（成都中医药大学附属医院 四川 成都 61007）
[摘要] 目的 探讨沉默信息调节蛋白家族成员之一SIRT6在人不同非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及其临床意义。方法 利用免疫组化法检测121例NSCLC、33例癌旁组织及36例良性病变组织中SIRT6的表达量，并收集患者临床资料，分析SIRT6与临床参数的关系。结果 SIRT6在NSCLC组织中低于癌旁组织及良性病变组织（P<0.001）；分化程度高者平均IOD高于分化程度中、低的患者（P<0.05）。发生淋巴结转移和未发生淋巴结转移的患者SIRT6的平均IOD之间存在显著性差异（P＜0.05）。结论 SIRT6在NSCLC组织中高表达，可能是疾病治疗或诊断的靶因子。
[关键词] 非小细胞肺癌，SIRT6，免疫组织化学
肺癌是目前中国发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，每年新发病约70.5万，每年死亡约56.9万，其中以男性为主[1]。2008 年以来，肺癌的发病率和死亡率已经超过乳腺癌、结肠癌、胃癌和肝癌，严重危害人类的健康，成为一个严重的公共健康问题[2-3]。目前非小细胞肺癌的分子靶向药物治疗形成高潮，但是，已有的研究也充分说明肺癌的发生、发展是多病因、多危险因素并有多种信号传导通路参与的结果，因此，发现更专有、更有效的信号传导靶位就更显迫在眉睫。SIRT6是Sirtuin家族中重要的一份子，目前被认为是一个新的肿瘤抑制基因，现在研究认为，SIRT6通过提升DNA损伤修复过程来实现基因组稳定的维持[4-5],针对人体每时每刻发生的基因装配错误、突变等，SIRT6协调代谢供应和基因修复，从而维护正常基因序列，实现机体基因稳定性的维持。研究发现，SIRT6在肿瘤组织中的表达与肿瘤转移、术后生存期以及术后复发率密切相关，但是研究结果结论并不一致。本研究通过分析肺癌组织、癌旁正常组织中SIRT6的表达水平，以期了解SIRT6在非小细胞肺癌发生发展过程中可能发挥的作用。
1 材料与方法
1.1 一般资料
选取2014年1月-2015年10月成都中医药大学附属医院手术切除并经病理确诊的未经治疗且病理和临床资料完整的NSCLC组织标本121例，其中男81例，女40例，诊断时年龄33-78岁，平均年龄62.17岁。其中腺癌61例，鳞癌53例，大细胞癌7例；按ASLC（2009年）的TNM临床分期：Ia期14例，Ib期21例，IIa期7例，IIb期17例，IIIa期46例，IIIb期7例，IV期9例。16 例高分化 , 84例中分化 , 21例低分化。取同期 33例癌旁组织 ( 距肿瘤 > 5 cm , 取材经病理确诊为正常肺组织) 及同期手术切除的肺部良性病变组织(炎性假瘤、结核等）36例为对照。
1.2 免疫组化法检测SIRT6的表达量
病理标本经10%中性福尔马林固定，常规脱水，石蜡包埋，切片后HE染色、复核病理诊断；常规二甲苯脱蜡，常规乙醇脱水，抗原修复后正常赡养血清工作液封闭，滴加鼠抗人SIRT6抗体，而后滴加生物素标记二抗，孵育、冲洗、复染、透明、封片。PBS代替一抗作为阴性对照，已经证实阳性表达的NSCLC切片作为阳性对照。每张切片随机选取5个高倍镜视野，使用Image-proPlus图像分析系统测得每张切片的积分光密度（IOD），平均IOD=总IOD/测定部分的面积，用均数±标准差表示。
1.6 统计学方法
采用SPSS19.0进行统计学分析。定量资料采用方差分析，P＜0.05为统计有显著性差异。
2 结果
2.1 SIRT6在NSCLC中的表达
SIRT6阳性表达率在肺癌组织中低于良性病变组织和癌旁组织（P<0.001）， 良性病变组织较癌旁组织表达量高（P<0.001）。见表1.
2.2 SIRT6的表达与临床病理特征的关系
121例NSCLC患者中，分化程度高者平均IOD（1.45±0.25）高于分化程度中、低的患者（0.24±0.02）（P＜0.05），发生淋巴结转移和未发生淋巴结转移的患者SIRT6的平均IOD之间存在显著性差异（P＜0.05）。SIRT6的表达在患者性别、年龄、吸烟史、组织学类型、TNM分期中不存在显著性差异 ( P＞0.05)，见表2。
3 讨论
Sirtuin家族是近些年开始进入大家视野的生长调控基因，包括7个成员(SIRT1-SIRT7)，他们的表达蛋白在广泛的病理生理过程发挥关键影响，包括DNA修复，细胞的存活率，应激反应，代谢平衡和老化[6]。虽然SIRT1在所有成员中，得到的研究最多，功能揭示的最多[7]，但是显然SIRT2, SIRT6在肿瘤生长调控中所占有的地位更加重要[8]，因为二者在结构功能上面更加接近些。在肿瘤发生发展的调控方面，针对不同肿瘤却出现了不同的结论。一方面，在对子宫内膜癌的样本进行基因表达筛查后，Colas[9]等的研究显示SIRT6略有上调，对比正常组织，子宫内膜肿瘤组织内SIRT6 mRNA升高幅度达到27%，而其相应蛋白表达量升高更高达正常组织的近2倍。另一方面，在最近的一项研究中，Carlos Sebastian[10] 等报告，SIRT6位点在肿瘤细胞株中缺失35%，而在胰腺癌和结肠癌细胞系中分别有62. 5%及29%被删除。此外，该研究显示胰腺导管腺癌和大肠癌SIRT6表达下调。上述研究提示我们，SIRT6在肿瘤中呈异质性表达，随肿瘤类型的不同、肿瘤发生发展的不同阶段，SIRT6的表达也相差甚远，SIRT6发挥的作用也有所不同。
本研究免疫组化检测NSCLC患者组织发现，SIRT6阳性表达率在肺癌组织中低于良性病变组织和癌旁组织，良性病变组织较癌旁组织表达量高。Kanli等[11]发现患有肺癌雄性小鼠中，SIRT6过表达比野生型寿命延长了11.7%。由于细胞来源的多样性, 非小细胞肺癌具有不同的组织学和生物学特性，治疗效果较差 , 在诊断时超过半数的病例已发生了转移，本研究发现，发生淋巴结转移和未发生淋巴结转移患者SIRT6的阳性表达率之间存在显著性差异。
本研究结果表明，SIRT6可在非小细胞肺癌组织中表达，他的表达强度与分化程度、淋巴结转移密切相关，可能与非小细胞肺癌进展相关，SIRT6可能成为非小细胞肺癌专断或免疫治疗的靶位点。
参考文献
[1] 陈万青，郑荣寿，张思维等2012 年中国恶性肿瘤发病和死亡分析[J].中国肿瘤杂志，2016，1:1-8.
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[7]Liu T, Liu PY and Marshall GM: The critical role of the class III histone deacetylase SIRT1 in cancer. Cancer Res 69: 1702-1705, 2009.
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[9]Colas E, Perez C, Cabrera S, et al: Molecular markers of endometrial carcinoma detected in uterine aspirates. Int J Cancer 129: 2435-2444, 2011.
[10]Carlos Sebastian Bernardette M.M.Zwaans，Dafne M.Silberman，et al.The histone deacetylase SIRT6 is a tumor suppressor that controls cancer metabolism.Cell. 2012 Dec 7;151(6):1185-99.
[11]Kanfi Y, Naiman S, Amir G, et al. The sirtuin SIRT6 regulates lifespan in male mice[J].Nature, 2012, 483 (7388):218-221 K
论文作者:戴彭辰,刘一诚,何成诗
论文发表刊物:《健康前沿》2016年2月
论文发表时间:2016/6/13
标签：组织论文; 肺癌论文; 肿瘤论文; 细胞论文; 淋巴结论文; 发生论文; 病理论文; 《健康前沿》2016年2月论文;