1，2湖南中医药大学药学院 湖南长沙 410208
【摘 要】目的：建立蒲黄总黄酮的含量测定方法，为蒲黄总黄酮制剂的开发利用和质量控制提供依据。方法 采用紫外分光光度法于422nm处测定蒲黄中总黄酮含量，结果 蒲黄总黄酮在0.00424～0.0424mg/ml 范围内线性关系良好，其回归方程为A=41.011C+0.0408，r=0.9995，方法的回收率值为101.9%（RSD为1.68%）。结论 该方法简便、快捷、准确，可作为蒲黄中总黄酮的含量测定方法。
【关键词】蒲黄；总黄酮；紫外分光光度法
ABSTRAT：
Objective To establish the method for determination of total flavonoids in Pollen Typhae Caudaline
Result：
Methods：The total flavonoid contents in Pollen Typhae Caudaline
were determined by using UV spectrophotometry with orientin as a standard product.
Result：The method for determination of total flavonoids in Pollen Typhae Caudaline by using UV spectrophotometry was established.Rutin has a good linear relationship in the range of 0.00424~0.00424mg／ml，A=41.011C+0.0408，r=0.9995.The average recovery rate was 101.9％.the RSD was 1.71％.Conclusion：The method was simple，accurate an d reliable，and can be used to determine the quality of Total flavonoids in Pollen Typhae Caudaline.
Key words：Pollen Typhae Caudaline；total flavones；UV spectrophotometry
蒲黄为香蒲科植物水烛香蒲、东方香蒲或同属植物的干燥花粉。其性甘味平，具有止血，化瘀，通淋的作用，主治吐血、衄血、崩漏、外伤出血、经闭痛经、脘腹刺痛、跌打肿痛、血淋涩痛[1-2]等症。临床上常用于心血管疾病的治疗，黄酮类、甾类、多糖类、氨基酸类等多种成分[3]。其中黄酮类成分是该药物抗炎、镇痛、保护心血管的主要有效部位[4]。现代药理研究进一步证明，蒲黄还具有改善微循环、降血脂、抗动脉粥样硬化、对高脂血症所致内皮损伤的保护作用等多种药理活性[5-6]，且毒副作用少，用药安全，药理作用十分广泛。本文拟对蒲黄中的总黄酮进行含量测定方法的研究。
1.仪器与试药
1.1 仪器
UV－1600紫外分光光度计 （北京瑞利分析仪器公司）
电子分析天平 （美国奥豪斯公司）
SK3300H超声仪 （上海科导超声仪器有限公司）
DK-S22电热恒温水浴锅 （上海精宏实验设备有限公司）
LD5-10低速离心机 （湖南星科科学仪器有限公司）；
1.2 材料与试药
蒲黄药材购自湖南省医药销售有限公司，产地分别为宁夏，内蒙古，安徽，经鉴定符合《中国药典》2005年版规定。
芦丁对照品（100080-201407，供含测用），由中国药品生物制品检定所提供；
甲醇（湖南汇虹试剂有限公司，批号20131215）乙酸钠（湖南汇虹试剂有限公司，批号20130913）三氯化铝（湖南汇虹试剂有限公司，批号20140318）蒸馏水（实验室自制）
2.方法与结果
2.1样品的配制
2.1.1 供试品溶液的制备
蒲黄药材称取25g，加95%乙醇煎煮2次，每次加8倍量溶剂，提取时间为2小时，合并煎液，滤过，定容至500ml，备用。
2.1.2 对照品溶液的制备
精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品0.0106g，置25ml量瓶中，加甲醇20ml，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml中含芦丁0.212mg）
2.2 测定方法及检测波长的选择
2.2.1 直接测定法 精密量取供试品溶液2ml置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，以溶剂为空白，在200～800nm 范围内扫描光谱，同时依法操作得同条件下芦丁对照品光谱图。经比较，该法供试品中干扰较大，不拟采用。
2.2.2 硝酸铝显色法 精密量取供试品溶液2ml置25ml 量瓶中，加5%亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6min，加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6min，加10%氢氧化钠溶液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15min，以相应试剂为空白，在200～800nm 范围内扫描光谱，同时依法操作得同条件下芦丁对照品光谱图。本法在操作过程中供试品出现絮状沉淀，影响准确性，不拟采用。
2.2.3 三氯化铝显色法 精密量取供试品溶液2ml置25ml量瓶中，加0.1mol/L 三氯化铝溶液3ml 及1mol/L 乙酸钠溶液5ml，加甲醇至刻度，摇匀，放置5min，以相应试剂为空白，在200～550nm 范围内扫描光谱，同时依法操作得同条件下芦丁对照品光谱图，在422nm处有最大吸收，故选择422nm为测定波长。
2.3标准曲线的绘制
精密量取芦丁对照品溶液0.5ml，1.0ml，2.0ml，3.0ml，4.0ml，5.0ml，分别按2.2.3三氯化铝显色法项下方法，自“置25ml 量瓶中”起，第1 份试样为空白，在422nm 波长处测定吸光度。以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为A=41.011C+0.0408，r=0.9995，结果表明，芦丁对照品在0.00424～0.0424mg/ml 范围内线性关系良好。芦丁对照品标准曲线见图2。
图2 芦丁对照品标准曲线图
2.4 提取溶剂的选择
称取蒲黄药粉5g，置于250ml圆底烧瓶中，分别以甲醇、95%乙醇和50%乙醇各50ml，回流提取2小时，放冷，滤过，置50ml容量瓶中，用相应溶剂定容至刻度，分别取续滤液2ml，按2.2.3项下显色，以总黄酮含量为评价指标优选溶剂的种类，结果如表1。
由上表可知，30分钟可基本提取完全，故以30分钟为药材提取时间。
2.7精密度试验
精密吸取同一对照品溶液2ml，依上述方法显色后测定其吸收度，重复测定5次，其吸收度的RSD=0.67%，表明仪器精密度良好。
2.8稳定性试验
精密吸取供试品溶液2.0ml，置25ml的容量瓶中，依上述2.2.3项下方法显色，在422nm处每隔1小时测定一次吸收度，结果表明供试品溶液在4h内稳定，其吸收度的RSD=1.12%，样品溶液显色后可在4h内测定。
2.9重复性试验
精密吸取供试品溶液2.0ml，共5份，置于25ml的容量瓶中，依上述方法显色，在422nm处重复测定5次，总黄酮含量为12.5mg/g，RSD=1.72%，表明样品重现性良好。
2.10加样回收率试验
精密吸取已知含量（0.263mg/ml）的供试品溶液1ml，共6份，置25ml容量瓶中，再精密移取芦丁对照品溶液（0.212mg/ml）各1ml，然后按上述方法制备供试品溶液，并测定含量，计算回收率，结果见表4。
3.讨论
3.1蒲黄中黄酮主要为山奈酚、槲皮素、异鼠李素的衍生物及柚皮素等，在本实验中发现，蒲黄总黄酮甲醇提取液在加入NaNO2-Al（NO3）3-NaOH试剂后即产生絮状沉淀，可能是槲皮素中3位羟基对反应有影响[7]。而使用三氯化铝显色法时，加入AlCL3-NaAC试剂后，颜色由淡黄转为亮黄，但以水稀释时出现轻微浑浊现象，换成甲醇定容后浑浊消失，且稳定性良好，故选用改法测定。
3.2 在考察蒲黄总黄酮的提取方法时，除了考察超声提取与回流提取的方法，还考察了以甲醇为溶剂。采用索氏提取蒲黄总黄酮，结果其提取效果和超声提取相差不大，但是其耗时长，方法也很繁琐。因此，采用超声提取法作为蒲黄总黄酮的提取方法。
本实验方法简便，快捷，结果准确，为蒲黄中总黄酮的开发利用提供了依据。
参考文献：
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[2]苑可武，徐文豪.蒲黄的化学及药理研究概况[J]，1996，27（11）：693-696.
[3]王丽君，廖茅川，肖培根.中药蒲黄的化学与药理活性[J].时珍国药研究，1998，9（1）
[4]高迪飞，王立英，段大航.中药蒲黄对循环系统作用研究现状[J].中国民康医学，2008，20（2）：160-167.
[5]刘成彬，张少聪.中药蒲黄的药理与临床研究进展[J].世界中西医结合杂志，2009，13（2）：39-40.
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[8]杨芳.蒲黄之药理[J].浙江中医学院学报，1998，（01）：033
基金项目：湖南中医药大学校级青年基金项目（99820001-90），焦筱淇，女，汉族，1985年出生，籍贯湖南长沙，研究生学历，硕士学位，实验师。
论文作者:焦筱淇, 夏新华
论文发表刊物:《航空军医》2015年10期供稿
论文发表时间:2015/12/21
标签：蒲黄论文; 溶液论文; 芦丁论文; 显色论文; 精密论文; 黄酮论文; 氯化铝论文; 《航空军医》2015年10期供稿论文;