解放军第四十四医院药剂科 贵阳 贵阳 550009
通讯作者： 王慧，硕士，主管药师，研究方向：中药化学成分及新药开发，
[摘要] 目的：建立测定六味地黄胶囊中马钱苷含量的HPLC分析方法。方法：采用Zorbax SB-C18色谱柱（5μｍ，4.6 mm×150 mm），流动相：四氢呋喃-甲醇-乙腈- 0.05%磷酸溶液（1:4:8:87）；流速：1ml/min；柱温：40℃；检测波长：236nm。结果：马钱苷在0.0420～0.4620ug范围内线性关系良好（r=0.9999）；加样回收率为98.80，RSD为 1.52。结论：该方法简便、准确、重现性好，可用于六味地黄胶囊提取物的质量控制。
关键词 高效液相色谱；六味地黄胶囊；马钱苷
【中图分类号】R284.1【文献标识码】A【文章编号】1001-5213(2016)09-0379-02
HPLC determination of loganin content in liuwei dihuang capsule
WANG HUI*，PAN YONG-XUE,QIU HONG
( PLA forty-fourth hospital pharmacy Guiyang 550009)
[Abstract] Objective: Establish a determination of loganin content in liuwei dihuang capsule HPLC analysis method. Method: The Zorbax SB - C18 chromatographic column (5 microns, 4.6 mm * 150 mm,Mobile phase: tetrahydrofuran - methanol - 0.05% acetonitrile - phosphate solution (1:4:8:87);Flow rate: 1 ml/min; Column temperature: 40 ℃;detection wavelength 236 nm;Result:loganin inside the range of 0.0420 ～ 0.4620 ug sex good (r = 0.9999);Sample recovery rate was 98.80,RSD was 1.52;Conclusion: The method is simple, accurate, reproducible and can be used for the quality control of liuwei dihuang capsule.
[Key words] HPLC, Liuwei Dihuang Capsules; loganin;
六味地黄胶囊是由熟地黄、牡丹皮、山药、山茱萸、泽泻、茯苓等六味中药经现代工艺提取制成的一种复方制剂，具有滋阴补肾之功，主要用于肾阴亏虚所致的头晕耳鸣，腰膝酸软，骨蒸潮热，盗汗。目前临床用于肾阴虚所致的眩晕[1]、2型糖尿病[2-3]、与前列康联合用于治疗前列腺增生症[4]等疾病。关于六味地黄胶囊中马钱苷的含量测定目前文献报道一篇[5]，为了提高六味地黄胶囊的质量标准，更好地控制药材质量，本试验建立了六味地黄胶囊中马钱苷的高效液相色谱含量测定方法，为今后六味地黄胶囊的进一步研究提供理论依据。
1 仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱仪；AG135型电子分析天平；甲醇、磷酸、四氢呋喃、中性氧化铝均为分析纯、纯净水；马钱苷对照品（中国食品药品鉴定研究院，批号为ING201005）；六味地黄胶囊（贵州康纳圣方药业有限公司生产）自购于贵州一树药店（批号：JG140301、JG131202、JG140302）。
2 方法与结果.
2.1色谱条件[6]
色谱柱：Zorbax SB-C18色谱柱（5μｍ，4.6 mm×150 mm）；流动相：四氢呋喃-甲醇-乙腈- 0.05%磷酸溶液（1:4:8:87）；流速：1ml/min；柱温：40℃；检测波长：236nm；理论塔板数按马钱苷峰计算不低于4000。
2.2马钱苷对照品溶液的制备
精密称取马钱苷对照品0.01050g，置10mL 量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取1mL ，置25mL 量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，再精密吸取5mL ，置10mL 量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，即得21.00ug.ml-1的马钱苷对照品溶液。
2.3供试品溶液的制备
取本品适量，研细，精密称取约0.4g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50mL ，称定重量，加热回流1h,放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减少的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10 mL，加在中性氧化铝柱（100~200目，4 g，内径为1cm）上，用40%甲醇50mL洗脱，收集流出液及洗脱液，蒸干。残渣用50%甲醇溶解，并转移至10mL量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4系统适用性及专属性试验 精密吸取马钱苷对照品溶液（21.00ug.mL-1）、供试品溶液及缺酒萸肉的阴性对照溶液各10μl注入液相色谱仪，试验结果得出，在此色谱条件下，马钱苷峰与其他组分峰分离完全，在与马钱苷峰相同的保留时间内，阴性对照无干扰，且马钱苷峰与其他组分峰的分离度大于1.5。
2.5线性关系的考察 精密吸取马钱苷对照品溶液（21.00ug.mL-1）2μL 、6μL、10μL、14μL、18μL、22μL，注入色谱仪，记录色谱图，测定峰面积，以对照品进样量X（ug）为横坐标，峰面积值Y(mv.s)为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：Y=1375457X-200.09（r=0.9999）。结果表明，马钱苷在0.0420～0.4620ug范围内线性关系良好。
2.6精密度试验 精密吸取马钱苷对照品溶液（浓度为21.00ug.mL-1 ）重复进样6次，每次10μL，测定马钱苷峰面积，求得马钱苷RSD 为0.99%，结果表明仪器精密度良好。
2.7重复性试验 取供试品约0.5g，供6份，精密称定，按供试品溶液的制备方法制备。精密吸取供试品溶液各10μl，测定峰面积，计算含量，其RSD值为0.55%，结果表明，重现性良好。
2.8稳定性试验 取同一批号的供试品溶液，在室温下放置，分别于0，2，4，6，8 h 进样，相同色谱条件下进样测定，马钱苷的RSD值为0.33%，实验结果说明：马钱苷在24小时内基本稳定。
2.9 回收率试验 取已知含量的样品6份，每份约0.25g，置锥形瓶中，分别加入一定量对照品溶液,按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，相同色谱条件测定,回收率测定结果见表1。
3 讨论
3.1 2010 版药典只对药材牡丹皮中丹皮酚的含量进行规定，未对有效成分酒萸肉中马钱苷的含量测定进行规定，本研究拟通过HPLC 方法，对六味地黄胶囊中马钱苷进行含量测定，为全面评价六味地黄胶囊的质量提供快速、简便，准确可靠的方法。
3.2 HPLC色谱条件采用不同比例四氢呋喃-甲醇-乙腈- 0.05%磷酸溶液为流动相进行试验，结果发现: 四氢呋喃-甲醇-乙腈- 0.05%磷酸溶液（1:4:8:87）作为流动相进行梯度洗脱, 马钱苷峰与其他组分峰分离完全，在相同的保留时间内，阴性对照无干扰，与其他组分峰的分离度大于1.5。
3.3本试验采用HPLC测定六味地黄胶囊的组分山茱萸中马钱苷的含量。该试验方法不仅使用简便、准确、而且重现性较好，可作为六味地黄胶囊质量评价的方法之一，为质量控制提供实验依据，具有较重要的意义。
参考文献
[1]喻箴,熊亚星.六味地黄胶囊治疗眩晕肾阴虚证临床疗效分析[J]. 云南中医学院学报，2005，28（2）：13-15.
[2]韦咏莲. 六味地黄胶囊治疗2型糖尿病疗效观察[J].华夏医学，2004，17（1）：59.
[3]曾永红，陈凡，王育珊等. 中西医结合防治糖耐量异常及轻型糖尿病疗效观察[J].中国中西医结合脾胃杂志，2000，8（4）：196-198.
[4] 袁冰,臧桐,孙凤岭. 六味地黄配合前列康治疗前列腺增生症临床观察[J].中国医师杂志，2004，增刊：259-260.
[5] 徐灿辉，何维为，何云飞. HPLC 法测定六味地黄胶囊中的毛蕊花糖苷、马钱苷、芍药苷和丹皮酚[J].药物评价研究， 2014，37 （3 ）：257-259.
[6]国家药典委员会.中华人民共和国药典一部[S].中国医药科技出版社，2010：598.
论文作者:王慧,潘永雪,邱洪
论文发表刊物:《中国医院药学杂志》2016年9月
论文发表时间:2016/11/4
标签：地黄论文; 溶液论文; 胶囊论文; 甲醇论文; 精密论文; 色谱论文; 含量论文; 《中国医院药学杂志》2016年9月论文;