（1.长沙医学院2016级本科临床医学10班 湖南长沙 410219）
作者简介：易永韬，(1999.04--)，男，湖南永州人，2016级临床医学本科在读。
通讯作者简介：王利，任职于长沙医学院机能学教研室，从事教学与科研工作。
项目基金：长沙医学院2018年校级立项大学生研究性学习和创新性实验设计项目长医教【2018】77号-281
摘要：目的：研究苦菜多酚对小鼠肺癌组织TGF-β1高表达的影响。方法：选择清洁ICR小鼠，随机分为5组，即空白对照组、实验对照组、100%苦菜多酚提取物组、50%苦菜多酚提取物组、25%苦菜多酚提取物组。在实验进行中，对除空白组小鼠以外的，其余各组小鼠均腹腔注射800mg/kg的乌拉坦，每周两次，连续五周进行小鼠肺癌模型建立。药物干预与建模同时进行，2次/d，连续8周。对实验组小鼠分别进行苦菜多酚提取物浓度100%、50%、25%，12.5ml/kg每次给药，空白对照组与实验对照组灌胃生理盐水。8周后取小鼠肺组织检测。肉眼及镜下计数小鼠双肺肿瘤结节数，免疫组化检测小鼠肺组织TGF-β1的表达情况。结果：小鼠肺组织肿瘤发生率从83.3%降低至33.3%平均肿瘤结节数从,3降至1，苦菜多酚提取物（100%、50%、25%）均明显的降低了模型小鼠肺癌组织中的TGF-β1的高表达。结论：苦菜多酚可以通过抑制TGF-β1的表达，而具有一定的抵抗肺组织肿瘤的发生、发展与转移。
肺癌是发病率和死亡率增长最快，对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。近50年来许多国家都报道肺癌的发病率和死亡率均明显的增高，我国是其一[1]城市居民肺癌的发病率较农村高，呼吁全民保护环境，农村喜食野菜（苦菜等）这可以作为一条探讨方向。
苦菜中的多糖、多酚、黄酮类物质都有抗氧化活性，据现代医学研究表明，苦菜具有一定的抗肿瘤、保肝治肝炎和抗菌抗病毒等功效，药理作用广泛[2]。本实验以乌拉坦诱导小鼠肺癌建立模型，探讨观察苦菜多酚提取物对肺癌模型小鼠肺癌组织中TGF-β1的影响，来研究苦菜多酚防治肺癌的作用机制。
1材料和方法
1.1试验药物
苦菜（福建省、龙岩市）与56%体积分数的乙醇以1:35=g/ml混合于77℃水浴里进行45mim浸取，过滤，浓缩。
1.2动物
清洁的ICR小鼠30只，雄性，体重（20±3），年龄（4周以内）（湖南斯莱克景达实验动物有限公司）
1.3试剂
乌拉坦（长沙医学院）
1.4仪器
石蜡包埋机（长沙医学院第一附属医院）；显微镜（长沙医学院）
1.5方法
选择清洁级ICR雄性小鼠30只，随机分为5组，空白对照组、实验对照组、苦菜多酚提取物（100%、50%、25%）组，除空白对照组，其他几组均按照孙婷[3]方法，以腹腔注射乌拉坦800mg/kg，每周两次，分别于每周一、四注射，连续五周，复制小鼠肺癌模型。药物干预与建模一起进行，空白对照组与实验对照组灌胃生理盐水，苦菜多酚提取物（100%、50%、25%）以12.5ml/kg，2次/d，连续8周。8周后取小鼠肺组织检测。
1.5.1小鼠肺组织肿瘤发生率及肿瘤结节数
处死小鼠，剖胸取完整肺组织，肉眼及显微镜下观察计数小鼠肺组织肿瘤结节数，并计算小鼠肺组织肿瘤发生率=各组小鼠肿瘤发生数/各组小鼠数*100%
1.5.2免疫组化测定小鼠肺组织TGF-β1的表达
应用s-p免疫组化法，先将肺组织制成石蜡切片，脱蜡至水，抗原修复，3%H2O2灭活，滴加封闭液，加一抗（TGF-β1 1：300）4℃过夜，二抗37℃15mim，最后DAB显色，复染，封片。光镜下观察、拍照。
2结果
2.1药物对肿瘤发生率及肿瘤结节数的影响
空白对照组未造模，故均未发生肺肿瘤，而乌拉坦诱导小鼠肺肿瘤过程中实验对照组6只小鼠中有5只发瘤（发病率83.3%）和肿瘤结节数高。与模型组相比，苦菜多酚提取物（100%、50%、25%）发病率和肿瘤结节数明显降低，如表1，因此苦菜多酚能明显抑制肿瘤诱发率和肿瘤结节数。
2.2免疫组化检测小鼠肺组织TGF-β1表达的影响
免疫组化结果显示，与空白对照组比较，实验对照组肺组织TGF-β1表达明显升高。与实验对照组比较，苦菜多酚提取物（100%、50%、25%）组TGF-β1表达明显的降低，如表2和图2-1.因此，苦菜多酚能明显降低小鼠肺组织TGF-β1的表达。
3讨论
苦菜中的多糖、多酚、黄酮类物质都有抗氧化活性。苦菜为菊科苦苣菜属多年生草本植物,除西南和青藏地区外全国均有分布,资源十分丰富。苦菜作为中药始载于《神农本草经》,药名为“败酱草”,不仅是一种营养丰富的野菜,也是一种良好的中药材,药用历史悠久。现代医学研究表明,苦菜还具有抗癌抗肿瘤、保肝治肝炎和抗菌抗病毒等功效,药理作用非常广泛[4]。
TGF-β/Smad信号转导途径在参与肿瘤形成过程中发挥重要作用。TGF-β是一类具有多种生物学功能的多肽类生长因子超家族，TGF-β1因在肺癌不同阶段具有多样功能而表现复杂，初期，可抑制肿瘤细胞生长和诱导凋亡;晚期，通过抑制机体免疫力、增加血管生成、诱导细胞外基质的产生从而促进癌细胞的侵润和转移[5]。肺癌患者对比于健康人和非恶性肺部疾病患者，TGF-β1水平升高且TGF-β1在原发性肿瘤和预后之间有着重要相关性[6]。本实验免疫组化检测结果显示，实验对照组TGF-β1表达明显高于空白对照组，而苦菜多酚提取物（100%、50%、25%）组TGF-β1表达均较实验对照组明显降低，说明苦菜多酚可能通过抑制TGF-β1的过度表达从而调控TGF-β/Smad信号转导通路来延缓肺癌的发生发展。
综上所述，苦菜多酚提取物可能是通过对TGF-β1的作用，抑制其高表达而实现对肺组织癌变的控制，改变其肺组织癌变的发生、发展及其转移。
参考文献
[1]邓丽红,谢臻,陈勇.苦菜药理作用及工艺优化研究进展.大众科技.2017.10
[2]郑翠萍,田呈瑞.苦菜多酚的提取及其抗氧化性研究.食品与发酵工业.2016.3
[3]孙婷.乌拉坦诱导小鼠肺癌模型的研究.河南大学.2013.5
[4]邓丽红,谢臻,陈勇.苦菜药理作用及工艺优化研究进展.大众科技.2017.10
[5]谢勉,何朝生,魏慎海.TGF-β1、Smad2和Smad4蛋白表达在可手术切除非小细胞肺癌中的表达.中国肺癌杂志.2015.9
[6]周杨,董佑红.TGF-β1/Smads在肺癌中的作用及调控的研究进展.生命的化学.2015.6
论文作者:易永韬 1贺星 2王一如 3陈李鑫 4龚健强5 王利通讯作者
论文发表刊物:《中国结合医学》2019年第01期
论文发表时间:2019/3/12
标签：小鼠论文; 肺癌论文; 肿瘤论文; 多酚论文; 组织论文; 对照组论文; 提取物论文; 《中国结合医学》2019年第01期论文;