP-9表达强阳性，TIMP1的低表达或不表达，提示鼻内翻性乳头状瘤具有复发和恶变倾向可能性大，可作为癌变密切随访的指标，对临床治疗起到指导作用。
参考文献：
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基金项目：黑龙江省卫生计生委科研课题，编号：2016-522
作者简介：赵金花，女，黑龙江省人，1981年3月出生，副主任医师，硕士研究生。
论文作者:赵金花,高志光,焦慧,王荫慧,安然
论文发表刊物:《中国蒙医药》2019年第7期
论文发表时间:2019/11/7
标签：鼻腔论文; 乳头状论文; 内翻论文; 组织论文; 基质论文; 阳性论文; 细胞论文; 《中国蒙医药》2019年第7期论文;