李月敏, 宋叁泰, 江泽飞, 徐建明, 张琪[1]2005年在《选择性增殖腺病毒CNHK500治疗乳腺癌的实验研究》文中进行了进一步梳理目的:观察选择性增殖腺病毒CNHK500对乳腺癌的特异性杀伤作用。方法:行病毒增殖实验和细胞生长抑制实验,验证CNHK500选择性复制和杀伤能力;Westernblot检测腺病毒E1A和E1B在细胞中的表达。结果:CNHK500在乳腺癌细胞中复制能力与野生型腺病毒wtAd5相似,较ONYX-015增殖能力强。在正常成纤维细胞中CNHK500病毒增殖能力明显减弱,较wtAd5增殖能力弱1000倍左右。CNHK500可有效杀伤乳腺癌细胞株;而CNHK500对正常成纤维细胞的杀伤力较wtAd5减弱约100倍。CNHK500病毒的E1A可以选择性在端粒酶阳性的乳腺癌细胞株中表达,在端粒酶阴性的正常成纤维细胞株BJ中不表达,CNHK500可以选择性地在缺氧条件下表达E1B。动物实验结果显示,静脉注射CNHK500可以显着抑制MCF-7乳腺癌细胞裸鼠移植瘤的生长,治疗效果与给药剂量相关。结论:肿瘤选择性增殖腺病毒CNHK500可选择性在端粒酶阳性的乳腺癌细胞中复制,并产生体内外杀伤作用。
李月敏[2]2004年在《肿瘤特异性增殖腺病毒CNHK 500治疗乳腺癌的实验研究》文中研究表明复制缺陷型腺病毒载体介导的肿瘤基因治疗手段发展迅猛，在进入临床研究的全部基因治疗方案中，有叁分之二是针对肿瘤的。复制缺陷型腺病毒作为基因治疗的载体有致病性低、不整合到人类基因组、滴度高、易于纯化和制备等多种优点。然而缺陷型腺病毒作为基因治疗的载体也存在几项缺点，包括免疫原性强、缺乏感染的特异性(靶向性差)、在实体瘤中穿透力差以至难以到达全部肿瘤细胞等，这极大地限制了肿瘤基因治疗的临床效果。为了提高病毒感染的特异性和病毒在肿瘤中的播散能力，以杀灭所有肿瘤细胞，人们利用肿瘤细胞与正常细胞的某些生物学性状的差异，提出了条件选择性增殖病毒(conditionally-replicating vims)治疗肿瘤的新策略，并利用增殖病毒作为载体携带肿瘤治疗基因，使基因治疗的局面面目一新。这种条件选择性增殖性病毒在肿瘤治疗方面具有以下几种优势：1． 病毒可以选择性的在肿瘤细胞内有效复制，可使治疗剂量大大减小。2． 病毒在肿瘤细胞内复制，最终将肿瘤细胞裂解导致细胞死亡。3． 新的子代病毒自细胞中释放后继续感染邻近细胞，并继续复制，最终将肿瘤细胞完全消灭。4． 肿瘤细胞裂解后释放的肿瘤抗原可以增强机体抗肿瘤免疫反应。5． 将可选择复制的病毒作为基因治疗的载体，发展结合病毒治疗与基因治疗两者优势的肿瘤治疗新策略，即基因-病毒治疗。6． 对病毒外壳蛋白进一步改造增强其感染的特异性和感染力。7． 病毒只选择性地在肿瘤细胞中复制，对正常细胞的毒性小。为实现病毒选择性在肿瘤细胞内复制，目前有两种普遍采用的方法：一、将病毒复制必需基因全部缺失或部分缺失，这些基因在正常细胞中为病毒复制所必需的，但在肿瘤细胞中则是不需要的，从而病毒在正常细胞中死亡，而在肿瘤细胞中得以有效复制。例如，ONYX-015就是E1B 55 KDa缺失的腺病毒，它利用了多数肿瘤细胞p53功能不良的特点，可以特异地杀伤p53缺失或突变的肿瘤细胞。E1b 55 KDa蛋白可通过结合细胞内的p53使其功能受到阻滞，由于这一缺失突变，ONYX-015不能阻滞p53的功能，ONYX-015感染正常组织细胞时，可以激活细胞内p53，在p53的诱导调控下细胞凋亡(apoptosis)或细胞生长阻滞(growth arrest)，因而在正常组织细胞内病毒复制受到抑制。与此相反，ONYX-015感染突变型p53的军事医学科学院中文摘要论文肿瘤细胞后，由于p53蛋白功能缺失，肿瘤细胞不会发生凋亡或生长阻滞，可以在肿瘤细胞内复制并发挥溶瘤作用。 二、采取肿瘤细胞内或某种组织细胞内特异性激活的启动子或增强子，调控病毒复制必需基因(如EIA)的复制，使病毒选择性地在肿瘤组织或某种组织细胞中复制，而不影响正常组织。现已有为数不少的肿瘤细胞特异启动子被鉴定并用于基因表达的调控，如靶向结直肠癌的癌胚抗原(CEA)启动子、靶向乳腺癌的MUCI启动子、革巴向肝癌的甲胎蛋白(AFP)启动子以及靶向鼻咽癌的EB病毒启动子等。另外，尚有针对某一类组织特征的启动子，如采取前列腺细胞特异性抗原(PSA)启动子来杀伤前列腺细胞，包括一前列腺癌细胞，这种方案可克服肿瘤细胞异质性带来的问题，但这种方案须要求这类组织本身对人体并非是至关重要的。用上述启动子调控病毒基因的表达可获得相对特异的肿瘤靶向作用，但缺点也比较明显。首先，这些启动子只针对有限的组织起源的肿瘤细胞，不能广泛应用于大多数肿瘤的治疗;其次，与常用的病毒启动子相比，这些启动子作用相对较弱，所介导的基因表达量低，病毒复制能力较野生型病毒下降。 近年来人们将目光集中于端粒酶启动子的研究上来，采用hTERT基因启动子驱动抗肿瘤基因，靶向端粒酶阳性的肿瘤细胞，而对端粒酶阴性的正常细胞则不起作用，是一项非常有前途的肿瘤治疗策略。端粒酶被认为是目前发现的最广谱的肿瘤分子标记，与肿瘤无限增殖的特性有关。在乳腺癌中的端粒酶阳性率达85%以上，而在绝大多数的正常细胞中无端粒酶活性。hTERT是调节端粒酶活性的主要亚单位，hTE又T启动子只有在端粒酶阳性的细胞中有转录活性。hTERT启动子已被成功地用于基因治疗中的治疗基因靶向表达，如GuJ等用hTERI，启动子调控Bax基因在肿瘤组织特异性表达;shoji等用hTERT启动子调控caspase一8基因局限性在端粒酶阳性细胞表达，而在端粒酶阴性组织不表达。因此，采取hTERI…基因启动子调控腺病毒EIA的表达，可以使病毒选择性的在端粒酶阳性的肿瘤细胞内复制，而在端粒酶阴性的正常细胞中不复制。 实体肿瘤的另一个重要特性是肿瘤组织内部大量乏氧细胞的存在，肿瘤缺氧的微环境是肿瘤放化疗耐受的重要原因。缺氧诱导基因一1(Hypoxia一Indueible Faetor-l，HIF一l)广泛存在于人类多种肿瘤细胞内，HIF活性对维持肿瘤细胞的能量代谢、促军事医学科学院中文摘要博「论文进新血管的形成、促进肿瘤增殖和转移中起重要作用。研究发现，在乳腺癌等多种癌中HIF一1过度表达，而在乳腺良性病变中则不表达。缺氧的信息在肿瘤细胞内部通过一系列的信号传导系统，导致HIF一1转录因子的表达，最后导致细?
李月敏, 宋叁泰, 江泽飞, 张琪, 姜梨华[3]2004年在《可携带肿瘤治疗基因的选择性增殖腺病毒CNHK500治疗乳腺癌的实验研究》文中指出目的:观察选择性增殖腺病毒CNHK500对乳腺癌的特异性杀伤作用。方法:行病毒增殖实验和细胞生长抑制实验,验证CNHK500选择性复制和杀伤能力;Western Blot检测腺病毒E1A和E1B在细胞中的表达。结果CNHK500在乳腺癌细胞中48小时复制17812—39682倍,与wtAd5的增殖能力相似,较ONYX-015增殖能力强。在正常成纤维细胞中CNHK300病毒增殖能力减弱,48小时增殖18—31倍,而wtAd5增殖仍可高达20000倍以上。CNHK500 MOI 10 PFU/cell以下可有效杀伤半数乳腺癌细胞株;而CNHK500对正常成纤维细胞的杀伤力较wtAd5明显减弱,在MOI 1000 PFU/cell时BJ细胞存活率在50%以上。在感染CNHK500的端粒酶阴性的正常成纤维细胞株BJ中未检测到E1A基因表达,在端粒酶阳性的感染CNHK500的乳腺癌细胞株中能够检测到E1A基因表达;CNHK500可以选择性地在缺氧条件下表达E1B。结论:肿瘤选择性增殖腺病毒CNHK500可选择性在端粒酶阳性的乳腺癌细胞中复制,并产生杀伤作用。
张琪[4]2004年在《双调控减毒增殖腺病毒CNHK500治疗肝癌的实验研究》文中研究表明缺乏肿瘤特异性是现今许多肿瘤治疗方案所共同面临的一个主要问题,因此研发出新的肿瘤靶向机制的治疗方法显得非常必要。肿瘤细胞特异性增殖病毒,又称溶瘤病毒,在肿瘤治疗中极具前景,它具有选择性地在肿瘤细胞中增殖、在肿瘤间自行扩散的优点,且同现有的治疗手段无交叉耐药作用。到目前为止,已有十余种不同类型的选择性增殖型病毒进入到临床试验中,其中包括选择性增殖型腺病毒(CRAD)、单纯疱疹病毒(HSV)、痘苗病毒、呼吸道肠道过滤性病毒及新城疫病毒。为达到选择性增殖的目的,对选择性增殖性腺病毒最常采用如下两种分子改造策略:其一选择性缺失病毒在正常细胞复制必需而在肿瘤细胞中非必需的基因,这些基因包括腺病毒的E1A基因及E1B基因,它们可以灭活在肿瘤细胞内常突变的抑癌基因Rb或p53。这种改造后的增殖病毒在动物实验中疗效显着,并已进入临床试验,经典的如美国ONYX药物公司研制的E1B-55KD缺失的ONYX-015,其联合常规化疗(5-Fu、顺铂)治疗30例复发的头颈部肿瘤患者,临床有效率可达63%,但作为单剂治疗疗效仅在20%左右,可能同E1B基因同时也参与晚期mRNA转运出核的过程这一特性有关。另一改造策略是利用组织或肿瘤特异性启动子,如AFP、MUC1,PSA及pS2等,来调控腺病毒增殖的必需基因,这种改造后的病毒在动物实验中非常成功,前列腺肿瘤特异性增殖型腺病毒CN-706及CV-787已进入临床试验,然而经此途径改造的病毒其增殖被局限于仅能表达相应肿瘤特异性抗原的肿瘤类型。肿瘤细胞的无限增殖和瘤内缺氧微环境的存在是恶性实体瘤的主要特性。肿瘤的无限增殖能力主要靠端粒酶的激活来不断地维持端粒的长度而达到的。端粒酶在大多恶性肿瘤细胞中处于激活状态而在正常细胞中却没有活性或者活性很低,是目前所报道最为广谱的肿瘤生物分子标记。人端粒酶逆转录酶(hTERT)是维持端粒酶活性所必需的催化亚单位,它的表达调控在转录水平上。利用端粒酶逆转录酶启动子(hTERT)来调控病毒复制增殖所必需的基因,理论上可使病毒选择性在端粒酶阳性的肿瘤细胞中增殖。同时在肿瘤细胞的恶性增殖过程中,不断增多的肿瘤细胞导致细胞耗氧量的剧增,容易造成肿瘤内缺氧微环境的形成,这在人实体瘤显得尤为明显。缺氧进而可诱导缺氧诱导因子-1(HIF-1)的形成,
陈洁[5]2005年在《携带p53基因的增殖腺病毒CNHK600-p53治疗肺癌和携带CD20全长抗体的腺病毒Ad-SG-CD20治疗淋巴瘤的实验研究》文中研究说明病毒疗法即利用病毒治疗肿瘤的概念最早产生于十九世纪,因为人们发现有的肿瘤患者在受到病毒感染或注射疫苗后出现肿瘤暂时消失的现象。其后许多不同的病毒作为溶瘤制剂开始进行临床试验,但由于所用病毒效率低、毒性高使人们屡遭挫折。随着病毒学、分子生物学及肿瘤学的飞速发展,人们对病毒的基因结构和功能进行了较为详细的研究,有效地对病毒基因进行了改造,使改造后的病毒能在肿瘤细胞中特异性增殖,而在正常细胞内不增殖。这样病毒一旦感染肿瘤细胞即可在细胞内增殖并裂解肿瘤细胞,细胞裂解后释放的病毒颗粒再次感染其它肿瘤细胞,直到将肿瘤细胞全部杀灭。近来已有近十种增殖病毒进入临床研究,其中最引人注目的肿瘤特异性增殖病毒是美国ONYX药物公司研究的E1B55KD缺陷的增殖型腺病毒(ONYX-015),它利用肿瘤细胞中p53基因突变而正常细胞中p53正常的差异使病毒在肿瘤细胞中特异性增殖。目前该病毒已进入Ⅲ期临床试验。与传统化疗联用,ONYX-015的有效率在50%以上,这是至今为止应用于临床的最有效的生物治疗手段。但是,单用该病毒疗效甚微,有效率<20%,所以必须与极大毒副作用的放化疗联合应用才能有效的杀伤肿瘤。 p53基因是重要的肿瘤抑制基因,与肿瘤的发生、发展以及肿瘤病人的预后关系密切。超过50%以上的肿瘤存在p53基因的异常,因此野生型p53基因导入成为重要的肿瘤治疗手段。但该方法存在着许多不足,例如在体内半寿期短,需要反复注射。而且,基因治疗中常用的载体也存在着转染率低、表达量少及靶向性差等缺点。为此我们设想应用上面介绍的肿
孙立臣[6]2005年在《携带hIFN-γ基因的双重调控的增殖型腺病毒CNHK500-hγ治疗肝癌的实验研究》文中认为本研究成功构建了hTERT启动子控制腺病毒E1A表达、HRE启动子控制E1B表达并携带人干扰素-γ基因的基因-病毒治疗系统CNHK500-hγ,通过体外和动物实验初步探讨对肝癌的治疗作用。 实验结果表明:1.CNHK500-hγ具有体外条件下在肝癌细胞中特异性增殖并杀灭肝癌细胞的能力;2.CNHK500-hγ所携带的治疗基因在肝癌细胞中的表达因病毒的增殖而得到了特异性的放大;3.CNHK500-hγ与ONYX-015和Ad-hγ相比,具有更强的抑制肝癌皮下移植瘤生长的能力,肿瘤增殖病毒的抗肿瘤效能因携带抗癌基因而得到了增强;4.CNHK500-hγ能特异性地杀灭肝癌细胞,对肝癌皮下移植瘤的生长具有很强的抑制作用,具备应用于肝癌临床治疗的潜力。
佚名[7]2004年在《肿瘤生物治疗》文中研究表明14-3-3σ负性调控Akt及抑制肿瘤生长的作用杨惠玲,李孟鸿中山大学病理生理学教研室,广东,广州,510080 德州大学M.D.Anderson癌症中心目的:14-3-3σ蛋白属14-3-3蛋白家族,主要在上皮细胞表达,虽然已有实验提示14-3-3σ蛋白参与细胞周期、凋亡和成瘤性的调控,是目前已知唯一具有抗癌活性的亚型,但与其相互作用的蛋白质尚未阐明。蛋白激酶B(PKB,又称Akt)属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,它与调控的信号转导通路牵涉到肿瘤的发生、发展、疗效和预后的各个环节,目前研究发现在某些类型癌症中常出现14-3-3σ低表达和或Akt过表达,本
洪艳玲[8]2017年在《CIK细胞和重组腺病毒KGHV500共同介导抗p21ras单链抗体治疗胃癌的实验研究》文中研究表明[目的]恶性肿瘤是全球死亡率最高、严重危害人类身体健康的疾病之一。胃癌是一种最常见的恶性消化道肿瘤。手术治疗、化疗、放疗是目前治疗恶性肿瘤的常用手段,但手术治疗具有局限性,晚期、转移或复发的肿瘤的手术治疗效果并不理想,而且临床肿瘤放、化疗效果不佳,对人体也会产生极大的副作用。靶向治疗是当前恶性肿瘤治疗的新方向,抗体靶向治疗是针对恶性肿瘤的致癌抗原,研究相应的治疗性抗体并与其结合发生作用,达到抗肿瘤效果。本实验室前期构建了抗p21Ras单链抗体基因,该抗体可以穿过胞膜进入细胞内,阻断Ras信号传导通路,靶向治疗p21Ras蛋白高表达的肿瘤,研究证实了该抗体对高表达p21Ras恶性肿瘤有明显抗肿瘤效果作用。但此抗体使用的是复制缺陷型腺病毒作为载体,没有自我增殖能力和肿瘤靶向性。因此,对野生型Ad5腺病毒载体进行改造,构建了含端粒酶逆转录酶基因启动子(hTERT)、缺氧反应元件启动子(HRE)和F35纤毛蛋白基因的重组腺病毒KGHV400,并插入前期构建的p21Ras单链抗体基因获得肿瘤特异性增殖腺病毒KGHV500。KGHV500能特异性的在肿瘤细胞中复制,并可以高效感染CIK细胞,具有肿瘤靶向性;本课题的主要目的是:1、通过体外实验,研究KGHV500对人胃腺癌细胞SGC-7901的影响;2、通过体内实验,研究CIK细胞联合KGHV500共同介导抗p21Ras单链抗体治疗裸鼠胃癌移植瘤的效果和安全性。最终实现抗p21ras单链抗体在肿瘤细胞中持续、安全表达,为肿瘤的靶向治疗提供新方法。[方法]一、重组腺病毒KGHV400和KGHV500的扩增和浓缩纯化:体外大量扩增重组腺病毒KGHV500,经双重氯化铯密度梯度离心法纯化该重组腺病毒,TCID50法测量腺病毒的滴度。二、免疫组织化学Envision法检测SGC-7901胃癌细胞表面的KGHV500受体CD46蛋白的表达情况;KGHV500以不同MOI值感染高表达p21Ras的SGC-7901胃癌细胞,以确定KGHV500感染SGC-7901细胞的最佳MOI值;电镜观察KGHV500对SGC-7901肿瘤细胞的感染情况。叁、·体外实验:细胞划痕实验检测KGHV500对SGC-7901胃癌细胞迁移能力的影响;Transwell侵袭小室实验检测KGHV500对SGC-7901胃癌细胞侵袭能力的影响;MTT比色实验检测KGHV500对SGC-7901胃癌细胞活力的影响;TUNEL凋亡实验检测KGHV500对SGC-7901胃癌细胞的促凋亡作用。四、CIK细胞的分离与鉴定:分离人外周血单个核细胞,采用多种细胞因子共培养诱导成为CIK细胞;利用免疫组织化学Envision法对CIK细胞表面的KGHV500受体CD46蛋白进行鉴定。五、建立人胃癌细胞系SGC-7901裸鼠移植瘤模型及分组治疗:裸鼠右侧腋下皮下注射SGC-7901胃癌细胞建立裸鼠胃癌移植瘤模型,将成瘤裸鼠随机分成五组进行治疗,实验组尾静脉注射携带KGHV500的CIK细胞,四个对照组分别尾静脉注射携带KGHV400的CIK细胞、CIK细胞、KGHV500、PBS进行治疗。六、体内实验:连续动态监测各组裸鼠生长状态及移植瘤大小,并绘制肿瘤生长曲线;TUNEL凋亡实验检测各组治疗后肿瘤组织中的细胞凋亡情况,观察CIK细胞联合KGHV500治疗胃癌移植瘤的效果;取实验组尾静脉注射CIK+KGHV500和对照组尾静脉注射KGHV500的裸鼠进行比较,在治疗后第1d、2d、3d、5d、7d分别用颈椎离断法处死以上两组裸鼠各一只,剖取肿瘤及心、肝、脾、肺、肾、胃、胰、大肠、小肠、脑等脏器组织制成石蜡切片,利用免疫组织化学Envision法观察CIK细胞运载的KGHV500在裸鼠体内分布情况,研究CIK细胞联合KGHV500治疗肿瘤的安全性。[结果]一、重组腺病毒KGHV400和KGHV500经扩增和双重氯化铯密度梯度离心法浓缩纯化,最终获得重组腺病毒KGHV400和KGHV500的病毒滴度分别为5.0×1010pfu/ml和2.0×109pfu/ml。二、免疫组化结果显示SGC-7901胃癌细胞表面高表达KGHV500受体CD46蛋白,主要定位在细胞膜上,其阳性率约为100%。腺病毒感染SGC-7901胃癌细胞的最佳MOI值为100。电镜下观察到KGHV500感染SGC-7901细胞后,可进入肿瘤细胞膜内及细胞核中。叁、体外实验中,细胞划痕实验显示:实验组KGHV500感染SGC-7901细胞48小时后,细胞迁移百分比为(8.25±5.20)%,而对照组未感染病毒的SGC-7901细胞在48h时细胞迁移百分比为(22.06±6.15)%,表明KGHV500明显抑制了 SGC-7901细胞的迁移能力。Transwell侵袭小室实验显示:实验组KGHV500感染SGC-7901细胞与对照组未感染KGHV500的肿瘤细胞相比,转移到微孔膜下层的细胞数目明显减少,实验组和对照组在24h时细胞侵袭个数分别为15.0±6.73和108.57±25.90,统计分析两者差异明显,具有显着的统计学意义(P<0.01),表明KGHV500可有效抑制SGC-7901胃癌细胞的侵袭能力。MTT比色实验结果显示:实验组KGHV500感染了 SGC-7901细胞后,其吸光度随着时间延长明显快速降低,而对照组未感染KGHV500的SGC-7901细胞吸光度则降低缓慢,在第1、2、3、4、5天时测得实验组吸光度分别为1.37±0.32、0.36±0.15、0.14±0.06、0.08±0.03 和 0.03±0.01,对照组为 1.39±0.43、1.32±0.37、1.19±0.29、1.05±0.21和0.82±0.15,表明KGHV500对SGC-7901胃癌细胞有较强的杀伤力。TUNEL凋亡实验发现:实验组KGHV500感染的肿瘤细胞中凋亡细胞数目比对照组明显增多,细胞凋亡率分别为(68.36±5.15)%和(12.62±3.41)%。表明KGHV500可以有效促进SGC-7901细胞凋亡。四、人外周血分离出单个核细胞,并经多种细胞因子诱导培养成CIK细胞,CIK细胞经鉴定表面CD46蛋白表达阳性,且表达率较高,主要定位在细胞膜上。五、成功建立人胃癌裸鼠移植瘤模型,分实验组及四个对照组,分别尾静脉注射CIK+KGHV500、CIK+KGHV500、CIK细胞、KGHV500、PBS进行治疗。六、体内实验中,连续动态监测裸鼠生长状态及移植瘤大小,肿瘤生长曲线显示:实验组尾静脉注射KGHV500+CIK细胞,对照组分别尾静脉注射 CIK+KGHV500、CIK+KGHV400、CIK 细胞、KGHV500、PBS,在治疗后第34天时,各组肿瘤大小达到124.82±50.23、255.87±49.42、915.23±75.68、1112.08± 150.45、1389.85±205.81,实验组肿瘤生长较缓慢,变化不明显,而各对照组肿瘤生长较快,且易发生溃烂。体内TUNEL凋亡检测实验发现:实验组尾静脉注射CIK+KGHV500的肿瘤组织中细胞凋亡率高达(82.68±11.15)%,细胞凋亡个数明显比对照组多,结果表明了 CIK细胞联合KGHV500对裸鼠移植瘤有明显的促凋亡作用。免疫组化染色结果显示:实验组裸鼠除了脾脏中发现少量腺病毒表达外,其余脏器均没有检测到腺病毒的阳性表达,而单独尾静脉注射KGHV500的裸鼠,其心、肝、脾、肺、肾和胃等脏器组织中均检测到腺病毒阳性表达;用Hscore评分法计算两组裸鼠肿瘤组织中腺病毒和单链抗体免疫组化染色的Hscore评分和阳性细胞百分数,随着治疗时间延长,实验组肿瘤中腺病毒和单链抗体的Hscore评分及阳性细胞百分数逐渐升高;而对照组肿瘤的Hscore评分及阳性细胞百分数均较低。Western-blotting结果显示:实验组裸鼠除了脾脏中发现少量单链抗体蛋白表达外,其余脏器均没有检测到蛋白表达,而单独尾静脉注射KGHV500的裸鼠,除脑组织以外,其心、肝、脾、肺、肾和胃等脏器组织中均检测到单链抗体蛋白表达;以上实验结果表明CIK细胞携带重组腺病毒KGHV500治疗裸鼠胃癌移植瘤的安全性较好。[结论]体外实验结果表明肿瘤特异性增殖腺病毒KGHV500可以抑制SGC-7901胃癌细胞的迁移能力、侵袭能力及细胞活力,并可促进细胞凋亡。体内实验中,肿瘤生长曲线显示CIK携带KGHV500治疗肿瘤有明显的抗肿瘤生长作用;并且KGHV500可以利用CIK细胞作为载体,安全有效的靶向肿瘤部位。证实了CIK细胞和KGHV500共同介导抗p21ras单链抗体治疗胃癌移植瘤的有效性和安全性较好,为肿瘤的基因靶向治疗提供了一种新的方法。
施军霞, 苏长青, 李林芳, 钱其军[9]2008年在《肿瘤特异增殖腺病毒CNHK200-hEndo的构建及其抗裸鼠肺癌移植瘤疗效》文中研究表明目的:构建一种携带抗肿瘤血管生成基因Endostatin的新型肿瘤基因-病毒治疗系统CNHK200-hEndo,观察其对人肺癌细胞裸鼠移植瘤的治疗效果。方法:克隆人抗血管生成基因Endostatin,利用病毒重组技术将该基因插入肿瘤特异性增殖腺病毒CNHK200的基因组中,扩增并纯化CNHK200-hEndo病毒。建立裸鼠肺癌细胞移植瘤模型,观察CNHK200-hEndo抗肿瘤的效果,并与非增殖病毒Ad-hEndo对照。结果:成功构建一种新型的基因-病毒治疗系统CNHK200-hEndo,其E1b55kDa蛋白表达缺失。CNHK200-hEndo能在肿瘤细胞内大量增殖并高效表达Endostatin蛋白,表达量明显高于非增殖病毒Ad-hEndo(P<0.05)。动物实验证实,CNHK200-hEndo对人类肺癌细胞的裸鼠移植瘤模型具有抑制肿瘤生长的疗效,与Ad-hEndo和空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:构建的基因-病毒治疗系统CNHK200-hEndo能在肺癌细胞中增殖复制,提高Endostatin蛋白的表达,明显抑制肺癌细胞移植瘤的生长。
沈李李[10]2017年在《慈菇瓜贝方抑制乳腺癌小鼠肿瘤生长以及抗复发转移的实验研究》文中研究表明研究背景:乳腺癌作为女性最常见的恶性肿瘤,已严重威胁到女性的身心健康甚至生命。目前主要的治疗方法有外科手术、化疗、放疗、内分泌治疗、分子靶向治疗以及中医治疗等。根据导师李涌健教授多年的临床经验,发现慈菇瓜贝方抗乳腺癌疗效显着。因此,本课题以此为对象,研究其抗乳腺癌的作用及机制。研究目的及意义:本课题基于荷瘤小鼠模型,研究观察慈菇瓜贝方对乳腺癌小鼠瘤体形成的影响,肺转移结节以及血清TGF-β1,研究药物干预后对生存期、乳腺癌复发转移以及对免疫功能的影响,为慈菇瓜贝方抗乳腺癌作用及抗乳腺癌复发转移的临床研究提供实验基础和依据。研究方法:选取健康的实验BALB/C系小鼠50只,应用小鼠乳腺癌细胞株4T1,对其中50只小鼠采用注射法建立乳腺癌小鼠模型,并按给药情况分为5组----中药组(高浓度组2.4g生药/mL、中浓度组1.2g生药/mL、低浓度组0.6g生药/mL)、对照组、化疗药组(阿霉素)。对比各组成瘤时间,观察药物干预后对瘤体形成的影响;测量肿块体积、瘤重变化,观察药物干预肿瘤生长情况;通过对荷瘤小鼠肺脏切片染色以及测定血清TGF-β1,观察药物干预肿瘤转移情况;对比小鼠生存期长短,分析药物干预后是否能够延长生存期;通过计算荷瘤小鼠脾指数、胸腺指数,观察药物干预后对免疫功能的影响。研究结果:(1)中药组小鼠生存期高于其它荷瘤小组,提示慈姑瓜贝方有延长生存期的作用;(2)中药组较对照组瘤重轻、瘤体积小,提示慈姑瓜贝方有一定的抑制4T1乳腺癌小鼠肿瘤生长的作用,具有统计学意义;(3)实验观察到对照组荷瘤小鼠胸腺体积缩小,个别胸腺分叶不清,颜色呈灰白色,脾脏颜色较变淡,而中药组则显现荷瘤小鼠脾脏深红肿大。实验结果提示,慈菇瓜贝方可通过刺激免疫器官增生,增加小鼠抗肿瘤免疫反应;中药组的脾脏指数与胸腺指数均明显上升,提示慈菇瓜贝方对免疫器官具有保护作用;(4)实验结果显示中药组肺结节数明显少于对照组;中药组血清TGF-β1较对照组有明显增多趋势,提示慈姑瓜贝方具有一定的抑制乳腺癌小鼠肺转移的作用。研究结论:本课题以慈菇瓜贝方为研究对象,观察到慈菇瓜贝方可一定程度上抑制乳腺癌细胞生长,延长生存期,能激发有效的免疫效应来起到抑制肿瘤生长,同时,可以有效抑制肿瘤转移。
参考文献：
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