沈娜惠 （常州市肿瘤医院检验科 213001）
【摘要】目的 探讨用常规抗凝管和血常规管检测凝血四项指标对结果产生的影响，规范采血。方法 对40例患者分别用常规血凝管和血常规管各抽取一管血液，分离血浆后在BE全自动血凝仪Compact-XR上检测凝血四项指标（PT,APTT,TT,FIB），对用两种抗凝管抗凝血浆所得的PT,APTT,TT,FIB结果进行比较和线性回归分析，分析其相关性及结果间有无显著性差异。结果 与常规血凝管的抗凝血浆比较，血常规管抗凝血浆的PT,APTT,TT延长，FIB含量降低。并且两种抗凝方式的PT,APTT,TT,FIB结果间相关性好，但两种抗凝方式结果间有显著性差异。结论 在现有的技术及参考范围下用血常规管来检测凝血四项指标不可取，临床上应该规范采血。
【关键词】血常规管（EDTAK2抗凝血浆） 常规抗凝管（柠檬酸钠抗凝血浆） 凝血四项指标
【中图分类号】R446.11 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2013）32-0019-02
血液凝固是血液由液体状态转变为凝胶状态的过程。1964年，Macfarlane,Davies和Ratnoff分别提出了凝血过程的“瀑布学说”，这一学说认为凝血是一系列的酶解反应过程，在这一过程中，凝血因子相继通过酶解激活，由无活性的酶原转变为有活性的酶，而每步酶解反应均有放大效应[1]。凝血功能四项指标（PT,APTT,TT,FIB）的检测对临床疾病的病程发展，诊断，预后及治疗的监测和评估有十分重要的意义。然而这些项目的检测影响因素很多，抗凝剂的选择就是其中之一。我院现阶段凝血项目检测都用的是常规血凝管即用柠檬酸钠抗凝管，但在实际情况中偶尔会发生不规范采血的情况，临床上会用血常规管即EDTAK2抗凝管来抽取抗凝血。不同的抗凝管对应的是不同的抗凝剂，抗凝剂的改变会使凝血结果发生何种变化，两种抗凝管能否通用。为了解决这个疑惑，现本人抽取40例无出血倾向和肝脏疾病患者，用两种不同的抗凝管各抽取血液，检测PT,APTT,TT,FIB的结果并对比分析，现总结分析如下。
1.资料与方法
1.1标本来源 收集本院无出血倾向及肝脏疾病者40例，其中男20例，女20例，年龄20-55周岁。用常规抗凝管和血常规管各抽取一管血液，血液标本3500r/min离心5分钟，标本无溶血，脂血，黄疸。
1.2主要仪器与试剂 主要检测仪器为德国BE血凝仪Compact-XR及其配套反应杯，经性能评价，仪器符合要求，室内质量控制和卫生部室间质量评价均为优良。主要试剂：PT 试剂盒（批号4001205） 、APTT 试剂盒（批号40111031） 、TT 试剂盒（批号4021039） 、纤维蛋白原试剂盒（批号4032048）及高岭土（批号4038025）均购自上海太阳生物技术有限公司。
1.3抗凝管 血常规管：品牌为德国VACUETTE非可替，试管内壁均匀喷涂液体EDTA K2，每毫升血液含1.8毫克EDTA。
常规血凝管：品牌为德国VACUETTE非可替，夹层血凝管外层为PET（聚乙烯）材质，内层为PP（聚丙烯）材质。PET材质可以有效保持试管真空，PP材质减少对血液中凝血因子的激活作用，能有效抑制血液凝固。PP材质还能防止液体添加剂的逐渐蒸发，保证柠檬酸钠溶液浓度的长期稳定，以获得准确可靠的测试结果。同时，双层管减少空气死腔，采血后空气对血液的影响降至最小。抗凝剂为3.8%柠檬酸钠，抗凝剂0.3ml。
1.4方法 在规定检测时间内，严格按照仪器使用说明和实验室标准操作程序（standard operational procedure ，SOP） ，采用Compact-XR全自动血凝仪进行检测,检测方法为凝固法。
2. 结果
两种抗凝管所测得凝血酶原时间（PT），活化部分凝血活酶时间（APTT），凝血酶时间（TT）；纤维蛋白原含量(FIB)数值见表1。
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表1 两种抗凝管对应的PT,APTT,TT,FIB检测结果
柠檬酸钠抗凝血浆EDTAK2抗凝血浆
PT（s）
APTT（s）
TT（s）
FIB（s）13.06±1.34 35.48±6.43 11.76±0.72
3.6±1.423.46±6.66 57.9±18.07 15.96±4.13 2.50±0.65
2.1凝血酶原时间（PT） 柠檬酸钠抗凝血的PT结果做Y轴，EDTAK2抗凝血的PT结果做X轴，经线性回归统计，两者间PT的线性方程为y=0.12x+10.24，相关系数r=0.61，说明PT结果相关性好。再做t检验，t=5.11>t0.05/2,39，P<0.05，差异有显著性。
2.2活化部分凝血活酶时间（APTT） 柠檬酸钠抗凝血的APPT结果做Y轴，EDTAK2抗凝血的APPT结果做X轴，经线性回归统计，两者间APPT的线性方程为y=0.38x+13.48，相关系数r=0.72，说明PT结果相关性好。再做t检验，t=5.07>柠檬酸钠抗凝血的PT结果做Y轴，EDTAK2抗凝血的PT结果做X轴，经线性回归统计，两者间PT的线性方程为y=0.12x+10.24，相关系数r=0.61，说明APPT结果相关性好。再做t检验，t=5.25>t0.05/2,39，P<0.05，差异有显著性。
2.3凝血酶时间（TT） 柠檬酸钠抗凝血的TT结果做Y轴，EDTAK2抗凝血的TT结果做X轴，经线性回归统计，两者间TT的线性方程为y=0.13x+9.68，相关系数r=0.72，说明TT结果相关性好。再做t检验，t=4.37>t0.05/2,39，P<0.05，差异有显著性。
2.4纤维蛋白原含量(FIB) 柠檬酸钠抗凝血的FIB结果做Y轴，EDTAK2抗凝血的FIB结果做X轴，经线性回归统计，两者间FIB的线性方程为y=1.75x-0.79，相关系数r=0.73，说明FIB结果相关性好。再做t检验，t=-4.52l<-t0.05/2,39，P<0.05，差异有显著性。
3. 讨论
实验结果表明与常规血凝管的抗凝血浆比较，血常规管抗凝血浆的PT,APTT,TT延长，FIB含量降低。并且两种抗凝方式的PT,APTT,TT,FIB结果间相关性好，但两种抗凝方式结果间有显著性差异。
生理性止血过程可分为一期止血（主要涉及血管和血小板），二期止血（主要涉及凝血因子和抗凝蛋白）和纤维蛋白溶解三个时相[2]。PT测定是外源性凝血系统较理想和常用的筛选试验。也可作为外源性途径及共同途径凝血因子的定量试验，同时，也可用于口服抗凝剂治疗的监控。主要涉及TF，Ca2+，Ⅶ，Ⅹ[3]。PT检测原理是待测的血浆加入过量的含钙组织凝血活酶，重新钙化的血浆在组织因子存在时激活因子Ⅹ成为Ⅹa,后者使凝血酶原转变为凝血酶，凝血酶使纤维蛋白原转变为不溶性纤维蛋白原，测定凝固所需时间，即为待测血浆凝血酶原时间[4]。APTT测定是内源性凝血系统较敏感和常用的筛选试验，也可作为内源性途径凝血因子的定量试验，可检测除Ⅶ因子外的其他血浆凝血因子，特别是用于因子Ⅷ，Ⅸ，Ⅺ，Ⅻ和前激肽释放酶的测定。同时，APTT测定可用于肝素治疗监控。主要涉及Ⅷ，Ⅹ，Ⅸ，Ⅺ，Ⅻ。APTT检测原理是待测血浆加入部分凝血酶原溶液，在Ca2+参与下纤维蛋白原转变为不溶性纤维蛋白，测定凝固所需的时间，即为待测血浆活化部分凝血活酶时间。TT是检测受试者血浆纤维蛋白原转变为纤维蛋白能力的过筛试验。TT检测原理是待测血浆加入适量的凝血酶溶液，纤维蛋白原转变为不溶性的纤维蛋白，测定凝固所需的时间，即为待测血浆凝血酶时间。FIB检测原理是在高浓度凝血酶存在时，待测稀释血浆的凝固时间与其纤维蛋白原含量成反比关系。
首先，柠檬酸钠和EDTAK2抗凝原理都是能与血液中的钙离子结合形成可溶性螯合物，从而阻止血液凝固，但柠檬酸钠能对凝血因子有很好的保护作用，EDTAK2不仅没有这个作用，而且会影响血小板的聚集。EDTAK2抗凝剂血浆PT,APTT,TT延长很有可能就是因为EDTAK2影响了凝血因子的功能，使凝血时间延长。又由于FIB与血浆凝固时间成反比，因而FIB降低。其次，两种抗凝管里所含抗凝剂的量不同，柠檬酸钠抗凝管里含0.3ml抗凝剂，EDTAK2抗凝管每毫升血液只有1.8毫克EDTA，相比而言，EDTAK2抗凝管加入血液后几乎不对血液稀释，避免了由于抽血量不足时血量与柠檬酸钠的比例发生改变对凝血结果产生的影响[5]，[6]，而实验结果又可以分析出两种抗凝方式结果相关性好，但结果间又有显著差异。这表明了EDTAK2抗凝血浆检测在临床上是可以接受的，但必须建立自己的参考区间。
凝血功能检测结果的准确性直接关系到临床相关疾病的诊断及溶栓治疗时药物剂量的控制。比较两者抗凝血浆的优缺点，个人认为在凝血功能检测中使用传统的常规血凝管即柠檬酸钠抗凝管比较好，因为柠檬酸钠抗凝剂对凝血因子有保护作用，保证了检查结果的准确性，虽然使用柠檬酸钠对抽血量的多少有严格的要求，但这是通过工作人员对自身的严格要求可以做到的。而EDTAK2抗凝虽然对抽血量多少要求不高，但由于不能保护凝血因子，对检测结果存在潜在影响。并且现有的技术及参考范围都是针对的常规血凝管抗凝血浆，对血常规管抗凝血浆不适用。这就要求临床上应该规范采血，如遇特殊情况时，及时与检验人员沟通交流，经常宣传规范采血的意义。检验人员也要综合分析判断凝血结果异常的原因，给临床提供准确的检测结果，指导临床医生的治疗。
参考文献
[1]许文荣主编.临床基础检验学.北京：高等教育出版社，2006:36-64.
[2]许文荣等主编.临床血液学与检验.北京：人民卫生出版社，2007:327-328
[3]范英华.EDTA抗凝血与枸橼酸钠抗凝血检测PT,INR,PTA的结果分析[J].中国中医药资讯,2011,(19)3:23-24.
[4]季明德.使用EDTA抗凝血检测凝血酶原时间[J].血栓与止血学,2009,(15)3:140-141.
[5]李圃.抗凝剂差异与凝血酶原时间关系探讨[J].华西医学，2008,(23)4：753-755.
[6]薛小敏，陆奎英.两种浓度抗凝剂不同采血量检测凝血酶原时间适用性比较[J].医学信息，2011（24）01：88-89.
论文作者:沈娜惠
论文发表刊物:《中外健康文摘》2013年第32期供稿
论文发表时间:2014-1-7
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