1.内江市第一人民医院皮肤科 四川内江 641000；2.泸州医学院附属医院皮肤科 四川泸州 646000
【摘 要】目的：探讨P27和Cyclin D1在鲍温病及皮肤鳞癌中发生发展中的表达及意义。方法：用免疫组化SP法检测P27和Cyclin D1在36例皮肤鳞癌、20例鲍温病和25例正常皮肤组织中的表达。结果：1.P27在鲍温氏病和皮肤鳞癌的阳性的表达率较对照组低（P<0．05），与肿瘤的分级相关（P<0．05）；2.Cyclin D1在皮肤鳞癌、鲍温氏病中的阳性表达率较对照组高（P<0．05），与肿瘤的分级相关（P<0．05）；3.P27和Cyclin D1在鲍温病及皮肤鳞癌中表达呈负相关。结论：1.P27异常低表达和Cyclin D1异常高表达可能与鲍温病及皮肤鳞癌的发病有关；2.P27和Cyclin D1在鲍温病及皮肤鳞癌两两相关性反应了抑癌基因与癌基因互相协调、互相促进的关系。
【关键词】P27；Cyclin D1（周期蛋白D1）；鲍温病；皮肤鳞癌；免疫组织化学
【Abstract】objective：To investigate the expression and significance of P27 and Cyclin D1 occurs in Bowen's disease and the development of skin squamous cell carcinoma.Methods：In 36 cases of squamous cell carcinoma，20 cases of Bowen's disease and 25 cases of normal skin tissue by immunohistochemistry SP method P27 and Cyclin D1.Results：1.P27 positive expression rate in Bowen's disease and squamous cell carcinoma of the lower（P <0.05）in the control group，associated with tumor grade（P <0.05）；2.Cyclin D1 in skin squamous cell carcinoma，Bowen's disease，the positive expression rate higher in the control group（P <0.05），associated with tumor grade（P <0.05）；3.P27 and Cyclin D1 in Bowen's disease and squamous cell skin expression was negatively correlated.Condusion：1.P27 abnormally low expression of abnormally high expression of Cyclin D1 may be associated with the onset of Bowen's disease and squamous cell carcinoma of the skin related；.2 P27 and Cyclin D1 Bowen's disease and squamous cell skin reactions pairwise correlation with cancer in the tumor suppressor gene gene co-ordination，the relationship mutually reinforcing.
【Key words】P27；Cyclin D1；Bowen’s disease；Skin／squamous cell carcinoma；Immunohistochemistry
鲍温病（Bowen’s）是表皮内原位癌，其表现为表皮角质形成细胞异常增殖、排列紊乱、分化不良，其向下侵袭可发展为皮肤鳞状细胞癌（SCC），SCC表现为棘细胞过度增殖、恶性角化不良等。本文通过检测P27和Cyclin D1在鲍温病及皮肤鳞癌中的表达情况，同时分析其二者之间的关系，探讨两种蛋白在鲍温病及皮肤鳞癌中的发生、发展、恶性转化中的关系及其发病机制。
1 材料与方法
1.1标本收集：收集泸州医学院附属医院2005～2013年皮肤科收治的56例鲍温病及皮肤鳞癌患者经手术切除且病理确诊的蜡块，其中鲍温病20例，皮肤鳞癌36例。36例皮肤鳞癌中高分化有19例，中分化有13例，低分化有4例，36例中均无淋巴结转移和远处转移，选取25例为正常皮肤组织做对照组。20例鲍温病标本中，男11例，女9例，年龄32-87岁，平均（65.4±15.3）岁，病程37.9月（1-120月）；36例皮肤鳞癌标本中，男20例，女16例，年龄33-91岁，平均（66.2±17.8）岁，病程67.8月（1-360月）。
1.2试剂：鼠抗人Cyclin D1 单抗；P27鼠抗单克隆抗体均购置福建福州迈新生物技术有限公司。
1.3方法：采用链菌素亲生物素-过氧化物酶法（SP法），实验步骤按产品说明书进行，所有切片染色均在相同条件下进行，每批染色均设阳性对照（用已知阳性乳腺癌组织，北京中山生物技术有限公司提供）作为阳性对照和阴性对照（PBS代替一抗）。
1.4结果判定：P27和Cyclin D1的阳性表达主要位于细胞核，以细胞核呈现明显黄色或棕黄色颗粒者判为阳性，其余判为阴性。每张组织切片随机选择10 个高倍（×100）视野，按平均每个视野中阳性细胞所占百分比分别记录为：阴性（-）：＜10%，阳性分二级：（+）：10%~49%；强阳性：（+ +）：染色细胞数≥50%。
1.4统计学分析：采用SPSS170，样本间差异采用卡方检验，不满足检验的条件时使用Fisher’s精确检验法或者连续性校正公式。而Spearman相关系数是用来分析两两之间的相关性，以a=0.05作为标准，当P＜0.05时存在统计学意义。
2 结果
2.1 P27染色阳性细胞分布：在正常皮肤组织中，P27在基底细胞层有明显阳性表达，为棕黄色至棕褐色核着色，而在非基底细胞层逐渐较少（见图1）；在鲍温病及皮肤鳞癌标本中，P27阳性染色细胞散在分布于肿瘤组织中（见图2～4）。：
图7 Cyclin D1在高分化皮肤鳞癌中的阳性表达（×100）图8 Cyclin D1在低分化皮肤鳞癌中的强阳性表达（×100）
2.3 P27在正常皮肤组织与鲍温病、皮肤鳞癌及其分级中的表达：P27在鲍温病组 织中的表达低于正常皮肤组织，二者之间的差异有统计学意义（χa2=4．73，0.01< P <O．05），（见表1）；P27在皮肤鳞癌组织中的表达显著低于正常皮肤组织，二者之间的差异有显著统计学意义（χc2=25．64，P <O．01），（见表1）；P27在皮肤鳞癌组织中的表达低于鲍温氏病组织，二者之间的差异有统计学意义（χb2=7.78，P<O．01），（见表1）。P27在鲍温病、高分化鳞癌、低分化鳞癌中的阳性表达率呈下降趋势，卡方检验显示差异有统计学意义（χ2=10.125，P<0．01），（见表2）。
2.4 Cyclin D1在正常皮肤组织与鲍温病、皮肤鳞癌及其分级中的表达：Cyclin D1在 鲍温氏病组织中的表达高于正常皮肤组织，二者之间的差异有统计学意义（χa2=9.58，P <O．01），（见表3）；Cyclin D1在皮肤鳞癌组织中的表达显著高于正常皮肤组织，二者之间的差异有显著统计学意义（χc2=29.42，P<O．01），（见表3）；Cyclin D1在皮肤鳞癌组织中的表达高于鲍温氏病组织，二者之间的差异有统计学意义（χb2=4.46，P<O.05），（见表3）。Cyclin D1在鲍温病、高分化鳞癌、低分化鳞癌中的阳性表达率呈上升趋势，卡方检验显示差异有统计学意义（χ2=6.3415，P<0．05），（见表4）。
2.5 P27与Cyclin D1在鲍温病和皮肤鳞癌中表达的相关性
20例鲍温病中，P27和Cyclin D1表达均阳性者4例，均阴性者1例，P27阳性，Cyclin D1阴性的为11例；而P27阴性，Cyclin D1阳性的为4例，经Spearman 等级相关性分析得出结论，Cyclin D1 与P27 在鲍温氏病中的表达中呈负相关（r=-0.466，P<0．05）。36例皮肤鳞癌中，P27和Cyclin D1表达均阳性者5例，均阴性者3例，P27阳性，Cyclin D1阴性的为8例；而P27阴性，Cyclin D1阳性的为20例，经Spearman 等级相关性分析得出结论，P27表达与Cyclin D1表达呈负相关（r=-0.43，P<0．05）。
3 讨论
在很多高等的动物细胞中均发现有P27抑癌基因的表达，其水平表现出周期性的特点其。编码的蛋白能抑制G1期CDK-细胞周期蛋白复合物活性而使细胞停滞在G1期。另外，P27蛋白的减少削弱了G2-M期的细胞阻滞作用，导致遗传学不稳定性增加[1]。P27蛋白低表达或不表达均会导致细胞的异常增殖，导致肿瘤的发生和发展。本研究发现在皮肤鳞状细胞癌组织中P27 蛋白有低表达，且显著低于鲍温病（BD）和正常皮肤组（P<0.05）。在鳞癌组中低分化组P27 蛋白表达显著低于高、中分化组（P <0.05），P27 低表达与临床分期有关，差异有显著性（P <0.05）。P27表达量在不同组织中是不相同的，如癌前病变的组织表达最多，良恶性肿瘤次之，而处于肿瘤的早期甚至晚期的量是最少的。阎庆辉[2]等对50例大肠癌的研究表明P27与肿瘤的分化程度呈负相关。另外，亦有大量研究[3-4]证明P27表达的缺失或减少与食管癌、肝癌、口腔癌、前列腺癌、淋巴瘤等恶性肿瘤的浸润性及预后不良密切相关，因此P27抑癌蛋白的低表达与这些癌症的发生有可能存在一定的关系。
随着遗传学和分子生物学研究的迅速发展，国内外学者对肿瘤的发生发展进行大量研究，认为肿瘤是一类细胞周期性疾病，细胞周期的紊乱在很大程度上可以诱导癌细胞的产生和发展，研究发现细胞周期素D1，即Cyclins D1扮演着细胞周期的正常调控。Cyclins D1与癌细胞的发生有密切的联系，并且有关癌症的恶化和癌细胞的转移，因此其被作为癌基因。本研究发现Cyclins D1 在皮肤鳞癌组中的高表达与另两组有显著性差异（P <0.05），表明Cyclins D1 作为细胞周期正调控因子，其高表达行为加速了细胞周期进程，使细胞增殖失控。邵晋晨等［5］总结出，在Cyclin D1 蛋白表达上，已经发生癌变的组织和平常的组织和是明显不相同的。
P27 蛋白的低表达或不表达及Cyclin D1 蛋白的高表达共同促进肿瘤的进展，还表现为相互协同的作用。Cyclin D1 和P27 蛋白都通过与CDK 结合来实现其对细胞周期的调节功能。CyclinD1 和P27 通过对G1 期的正负调控来调节细胞周期进程，二者的异常引起细胞周期调控紊乱，导致细胞异常增殖，形成恶性肿瘤。金锦莲等[6]对70例大肠癌研究分析发现P27 蛋白呈低表达，CyclinDl呈高表达，两者的差异呈负相关，有统汁学意义（P <0.05）。恶性肿瘤的发生受到很多因素、很多环节的影响，其中细胞周期调控紊乱是细胞异常增殖的主要原因之一，细胞周期及其调控机制与肿瘤的关系已成为当今研究热点，对于周期的调节，P27与cyclin D1的作用是举足轻重的，现在在研究者中已得到了承认，而且研究者对于以上两者之间是否存在协同作用这一点也给予了重视。本研究结果显示，鲍温氏病和皮肤鳞状细胞癌中中两者的异常表达呈显著的负相关（P <0.05）。提示P27和Cyclin D1在鲍温病及皮肤鳞状细胞癌的发生、发展过程中具有协同作用。
参考文献：
[1] Payne SR，zhang S，Tsuchiya K，et aL，p27kipl defieiency impairs G2／M arrest in response to DNA damage，leading to an increase in genetic instability.Mol Cell Biol，2008，28（1）：258—268．
[2] 阎庆辉，任鹏涛，王凤安．等．大肠癌中p2t。p27及c—Met的表达[J]．中华实验外科杂志。2005．22（9）：1030．
[3]刘海明．p27在食管癌变过程中的表达[J]．中国医药指南，2012，35（10）：513-514.
[4]张静静，赵桂秋，林红，杨先，林静.Skp2、p27、PTEN在眼附属器B细胞非霍奇金淋巴瘤中的表达和意义[J]．中华眼科杂志，2012，48（12）：1107-1112.
[5] 邵晋晨，吴继锋．胃癌端粒酶逆转录酶基因的表达与细胞周期调控因子的关系及意义．安徽医科大学学报，2002，37（4）：328．
[6]金锦莲 张端莲 谈新提.应用组织芯片检测大肠癌组织中p27和cyclin D1的表达及意义 [J].中国组织化学与细胞化学杂志，2012，21（2）：113-117.
论文作者:胡于良1,熊霞2（通讯作者）
论文发表刊物:《航空军医》2015年11期供稿
论文发表时间:2015/12/23
标签：皮肤论文; 细胞论文; 阳性论文; 组织论文; 周期论文; 蛋白论文; 统计学论文; 《航空军医》2015年11期供稿论文;