天津市滨海新区塘沽街新港社区卫生服务中心皮肤科 天津 300456
摘要：目的：通过观察绞股蓝对自然衰老小鼠皮肤中SOD活力和MDA含量的影响，为论证绞股蓝抗衰老的的功效提供实验依据。方法：用绞股蓝的水煎溶液对自然衰老小鼠连续灌胃给药30天后，检测小鼠皮肤中SOD活力、MDA含量。结果：绞股蓝组小鼠皮肤中SOD活力明显高于空白对照组（P<0.01），而MDA含量则明显低于空白对照组（P<0.01）。结论：绞股蓝具有提高自然衰老小鼠皮肤组织中SOD活力、降低其MDA含量的作用。提示绞股蓝可通过增强自然衰老小鼠皮肤SOD活力、降低MDA含量，提高皮肤组织抗氧化能力，加速清除组织自由基，起到延缓皮肤老化的作用。
关键词：绞股蓝；皮肤衰老；超氧化物岐化酶（SOD）；丙二醛（MDA）]
皮肤衰老即为皮肤出现晦暗、皱纹、色素沉着等，是机体整体衰老在皮肤上的外在表现。绞股蓝是具有益气健脾、补肾温阳、养心安神、滋补强壮等功效[1]的传统中草药。现代研究表明它具有显著的抗氧化作用。本实验通过研究该中药对自然衰老小鼠皮肤中超氧化物歧化酶（SOD）活力和过氧化脂质的分解产物丙二醛（MDA）的影响，探讨该方抗皮肤老化的作用机制，为其临床扩展应用提供实验依据。
1 实验材料
1.1 实验动物
昆明种2月龄小鼠10只，雌雄各半，体重18-22g；14月龄小鼠30只，雌雄各半，体重48-55g。均由沈阳药科大学实验动物中心提供。
1.2 实验药物
1.2.1 实验组用药
市售绞股蓝（购于成大方圆药房龙江店），加水浸泡半个小时，后按照中草药煎制法煎煮半个小时，滤渣提取，使煎煮液浓度相当于0.3g生药/ml，放置4℃冰箱待用。
1.2.2 对照组用药
维生素EC片一盒（购于成大方圆药房龙江店；生产批号：20060205；生产厂家：西南药业股份有限公司）研磨成细粉，电子天平精确称取75mg细粉溶于500ml纯净水中制成混悬液放于4℃冰箱内保存备用。
1.3 实验试剂与仪器
超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒、丙二醛（MDA）试剂盒、考马斯亮兰蛋白测定试剂盒等均由南京建成生物工程研究所提供。实验用仪器由学校基础部生化实验室提供。
2 实验方法
2.1 实验动物分组
将昆明种14月龄自然衰老小鼠，适应性饲养一周后，随机分成3组，每组10只，即分为老年空白对照组、绞股蓝组、维生素EC对照组；将昆明种2月龄小鼠10定位青年对照组。
2.2 实验用药
分组后按人鼠剂量换算给药，周期一个月。
绞股蓝组：每天喂基础饲料，另给绞股蓝水煎液液20ml/kg体重灌胃；
维生素EC组：每天喂基础饲料，另给维生素EC片混悬液3mg/kg体重灌胃；
老年空白对照组：每天喂基础饲料，另给生理盐水20ml/kg体重灌胃；
青年对照组：每天喂基础饲料，另给生理盐水20ml/kg体重灌胃。
2.4 标本制备
给药疗程结束后，各组小鼠采用15%硫化钠溶液脱去所有小鼠背部肩胛区皮肤的毛，面积为1cm×2cm。依次断颈处死后立即取下背部脱毛处的全层皮肤（不包括皮下脂肪），冷冻于-20℃冰柜中保存待测。
2.5 指标检测
按试剂盒说明书用比色法测定SOD。将皮肤组织匀浆后按试剂盒说明书方法进行加样，加完后，各试管均用混匀器充分混匀，置37℃恒温水浴40min。各试管分别加入显色剂2ml，混匀，10min后在波长为550nm比色，按公式算出其SOD活力。按试剂盒说明书用TBA法测定MDA。
2.6 统计学处理
计量资料以表示，数据处理全部采用方差分析，P<0.05，差异显著。各组病死或意外死亡数均剔除，不计入统计结果之内。
3 结果
3.1 SOD活力测定结果
表1 各组小鼠皮肤中SOD活力测定结果（）
注：与老年空白对照组比较*P<0.01，与维生素EC组比较▲P>0.05。
表2显示，绞股蓝组、维生素EC组及青年对照组的小鼠皮肤组织中MDA含量明显低于老年空白对照组，差异极显著（P<0.01）；绞股蓝组和维生素EC组的小鼠皮肤中MDA含量差异不显著（P>0.05）。结果提示绞股蓝和维生素EC片均能降低自然衰老小鼠皮肤组织中MDA含量，具有保护细胞免于受损和抗氧化的作用。
4 讨论
自由基学说是目前国内外学者普遍承认的衰老理论之一，SOD是抗衰老研究中公认的参考指标之一。皮肤组织中SOD活性降低，会使自由基过度地攻击正常细胞的核酸、蛋白质、酶、透明质酸等生物大分子及线粒体膜、溶酶体膜、内质网膜等生物膜及其它亚细胞结构，从而破坏细胞和组织，造成组织损伤，并造成脂褐素的蓄积，使之产生衰老，功能丧失。另外自由基还可以使脂质发生过氧化，生成丙二醛（MDA），促使胶原的交联，从而使皮肤真皮失去弹性，产生皱纹[2，3]。
对于衰老中医有诸如肾虚、脾虚、痰瘀、血瘀等多种理论，但多数医家认为肾虚是人体衰老的基础，肾虚则五脏俱虚。绞股蓝其味甘微苦，无毒。归肺、脾、肾三经。其功用主要包括：益气健脾、补肾温阳、养心安神、滋补强壮等本文实验结果表明：绞股蓝可以明显提高自然衰老小鼠皮肤SOD活力，亦可降低MDA含量。说明绞股蓝能增强机体皮肤SOD活力，降低体内过氧化物的含量，具有清除机体皮肤内自由基和保护细胞免受损伤的作用，提示绞股蓝能延缓皮肤衰老，具有抗氧化作用，从而延缓皮肤老化。我们将进一步实验，检测相关指标如皮肤羟脯氨酸、形态学等，以提供更多依据，为绞股蓝扩大临床应用、中草药更好的服务于人民大众做出努力。
参考文献：
[1]李仪儒，李丽娜.绞股蓝的综合研究.天津药学.1998；10（3）：8-10
[2]曾昭惠等.自由基氧化致线粒体DNA损伤与细胞凋亡.国外医学 临床生物化学与检验学分册，1999，20（4）：167.
[3]刘时中.自由基与衰老.生理科学进展，1983，14（2）：147.
论文作者:任庆丽
论文发表刊物:《中国误诊学杂志》2018年第30期
论文发表时间:2018/12/3
标签：小鼠论文; 皮肤论文; 衰老论文; 绞股蓝论文; 对照组论文; 活力论文; 含量论文; 《中国误诊学杂志》2018年第30期论文;