摘 要：目的 检测衰变加速因子(decay accelerating factor,DAF,CD55)在胃癌组织中的表达情况，分析DAF高表达在促进肿瘤细胞增殖、转移，进肿瘤血管生长，逃避免疫监视的作用，探讨DAF高表达与肿瘤病理分期及临床转移的关系。方法 免疫组化法检测132例胃癌和76例癌旁组织病例切片中DAF表达情况。结果 免疫组化结果显示132例胃癌切片标本中，共有103例表达,DAF阳性率为78.1% ；76例癌旁组织中，共有19例表达，DAF 阳性率为25.0%，肿瘤组织显著高于癌旁对照组，P<0.05。30例I~II期胃癌患者中，15例DAF表达阳性，阳性率为50.0%；56例III~IV期患者中，53例DAF表达阳性，阳性率为94.6%，I~II期和III~IV期两者有显著差异，P<0.05。DAF高表达与胃癌III-VI病理分期显著相关，可能与胃癌的恶性程度相关。
关键词：胃癌；衰变加速因子(DAF,CD55)；免疫逃逸
DAF是一种补体调节蛋白，表达于与血清补体蛋白紧密连接的细胞、血管外周细胞以及肿瘤细胞，可以抑制自身补体级联式激活的蛋白质。它被认为可以保护细胞免受补体介导的细胞溶解作用，通过干扰C3转化酶（C4b2a 和 C3bBb）和C5转化酶（C4b2a3b 和 C3bBb3b）来制止补体级联反应升级，抑制C3b沉积，阻止抗原递呈细胞的吞噬，耐受NK细胞的杀伤作用[1]。Schmitt CA在研究胃肠道肿瘤时指出， CD55保护肿瘤细胞免受有活性的补体攻击，其高表达也许是肿瘤的免疫逃逸机制[2]。 肿瘤发生发展机制复杂，近年的研究表明，DAF不仅是一种补体调节因子，它在肿瘤的发生过程中起着不容低估的作用。我们通过免疫组化技术检测病理组织切片，分析DAF高表达在促进肿瘤细胞增殖，转移，逃避免疫监视中的作用以及DAF高表达与肿瘤病理分期的临床意义，为揭示胃癌发生过程中的免疫逃逸机制提供新的理论和实验依据。
1 材料与方法
1.1 一般资料 本试验的研究对象为2013年12月至20014年9月在济宁市第一人民医院住院胃癌患者132例，均经手术治疗，病理诊断为胃癌，其中男性65例，女性57例，患者年龄36~73岁，平均45.6岁。同时收集癌旁对照76例，其中男性41例，女性35例。年龄38-73岁，平均47.8岁
1.2材料 兔抗人CD55一抗，购自eBioscience公司；免疫组化检测试剂盒，购自北京中杉金桥生物技术有限公司。
1.3 免疫组化染色方法 分别滴加1：100稀释的兔抗人CD55、VEGF一抗，小鼠抗人PCNA一抗，4℃过夜。PBS（pH7.6）洗5分钟，洗3次。分别滴加羊抗小鼠、羊抗兔HRP标记的二抗,37℃ 30分钟。PBS（pH7.6）洗2分钟，洗3次。 重复步骤以上两步骤。苏木素染色液复染。然后甘油缓冲液封片，镜下观察。
1.4结果判断标准： 结果为胞浆或胞膜表达，出现黄色反应为阳性，对照组相同部位不出现黄色为阴性。根据显色强度和阳性细胞数两项指标判断阳性等级。按显色强度分为：无色、黄色、浅黄色、棕黄色，分别计分为0、1、2、3；按阳性细胞占同类细胞的比例分为：0、<1/3、1/3-2/3、>2/3，分别计分为0、1、2、3。两项计分相加，确定0分为-，1-2分为+，3-4分为++，5-6分为+++。
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1.5 统计学处理方法 实验数据采用SPSS11.5软件包进行处理，根据资料类型选择x2检验，相关分析等统计方法分析实验结果。
2实验结果
2.1肿瘤组织中表达DAF的细胞类型。
2.2 DAF在胃癌患者肿瘤组织和癌旁组织中的表达阳性率
32例胃癌患者肿瘤组织DAF的阳性表达率为78.1%，20例癌旁对照组DAF的阳性表达率为25.0%，肿瘤组织显著高于癌旁对照组，P<0.05。
2.3 DAF高表达与胃癌病理分期的关系
12例I~II期胃癌患者中，6例DAF表达阳性，阳性率为50.0%；20例III~IV期患者中，19例DAF表达阳性，阳性率为95.0%，I~II期和III~IV期两者有显著差异，P<0.05。
3 讨论
近年研究证明， DAF保护肿瘤细胞免受有活性的补体攻击， DAF在消化道肿瘤细胞转录和翻译水平上存在过表达现象，其表达量可为正常细胞的4-100倍，而且与肿瘤的不良预后相关 。DAF在肿瘤和淋巴瘤白血病细胞表面呈过度表达，显著高于正常细胞。DAF也许可作为肿瘤细胞上的信号分子，促进肿瘤细胞生长。Niehans等，最近在多种癌细胞上检测到补体抑制蛋白CD46(MCP)、CD55(DAF)及CD59(Protectin)的表达，能协助I因子加速对C3b的灭活，避免C3b沉积在癌细胞表面，从而使红细胞不能通过其CR1受体与癌细胞发生免疫粘附，这可能是肿瘤免疫逃逸的机制之一。DAF在口腔鳞状细胞癌等肿瘤组织中过表达，可以使肿瘤组细胞从补体依赖和抗体介导的杀伤作用中逃避。肿瘤可以通过释放可溶性的DAF和CD59到周围组织来补充膜相关的补体抑制剂的活性，抑制补体介导的杀伤作用，促进肿瘤细胞增生。DAF在宫颈癌组织中含量增加，直接调节肿瘤细胞，引起C3转换酶含量改变，肿瘤细胞逃避免疫监视。
淋巴结转移的范围越广，肿瘤浸润的范围越大，其临床分期越高。DAF在肿瘤组织中含量增加，直接调节肿瘤细胞，引起C3转换酶含量改变，肿瘤细胞逃避免疫监视，促进肿瘤转移，病情恶化。 有实验表明CD97作为DAF的配体在甲状腺肿瘤组织中高表达，它可能参与肿瘤细胞上DAF的信号转导，并与DAF协同作用促进肿瘤细胞粘附和转导，使患者的病理分期增高。肿瘤细胞能产生VEGF，与受体结合后，可以刺激血管内皮细胞增殖，促进血管形成，并增加血管通透性,容易通过血管内皮细胞进入血流从而发生远处转移，病理分期增高。
本实验结果发现，32例胃癌肿瘤细胞上DAF表达远远高于癌旁对照，阳性率分别为78.1 %和25.0%，表明DAF的高表达可能使胃癌细胞逃避宿主补体依赖和抗体介导的杀伤，形成胃癌细胞的免疫逃逸。综上所述，DAF一种重要的补体调节蛋白，在肿瘤细胞上过表达，尽管前人已经做了大量的工作，仍有很多未知的功能等着大家去探索。随着对它的结构及功能的深入研究，相信不久的将来，在肿瘤的治疗中，DAF作为靶点将发挥巨大的作用。
参 考 文 献
1 pendlove I, Li L, Carmichael J, et al. Decay accelerating factor (CD55):a target for cancer vaccines?[J].Cancer Res,1999,59(10):2282-2286.
2 Schmitt CA,Schwaeble W,Wittig BM, et al. Expression and regulation by interferon-gamma of the membrane-bound complement regulators CD46 (MCP), CD55 (DAF) and CD59 in gastrointestinal tumours[J].Eur J Cancer. 1999;35(1):117-24.
论文作者:王芹
论文发表刊物:《名医》（学术版）2016年4期
论文发表时间:2016/10/28
标签：肿瘤论文; 细胞论文; 补体论文; 胃癌论文; 阳性论文; 免疫论文; 组织论文; 《名医》（学术版）2016年4期论文;