李玉平[1]2001年在《菊科植物杀菌活性系统筛选的初步研究》文中研究指明菊科（Compositae）是被子植物中最大的一个科，也是化学成分最多、最复杂的,最进化的科之一，约有1000属，25000—30000种，我国约有200余属，产于全国各地。国内外主要对它们的杀虫活性物质进行了研究或对其化学成分进行研究。但迄今为止，对菊科植物杀菌活性的研究仅见零星报道。鉴于此，笔者于1999年7月至2001年6月亲自采集鉴定，并选取了菊科植物15属25种植物进行了杀菌活性的系统筛选的初步研究。论文采用离体生测、活体生测及组织生测相结合的筛选方法，用农业中危害性大且具代表性的番茄灰霉（Botrytis cirerea Pers. et Tris）、小麦赤霉（Gibberella zeae(schw) Petch ）、玉米大斑（Exserohilum turcicum leonard）、辣椒疫霉（Phytophtora capsici Leon）、苹果炭疽（Glomerella cingulata Schr）、黄瓜霜霉（Pseudoperonospora cubensis（ Berk.et Curt.） Bostr）、小麦白粉（Erysiphe graminis DC.f.sp.tritici E.Marshal）七种病原真菌为供试菌种，对菊科植物15属25种植物样品的丙酮提取液进行了杀菌活性的系统筛选研究 。结果如下：①所选菊科植物样品的丙酮提取液基本上至少对一种供试病原菌有抑制作用，天明精属、旋覆花属、蒿属等较其它属植物样品表现了更强的活性；② 选取了在离体和活体及组织生测筛选中对供试病原菌都有很强抑制作用的大花金挖耳（C. macrocephalum Franeh. et Sav.）和蓼子朴（I. sal solodeb(Turcz) Ostenf）的全株分部位用溶剂提取并做生测，结果发现，大花金挖耳主要活性成分集中在花中，其次是叶、茎和根中；蓼子朴的主要活性成分集中在花和叶中；③ 大花金挖耳花中的活性成分在丙酮和乙醇溶剂中溶解性都很好，故选这两种溶剂做为大量提取所用的溶剂；④在实验中，发现大花金挖耳花活性成分的热提液（80℃）较冷提液（室温）生测结果略好，故本实验在大量提取中创新采用了热提和冷提相结合的循环提取法，节约了提取时间和溶剂；⑤大花金挖耳花的丙酮提取液对小麦赤霉、苹果炭疽、玉米大斑、辣椒疫霉、番茄灰霉等5种供试病原真菌的EC50，分别是3280.34μg/ml、3932.28μg/ml、100.97μg/ml、1278.49μg/ml、5259.20μg/ml。另外，采用试管预试法和薄板层析预试法，对顺序提取中有活性的部分进行成分预试，结果表明，大花金挖耳花中含有黄酮类、内酯和香豆素类、植物甾醇及萜类、糖类等化合物。本研究在菊科植物资源杀菌剂开发与利用方面，为今后的研究提供了可借鉴的基本依据和思路。同时，也为直接利用植物材料配制农药和创造我国自己的新型农药“模板”提供理论和实践依据。
韩小冰[2]2008年在《蒿属植物粗提物杀虫和抑菌活性的初步研究》文中研究指明菊科(Compositae)是被子植物中化学成分最多、最复杂化的、最进化的一个科,而蒿属是菊科中杀虫和抑菌活性较强、并且在黑龙江地区分布较广泛的一个属。如果能从蒿属中找出既杀虫又杀菌的活性物质,无疑具有重要意义。本文以黑龙江地区常见的5种蒿属植物为研究对象,对其进行了杀虫活性和抑菌活性的初步研究。主要结果如下。(1)杀虫试验中首先对舞毒蛾3龄幼虫进行处理,筛选出最适的提取方法,结果表明:5种植物采用超声波提取法提取的粗提物杀虫效果最好,采用冷浸法提取的粗提物拒食效果最好。(2)触杀和胃毒试验采用超声波提取法,拒食试验采用冷浸提取法,进行不同溶剂提取的粗提物对舞毒蛾3龄幼虫毒力测定试验,结果如下:大籽蒿、黄花蒿、猪毛蒿具有较强的触杀作用,5种蒿属植物均具有一定的拒食作用。粗提物浓度为10mg/ml时,触杀杀虫活性以大籽蒿叁氯甲烷的粗提物最高,其72h的校正死亡率为73.33%。胃毒杀虫活性普遍不高,最高的为猪毛蒿丙酮粗提物,其72h校正死亡率也仅为40.00%。拒食活性就溶剂而言,叁氯甲烷活性较高。就植物而言,以野艾蒿为最好,其乙醇、叁氯甲烷、石油醚、丙酮粗提物24h拒食率分别达到68.98%、75.84%、78.58%、70.26%,48h的拒食率分别达到75.30%、87.67%、89.33%、80.31%。(3)超声波不同提取条件对林木害虫的作用效果试验结果表明:不同提取时间、不同的料液比、不同的提取次数、植物不同的粉碎细度对林木害虫的作用效果均有一定的影响。超声波提取时间以40min为宜;超声波料液比以1:20为宜;超声波提取次数以3次为宜;粉碎细度以60目为宜。(4)光活化作用筛选试验结果表明:5种植物中仅猪毛蒿有光活化特性。对猪毛蒿进行触杀、胃毒和拒食试验表明,经过光照处理的比没有经过光照处理的杀虫和拒食活性要好。(5)抑菌试验中首先对提取溶剂和提取方法进行了筛选,结果表明:黄花蒿、猪毛蒿、野艾蒿的最适提取方法为超声波提取法,大籽蒿最适提取方法为冷浸法,蒙古蒿最适提取方法为索氏法;大籽蒿、黄花蒿的最适提取溶剂为乙醇,猪毛蒿、野艾蒿、蒙古蒿的最适提取溶剂为丙酮。(6)5种植物在最适提取方法和溶剂下提取的粗提物对病原菌抑制作用的试验结果表明:大籽蒿、黄花蒿、猪毛蒿粗提物抑制率较高。其中大籽蒿、黄花蒿、猪毛蒿对拟枝孢镰孢菌病原菌EC_(50)分别为32.44 mg/ml、13.75 mg/ml、13.85 mg/ml;对杨树烂皮病病原菌EC_(50)分别为9.88 mg/ml、8.17 mg/ml、9.58mg/ml,对落叶松枯梢病病原菌EC_(50)分别为20.67 mg/ml、5.05 mg/ml、5.98 mg/ml;对玉米小斑病病原菌EC_(50)分别为16.48mg/ml、17.35 mg/ml、12.85 mg/ml。(7)超声波不同提取条件对病原菌的作用效果试验结果表明:不同溶剂浓度、不同提取时间、不同料液比、不同的提取次数对病原菌的作用效果均有一定的影响。黄花蒿的提取溶剂乙醇以浓度为70%为宜,提取时间以40min为宜,料液比以1:20为宜,提取次数以3次为宜;猪毛蒿提取时间以40min为宜,料液比以1:30为宜,提取次数以3次为宜。
周丽[3]2007年在《高原草地有毒植物对植物病原菌抑菌活性的初步研究》文中研究说明我国幅员辽阔，地理环境复杂，高原草地独一无二的自然生态环境蕴藏着大量的特有植物资源，是一大天然资源宝库。本文以采自青藏高原若尔盖草地的17种有毒植物为材料，主要以稻瘟病菌(Pyricularia oryzea)，水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)，玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum)，小麦赤霉病菌(Gibberella zeae)为活性筛选靶标，采用生长速率法测定了各植物乙醇提取物对4种农作物病原菌菌丝生长的抑制作用。结果表明：在供试浓度为5mg／ml时，高山绣线菊、香芸火绒草、车前状垂头菊、淡黄香青、黄帚橐吾、镰形棘豆、臭蒿等对水稻纹枯病菌、玉米大斑病菌、小麦赤霉病菌的菌丝生长表现出明显的抑制作用，其中高山绣线菊乙醇提取物对4种病原菌都表现出明显的抑制作用，其抑制率分别为100％，97.4％，95.51％，64.86％，对4种病原菌的EC_(50)分别为0.583mg／ml，1.009mg／ml，0.753mg／ml，2.158mg／ml。将高山绣线菊作进一步研究，即：将晒干高山绣线菊乙醇粗提物依次用正己烷、乙酸乙酯、甲醇萃取并获得适量的萃取物；将新鲜高山绣线菊的叶和花用无水乙醇浸泡，并获得乙醇提取物，采用生长速率法测定上述样品对病原菌的活性。结果表明：新鲜高山绣线菊叶和花的乙醇提取物和乙酸乙酯提取物显示出明显的抑制效果。另外，新鲜高山绣线菊叶和花的乙醇提取物对4种病原菌的MFC分别为2mg／ml，1.5mg／ml，2mg／ml，3mg／ml，对4种病原菌的孢子萌发有明显影响，对细菌柑桔溃疡病原菌的生长有一定的抑制作用，在2mg／ml浓度下其抑菌圈的直径达8.5mm。本文的研究结果对于促进我国植物源农药领域的发展、开发利用高原草地有毒植物资源奠定了基础。
李玉平[4]2008年在《大花金挖耳细胞培养活性物质的研究》文中研究说明大花金挖耳(Carpesium.macrocephalum Franch.et Sav)系菊科(Compositae)天名精属多年生草本植物。近代药学研究表明,该植物含有黄酮、萜内酯、甾体等多种化合物,具有清热、解毒、抗肿瘤的医疗作用和杀虫、除草及抑菌等农药活性。由于大花金挖耳生长周期长,生长受到地域和环境因素的限制,所以从大花金挖耳原植物中提取活性成分具有很大的局限性。研究利用细胞组织培养进行大花金挖耳黄酮、内酯的工业化生产是大花金挖耳研究领域的重要方向之一。自2002年以来,笔者首次进行了大花金挖耳愈伤组织诱导及愈伤组织和悬浮细胞培养活性物质的生理生化调控的系统研究,并进行了总黄酮和内酯提取工艺的研究，同时对大花金挖耳组织、细胞培养物的生物活性进行了除草、杀菌活性的初步测试。主要内容如下:1.诱导、筛选并建立了大花金挖耳黄酮0.72%和内酯0.056%含量(培养40d)的愈伤组织无性系RC,优化了RC培养条件,考察了RC愈伤组织无性系的生长和生物合成活性物质的动力特征。试验中以大花金挖耳无菌苗的幼根、下胚轴和子叶为外植体进行愈伤组织的诱导。结果表明:⑴大花金挖耳无菌苗的根是诱导愈伤组织的理想外植体;⑵适宜于诱导松散型愈伤组织的最适培养基是B5+ 2.0～3.0 mg/L NAA + 0.2～0.4 mg/L 6-BA,诱导率可达100%;⑶不同外植体愈伤组织的黄酮、内酯含量以根源愈伤组织最高;⑷B5+3.0 mg/L NAA +0.2 mg/L 6-BA (蔗糖45g/L、pH 5.7、25℃、12h/d)有利于愈伤组织的增殖;⑸根源愈伤组织在继代次数3～12代内黄酮和内酯含量较为稳定;⑹10 min紫外线照射可引起愈伤组织黄酮和内酯含量的提高;⑺MS、B5、NT及其组合培养基中,大花金挖耳愈伤组织生长量及黄酮、内酯产量随培养时间呈“S”型变化,其中NT培养基中愈伤组织的黄酮产量高于其他培养基中愈伤组织的黄酮产量,达9.50 mg/瓶,MS+NT培养基中愈伤组织的内酯产量高于其他培养基中愈伤组织的内酯产量,达0.72 mg/瓶。2.构建了大花金挖耳黄酮和内酯含量分别是1.30%、0.086%(培养20d)的细胞悬浮系及其动力学模型。在愈伤组织培养的基础上,通过培养基种类、激素、生物因子、附加物等单因子及多因子优化组合对大花金挖耳细胞培养的生理、生化调控,得到生长培养基NTB:以NT培养基为基本培养基,附加1.0 mg/L NAA、0.2 mg/L 6-BA、40 g/L蔗糖,培养液pH为5.0～6.0,培养基中添加1 mg/L B3、1～2 mg/L B1,以接种量40～50 FW g/L接种于装有100 ml的250 ml叁角瓶中,置于25±2℃、光照(1500～2000 Lux)12 h/d、摇床转速120 r/min等条件下继代培养。大花金挖耳细胞生长及其黄酮和内酯形成的动力学模型的模拟结果与实验测定值基本吻合,可用于大花金挖耳细胞培养过程的动力学描述。3.初步构建了大花金挖耳细胞悬浮培养黄酮的生产培养基NTF,可得黄酮产量476.97 mg/L。通过NT培养基每个组分、附加物等单因子及多因子优化组合对大花金挖耳细胞培养的生理、生化调控,得到生产培养基NTF:大量元素NH4NO3、KNO3在NT基本培养基的基础上提高0.5倍,微量元素Na2MoO4?2H2O在NT基本培养基的基础上提高2倍,ZnSO4?7H2O、H3BO3、KI、MnSO4?4H2O、CoSO4?5H2O、CuSO4?5H2O在NT基本培养基的基础上提高1倍,附加1.0 mg/L B6,激素1.0 mg/LNAA+0.2 mg/L6-BA,其他培养条件同NTB。4.进行了大花金挖耳细胞培养黄酮生产培养基NTF的调优研究。以基本生产培养基NTF为基础,通过附加激素、前体、诱导子、附加物等因素对大花金挖耳细胞培养的生理、生化调控,获得了显着提高黄酮含量(2.05～2.27%)和产量(516.06～551.76 mg/L)的诱导子水杨酸及硝酸银、激素KT及GA3、前体物苯丙氨酸等几个有进一步研究价值的因素。5.进行了大花金挖耳愈伤组织、悬浮培养细胞胞内外有效成分的提取工艺研究。通过对细胞培养物的不同干燥方式、不同溶剂、不同提取方式的研究,发现大花金挖耳悬浮培养细胞的活性成分主要集中在胞内, -40℃真空冻干和60℃烘干对细胞培养物中的活性成分影响不大,培养物粉碎至40～60目,在料液比1/10～1/15的条件下,以丙酮为溶剂,摇床振荡提取1次(18 h/次)后,超声提取1次(60min/次、功率600W)即可最大量提出活性成分。6.建立了一套大花金挖耳组织、细胞培养活性成分及营养物质消耗的化学检测方法和生物活性追踪的检测方法。通过简便的紫外—可见光分光光度法检测结合对活性物质敏感的病原菌—小麦纹枯和敏感杂草—反枝苋的活性追踪,进行大花金挖耳组织、细胞培养活性物质的生理生化调控。7.对大花金挖耳果实、愈伤组织和悬浮细胞的化学成分进行预试,发现大花金挖耳果实中含有鞣质、内酯、香豆素、酚性成分、甾体、萜类、黄酮及其苷类、多糖及苷类、氨基酸以及挥发油类等类化学成分,与大花金挖耳果实相比,大花金挖耳愈伤组织和悬浮细胞中所含化学成分明显少于果实,主要含有黄酮、酯类、糖类、氨基酸、酚类。针对主要活性物质内酯类进行了GC-MS检测,发现愈伤组织和悬浮培养细胞中均有低含量的内酯类成分，说明大花金挖耳愈伤组织、悬浮培养细胞已经历了黄酮和内酯类化合物的次生代谢的生物合成过程,这为进一步优化调控,增加产量,直至大花金挖耳细胞培养活性物质的工业化生产成为可能。8.初步研究了大花金挖耳细胞培养物对16种病原菌和6种杂草和3种作物种子的生物活性。发现大花金挖耳细胞培养物的工业酒精粗提物及其石油醚、乙酸乙酯、正丁醇等萃取物均对供试病菌和杂草具有一定程度的活性。其中乙酸乙酯萃取物除草活性最高,对反枝苋和紫花苜蓿的EC50分别为0.2945和0.1673 mg/mL,是天明精内酯酮的0.29和0.13倍;石油醚--乙酸乙酯萃取相抑菌活性最高,在10 mg/mL时,对小麦纹枯病、番茄早疫病菌、辣椒疫霉病菌、南瓜枯萎病菌供试菌抑制率均在95%以上,EC50为0.24～3.56 mg/mL。
李玉平, 慕小倩, 冯俊涛, 张兴[5]2002年在《几种菊科植物杀菌活性的初步研究》文中认为以小麦赤霉病菌 (Gibberella zeae (schw.) Petch)、番茄灰霉病菌 (Botrytis cirerea Pers et Tris)、辣椒疫霉病菌 (Phytophthora capsici L eon)、苹果炭疽病菌 (Glomerella cingulata )、玉米大斑病菌 (Exserohilum turci-cum L eonard) 5种病原真菌为供试菌种 ,对菊科 15属 2 5种植物的丙酮提取液进行抑菌活性筛选。结果表明 ,除蒙山莴苣和千里光 2种植物外 ,其他 2 3种植物的提取液对至少 1种供试菌种有 6 0 %以上的抑制作用。臭蒿、大花金挖耳、猪毛蒿 3种植物提取液对 5种供试菌种的菌丝生长抑制率大于 70 %;大花金挖耳、猪毛蒿、天明精、苍耳、蓼子朴等 5种植物样品对 5种供试菌种的孢子萌发抑制率大于 93%;尤其是大花金挖耳、猪毛蒿 2种植物样品的提取液对 5种供试菌种的菌丝生长和孢子萌发的抑制率均大于 70 %,值得进一步研究开发。
邵红军[6]2003年在《瑞香狼毒等植物抑菌活性初步研究》文中研究指明从植物中寻找具有农药活性的物质，研究开发植物源农药是新农药创制的一条重要途径。我国西部地区地域辽阔，有丰富的植物资源，在植物源农药研究开发方面拥有明显的资源优势。张兴、吴文君等曾对该区植物的杀虫作用进行了较为深入的研究。同时，“西北农林科技大学无公害农药研究服务中心”已对该区200余种植物的抑菌活性进行了初步筛选。本研究在此基础上进一步拓宽筛选范围，对新采到的25种植物的抑菌活性进行了测试，并对瑞香狼毒(Stellera chamaejasme)的抑菌活性及其成分进行了初步研究，取得以下结果： 1 用琼胶平板法和悬滴法测定了33种植物丙酮提取物对小麦赤霉病菌、苹果炭疽病菌、辣椒疫霉病菌、番茄灰霉病菌和玉米大斑病菌等5种病原真菌的离体抑菌活性。结果表明，在供试质量浓度为干样0.1g/mL下，紫苞风毛菊和苦参(根)提取物对其中的4种病菌菌丝生长的抑制率高于65％；蒙古蒿(茎叶)提取物对玉米大斑和辣椒疫霉菌丝生长的抑制率均在90％以上，且对小麦赤霉和番茄灰霉孢子萌发的抑制作用均高于70％；瑞香狼毒(根)对玉米大斑和辣椒疫霉菌丝生长和小麦赤霉、玉米大斑和苹果炭疽菌孢子的萌发均有明显的抑制作用。紫苞风毛菊、蒙古蒿(茎叶)和苦参(根)和瑞香狼毒(根)等4种植物样品的抑菌活性较高，值得进一步研究。 2 在生物活性追踪的指导下对瑞香狼毒根中的活性成分进行了分离。以工业酒精提取瑞香狼毒根粉制备乙醇浸膏，去离子水悬浮后依次以石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取；采用常压柱层析和薄层层析等技术，对石油醚和氯仿萃取物进行分离，从石油醚萃取物中分离到3个单体：R_1、R_2和R_3。 3 采用高分辨质谱、核磁共振等波谱技术鉴定了R_1和R_2的化学结构。R_1为3-乙酰化-β-香树脂醇，R_2初步推断为α-3，6-壬二烯酸-β-4-庚烯酸甘油二酯，其中R_1为首次从瑞香狼毒中分离得到。 4 用琼胶平板法和盆栽法测定了瑞香狼毒提取物的抑菌活性。在供试质量浓度为干样0.1g/mL下，石油醚萃取物和氯仿萃取物对番茄灰霉、辣椒疫霉、番茄早疫和水稻稻瘟等病原菌菌丝生长有很好的抑制作用，抑制率均高于75％；在0.08g/mL剂量下，石油醚萃取物和氯仿萃取物对黄瓜霜霉有明显的保护作用，防效分别达76.85％和64.09％，均较乙醇粗提物的防效52.22％为高；5种萃取物对小麦白粉治疗作用较弱，防效均低于40％，石油醚萃取物对小麦白粉有一定的保护作用，防效可达64.9％。 5 离体测试结果表明，在供试浓度为1000mg/L下，3-乙酰化-β-香树脂醇(R_1)对番茄灰霉和水稻稻瘟病菌菌丝生长有明显抑制作用，抑制率均高于70％；盆栽试验结果表明，在500mg/L剂量下，3一乙酞化一p一香树脂醇对黄瓜霜霉的防效为35，2%。
王红刚[7]2008年在《旋覆花提取物抑菌活性评价与分析》文中认为本论文对菊科植物旋覆花(Inula japonica)提取物对植物病原真菌的抑菌活性及主要抑菌化合物的分离纯化进行了研究。采用菌丝生长速率法、孢子萌发法、盆栽幼苗法和离体叶片法对旋覆花各部位粗提物进行了抑菌活性测定,结果表明:旋覆花各部位提取物对黄瓜霜霉病菌、黄瓜白粉病菌、黄瓜炭疽病菌、黄瓜灰霉病菌、番茄早疫病菌、马铃薯(番茄)晚疫病菌和番茄叶霉病菌均有不同程度的抑菌活性,其中旋覆花花序提取物的抑菌活性较高。针对旋覆花花序优化了提取的条件,最终确定了一套简便、经济且有效的提取旋覆花花序的方法,即将花序粉碎过40目筛后,用95%乙醇在50℃条件下提取2次,每次3h,第1次干粉质量(g)与溶剂体积(mL)比为1:10,第2次为1:8,抽滤得提取液,利用旋转蒸发仪(60~℃、0.1 MPa)浓缩至无溶剂滴出。按此方法提取花序干粉25 kg,得到粗提物浸膏2.55kg,收率为10.21%.将旋覆花花序粗提物浸膏用蒸馏水饱和悬浮,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和水饱和正丁醇等不同极性的溶剂萃取,各萃取液经减压浓缩得到5种萃取相浸膏,并进行了抑菌活性测定。结果表明,各萃取组分对黄瓜霜霉病菌、黄瓜白粉病菌、黄瓜灰霉病菌、番茄早疫病菌、马铃薯(番茄)晚疫病菌均有不同程度抑菌活性,其中氯仿萃取组分的抑菌活性较强。利用柱层析、薄层层析、重结晶等分离技术,从氯仿萃取组分中分离到晶体J2,经熔点测定,并运用紫外、红外、核磁等光谱鉴定后,确定为1-O-乙酰基大花旋覆花内酯(ABL)。通过高效液相色谱仪测定,晶体J2的纯度达99.5%以上,同时测定了旋覆花花序粗提物浸膏中ABL的含量为2.45%,并依此推算出了花序中ABL的含量约为0.25%。测定了化合物ABL对6种植物病原菌的抑菌活性,抑菌效果显着,在浓度为0.1 mg/mL时,化合物ABL对番茄晚疫病菌休止孢萌发抑制率可达100%。将花序粗提物浸膏、无水乙醇、乳化剂吐温80按照200:1000:1(w:v:v)的比例充分混合得到0.62%1-O-乙酰基大花旋覆花内酯乳油(0.62%ABL乳油),将其用于防治温棚黄瓜霜霉病,得到了较好的防治效果,表明其具备开发为优良植物源杀菌剂的潜力。
谌馥佳[8]2013年在《菊芋叶片化学成分分析及抑菌活性成分研究》文中研究指明菊芋(Helianthus tuberosus L.)属于菊科(Compositae)向日葵属多年生草本植物,广泛的分布在我国大部分地区,是一种适应性极强,具有生态和经济双重价值的作物。菊芋广泛用于造纸业以及食品、药物、饲料、糖和酒精的工业生产。目前菊芋产品的开发多是利用块茎和茎秆,而在我国多数菊芋叶片未能得到开发和利用,同时也加重了环境污染和资源浪费。由于菊芋地上部分具有抗逆性强,极少病虫害的特点,引起了人们对其化学成分及生物活性的关注。本文对菊芋叶片中抑菌活性成分进行了系统性研究,并开发其防治植物病害的新应用。这对于有效利用和开发菊芋这一自然资源具有重要的意义。本文主要研究结果如下：1.菊芋叶片化学成分中,总糖和总蛋白含量比总酚和总黄酮要高的多。南芋叶片中各成分含量除总黄酮差异不明显外,总糖、总蛋白和总酚均显着高于野生型和青芋。花期是菊芋叶片各化学成分积累的重要时期,总酚、总黄酮、总糖和总蛋白含量均显着高于现蕾期和块茎膨大期。菊芋叶片中水解氨基酸的总含量,可达叶片干重的12.445%,其中脯氨酸、天门冬氨酸、谷氨酸和亮氨酸为菊芋叶片中氨基酸的主要组成成分。游离氨基酸中脯氨酸含量最高。2.本文分析并鉴定了菊芋叶片中的酚类物质,有10种属于绿原酸类(CGAs)化合物,包括3种绿原酸异构体、4种二咖啡酰奎尼酸异构体、咖啡酸、P-香豆酰奎尼酸、阿魏酰奎尼酸,还有4种其他化合物,分别是异鼠李素-O-葡萄糖苷、咖啡酰葡萄糖、山奈酚葡萄糖醛酸苷、山奈酚-3-O-葡萄糖苷。本文研究发现在所有菊芋品种中咖啡酸的含量最低,绿原酸与4,5-二咖啡酰奎宁酸的含量最高。南芋叶片各酚酸类物质的含量显着高于野生型和青芋,因此南芋品种可作为酚酸类物质开发和利用的重要资源。以南芋为例,花期的各种酚酸含量普遍高于现蕾期和块茎膨大期,且差异极显着。3.本文采取的乙醇减压回流法作为抑菌活性物质的提取方法,具有提取效率高、抑菌效果好以及对环境友好等的优点,适合大规模生产的需要。减压回流法所得提取物浸膏的总酚和总黄酮含量显着高于回流法和室温浸提法,绿原酸含量也显着高于其他两种方法。乙酸乙酯层浸膏总酚和总黄酮含量最高,分别可达306.38mg/g和97.33mg/g,这说明菊芋叶片中的黄酮类和酚类物质属于极性中等偏大的活性成分。正丁醇层浸膏的绿原酸含量最高可达76.09mg/g,占6种酚酸总含量的55.70%。乙酸乙酯层浸膏中除绿原酸外的其他酚酸含量均为最高。4.菊芋叶片乙醇粗提物(减压回流法)具有广泛的抑菌谱,可以用于多种植物病害的防治。尤其对半知菌亚门的番茄灰霉病菌、苹果炭疽病菌、小麦纹枯菌和鞭毛菌亚门的辣椒疫霉病菌的抑制效果较好,在供试浓度10g.L-1下,抑制率分别可达98.22%、89.77%、74.62%和87.85%。石油醚、氯仿、乙酸乙酯以及正丁醇浸膏对四种植物病原真菌均有一定的抑制效果。氯仿层对辣椒疫霉病菌的抑制效果最好,EC50值仅为0.875g.L-1；乙酸乙酯层对小麦纹枯病菌的抑制效果最好,EC50值仅为0.300g.L-1；正丁醇层对小麦纹枯病菌的抑制效果最好,EC50值仅为0.232g.L-1,对辣椒疫霉病菌的抑制效果次之,ECs0值为0.839g.L-1。菊芋叶片浸膏用于番茄灰霉病的防治,在有效浓度相同的情况下,与商品化的杀菌剂多菌灵的防效相当,且差异不显着,安全无公害。因此开发菊芋叶片作为果蔬保鲜剂,对于菊芋资源的综合利用具有重要意义。5.结合生物活性追踪试验,包括生长速率法和生物自显影法,筛选菊芋叶片中抑菌活性较好的正丁醇层中活性物质,通过柱层析(AB-8柱、聚酰胺柱、ODS柱、Toyopearl HW-40凝胶柱)和制备液相色谱分离得到10种化合物,通过HPLC-ESI-MS、1H-NMR结合化学性质和标准品对照,鉴定了6种化合物为已知酚酸类物质,分别是绿原酸、咖啡酸和4种二咖啡酰奎宁酸的同分异构体。6.咖啡酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸和1,5-二咖啡酰奎宁酸能有效的抑制小麦赤霉病菌的生长,MIC值分别可达108、60和4.2μgmL-1。总酚含量与各粗提物对辣椒疫霉病菌和小麦纹枯病菌的EC50呈现明显的负相关性,咖啡酸的含量同各粗提物对小麦纹枯病菌的EC50值呈显着负相关性,咖啡酸和1,5-二咖啡酰奎宁酸含量同各粗提物对辣椒疫霉病菌的EC50值呈现显着的负相关性,推测菊芋叶片中这些酚酸类抑菌物质可能单独、也可能协同抑制植物病原真菌。氯仿层萃取物和正丁醇层萃取物处理的辣椒疫霉病菌菌丝形态和细胞超微结构发生一些变化：菌丝凹陷,局部断裂或者出现裂纹,生长点异常；菌丝体细胞壁显着增厚,出现质壁分离,氯仿层萃取物处理还能使菌丝细胞器大量降解。通过本文的研究将菊芋叶片提取物应用于防治植物病害,不仅从废物利用的角度,大大提高了菊芋产业的经济附加值,而且开拓了植物源农药的新用途及新思路,具有十分重要的研究价值。
余俐佳[9]2012年在《十万大山25种植物抑菌除草活性筛选》文中提出本研究对采自广西十万大山的15科25种植物,分别通过刃天青微量检测法、抑菌圈法、菌丝生长速率法测定了其甲醇粗提物对茄青枯拉尔氏菌Ralstonia solaanacearum和立枯丝核菌Rhizoctonia solani的抑菌活性,以96孔琼脂板除草活性微量筛选法测定了其甲醇粗提物的除草活性；通过优化筛选条件,探索了适合于植物粗提物活性的微量筛选方法；在活性跟踪的基础上对马钱子和硫磺菊进行了活性成分分离。1、以茄青枯拉尔氏菌为靶标,通过刃天青微量检测法,对25种植物甲醇粗提物进行活性筛选,结果显示所有供试植物均对靶标菌产生-定程度的阳性反应,其中山风Blumea aromatica、千斤拔Flemingia prostrata、穿破石Maclura cochinchinensis、长茎金耳环Asarum longerhizomatosum、马钱子Strychnos nux-vomica、硫磺菊Cosmos sulphurens、地皮Illicium difengpi、白花蛇舌草Hedyotis diffusa、红花青藤Illigera rhodantha、白花月Plumbago zeylanica等10种植物甲醇粗提物的抑菌活性显着,其中山风、千斤拔、穿破石、长茎金耳环、马钱子、硫磺菊的MIC值分别为：0.50、0.75、1.00、3.00、4.00、8.00mg/ml；抑菌法测定结果同样表明：山风、千斤拔、白花蛇舌草、马钱子、山豆根、穿破石的甲醇粗提物生物活性最为显着,其中山风和千斤拔在300mg/ml浓度下,抑菌圈直径分别为1.38cm和1.33cm。以立枯丝核菌为靶标,采用菌丝生长速率法,进一步对抑制细菌活性高的10种植物进行抑制真菌活性测定,结果显示,在供试样品为3mg/ml浓度下,长茎金耳环、地枫皮、马钱子、硫磺菊对供试菌活性最显着,其EC50值分别为：0.93、0.64、1.18、1.99mg/ml。以甜菜心、狼尾草、萝卜种子为靶标,采用优化了的96孔琼脂板除草活性微量筛选法测定结果表明硫磺菊和马钱子具有显着除草活性。2、以茄青枯拉尔氏菌为靶标菌,比较刃天青微量筛选法和抑菌圈法对植物粗提物抑菌活性情况,结果显示刃天青法以低于抑菌圈法100-1000倍的药液浓度,得到了高于抑菌圈法12%的筛选率,结果表明,刃天青微量筛选法可以有效的避免活性植物的漏筛选。以植物种子为靶标植物,通过对溶剂种类及浓度、浸种时间、药品添加方式以及植物活性评价指标四个因素,对96孔琼脂板除草活性微量筛选法进行条件探索,结果表明：以2%-4%的甲醇做溶剂,浸种催芽12h,以苗高抑制率为活性测定指标,用带药琼脂法加药为植物除草活性筛选的最佳筛选条件,以96孔板为介导的微量筛选法在筛选植物除草活性时具有直观、可靠、快速、灵敏、微量、经济等优点。3、综合利用硅胶柱层析、ODS、Sephadex LH-20等分离方法,分别对马钱子和硫磺菊进行活性成分分离纯化,结果从马钱子中分得6个化合物,其中2个化合物鉴定结构为生物碱类物质伪马钱子碱和葸醌衍生物大黄素,从硫磺菊中分离出15个初步提纯物,结构待鉴定。本研究通过比较抑菌活性测定方法,探明了刃天青微量筛选法可以有效的避免植物粗提物活性的漏筛；建立了以96孔琼脂板除草活性微量筛选法对植物粗提物活性的筛选模型；并应用此模型从25种广西植物中筛选出若干对单一指示生物活性显着的植物品种,并首次报道这类植物品种在植物源抑菌、除草剂开发方面的研究潜力；此外,从马钱子和硫磺菊中共分离出21个初步提纯物,并鉴定了两个化合物的结构。研究为综合评价植物粗提物活性提供了快速微量的筛选技术。为广西十万大山植物资源更合理地开发和利用提供了参考。为新农药的创制提供了以天然产物为模型的先导化合物的参考。
杨顺义[10]2003年在《苍耳、狼毒等植物提取物抑菌活性的初步研究》文中研究指明以番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea Pers．)、辣椒丝核病菌(Rhizoctonia solani)、黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporium Schl．)、黄瓜黑星病菌(Cladosporium cucumerinum Ell．et Arthur)和番茄早疫病菌(Alternaric solani(Ellis et Martin)Jones et Grout)为供试菌种，对14种植物共17种样品粗提物的抑菌活性进行了测定，并对抑菌活性较高的瑞香狼毒和苍耳做了较为深入的研究，得出以下结论： 1．17种植物样品丙酮提取物对5种病原菌离体活性的测定表明：当质量浓度为0.1g／ml时，百部、苦参、龙葵、黄花蒿、苍耳根、苍耳茎叶、狼毒根提取物对至少一种供试菌菌丝生长的抑制率大于80％，其中，龙葵、百部、苍耳茎叶和黄花蒿对5种供试菌中至少一种的抑制率为100％；泽漆、龙葵、苦参、黄花蒿、苍耳根、苍耳茎叶和蒲公英对至少一种供试菌孢子萌发的抑制率大于90％，其中苍耳茎叶对黄瓜枯萎病菌、番茄早疫病菌和黄瓜黑星病菌孢子萌发的抑制率分别为100％、98.80％和98.15％。 2．在离体活性较高的百部、苦参、龙葵、黄花蒿、苍耳根、苍耳茎叶、狼毒根等7种植物样品对番茄灰霉病和黄瓜白粉病的活体测定中，发现供试质量浓度为0.1g／ml时，对番茄灰霉病：在黄瓜子叶上苍耳茎叶提取物的防效最好，均在40％以上，狼毒和龙葵次之；在番茄果实上苍耳茎叶、龙葵、黄花蒿和百部等4种提取物的防效均在40％以上，狼毒次之。对黄瓜白粉病的盆栽试验证明：苍耳根、百部、苦参和黄花蒿提取物的保护作用较强，第8天的防效均在68％以上，而治疗作用则以苍耳根和黄花蒿的较强，第8天的防效分别为93.55％和76.34％，值得进一步研究。 3．苍耳茎叶、苍耳根和狼毒的系统研究中，筛选出了上述植物的最适提取溶剂，苍耳茎叶为丙酮，苍耳根为甲醇，狼毒根为乙醇；通过冷浸法、振荡法和连续回流法提取物离体活性的测定，发现上述植物样品不同方法提取物的抑菌活性差异不明显。 4．苍耳茎叶、苍耳根和狼毒根的抑菌成分初步分离中，采用柱层析、薄层层析分离和GC-MS联用仪鉴定，苍耳茎叶中可能的抑菌成分主要有：6-[(1-乙酰氧基)-3-氧代丁基]-3，3a，4，7，8，8a-六氢-7-甲基-3-亚甲基-5-环庚烯并二氢呋喃、7-羟基-4-甲基-4-(2-氧代丙基)叁环[3．3．0，0(2.8)-3-辛酮等13种；苍耳根中可能的抑菌成分主要有：N-苯基-α-萘胺、二氢木香内酯、邻苯二甲酸二丁酯等21种；狼毒根主要有：N-苯基-β-萘胺、邻苯二甲酸二-(2-乙基)-己酯、邻苯二甲酸二辛酯等23种可能的抑菌成分。
参考文献：
[1]. 菊科植物杀菌活性系统筛选的初步研究[D]. 李玉平. 西北农林科技大学. 2001
[2]. 蒿属植物粗提物杀虫和抑菌活性的初步研究[D]. 韩小冰. 东北林业大学. 2008
[3]. 高原草地有毒植物对植物病原菌抑菌活性的初步研究[D]. 周丽. 四川大学. 2007
[4]. 大花金挖耳细胞培养活性物质的研究[D]. 李玉平. 西北农林科技大学. 2008
[5]. 几种菊科植物杀菌活性的初步研究[J]. 李玉平, 慕小倩, 冯俊涛, 张兴. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2002
[6]. 瑞香狼毒等植物抑菌活性初步研究[D]. 邵红军. 西北农林科技大学. 2003
[7]. 旋覆花提取物抑菌活性评价与分析[D]. 王红刚. 河北农业大学. 2008
[8]. 菊芋叶片化学成分分析及抑菌活性成分研究[D]. 谌馥佳. 南京农业大学. 2013
[9]. 十万大山25种植物抑菌除草活性筛选[D]. 余俐佳. 广西大学. 2012
[10]. 苍耳、狼毒等植物提取物抑菌活性的初步研究[D]. 杨顺义. 甘肃农业大学. 2003