陈亚琼, 吴曙光[1]2001年在《补肾中药醇提活性部位促成骨作用及机制》文中进行了进一步梳理补肾中药在预防和治疗骨质疏松时表现出类似于雌激素样作用,而对生殖系统的作用则不明显。这两种效应是否通过雌激素受体而起作用,一直是我们渴望探讨和解决的问题。本实验以雌激素样作用为线索,从整体、细胞、分子、基因等四个不同层面,对补肾中药醇提活性部位(AS-RKCB)进行了系统的研究。
熊志立[2]2003年在《青娥方促进成骨细胞骨形成活性成分的相关研究》文中研究表明成骨细胞是骨形成的主要功能细胞，因此刺激成骨细胞骨形成的药物将具有独特的抗骨质疏松的活性。为了开发新型有效的防治骨质疏松的药物，促进防治骨质疏松症复方中药的现代化，本研究以中医“肾主骨”理论为指导，选用了《太平惠民和剂局方》中收载的补肾壮骨经典方——青娥方作为研究对象，采用与国际标准成骨样细胞系UMR106体外共培养的方法，以促进成骨样细胞增殖和分化的作用为活性检测指标，从多个侧面考察了青娥方促成骨样细胞的活性作用：在不同浓度的乙醇提取液中，青娥方75％乙醇提取液显示出最强的促细胞增殖和分化的活性；利用系统溶剂萃取法，确立了青娥方乙醇提取物的乙酸乙酯层和水层为主要活性部位；利用撤药分析法对青娥方进行了拆方研究，考察了11个子方对成骨样细胞增殖和分化的作用，本研究首次从细胞水平验证了青娥方组方中四种单味药之间君臣佐使的配伍作用，证明了青娥方组方的科学性。 采用多种色谱分离技术，以活性测试为导向，对青娥方乙酸乙酯层、杜仲乙酸乙酯层和水层的活性部位分别进行了活性成分的追踪分离，逐步分离纯化得到了7种化合物，并运用波谱学技术并结合理化数据鉴定其中6种化合物的化学结构，它们是具有促进细胞增殖和分化作用的松脂醇二葡萄糖苷(pinoresinol diglucopyranoside)、补骨脂素(psoralen)和异补骨脂素(isopsoralen)，对细胞增殖有显着促进作用的白桦脂酸(betulic acid)和胡萝卜苷(daucosterol)，对细胞增殖有一定作用的β-谷甾醇(β-sitostero1)。上述结果表明，松脂醇二葡萄糖苷、补骨脂素和异补骨脂素是青娥方促成骨样细胞增殖和分化的主要活性成分。 对青娥方进行了提取工艺与质量控制方法的研究。采用正交试验设计法，以松脂醇二葡萄糖苷、补骨脂素和异补骨脂素含量以及浸膏重为评价指标，对提取溶剂用量、提取溶剂浓度和提取时间叁个因素进行优化，确定青娥方的醇沈阳药科大学博士学位论文扮歹提工艺最优水平为:用10倍量的75%乙醇为提取溶剂，提取3次，每次2小时;采用薄层色谱法对青娥方中杜仲和补骨脂两味药材进行了定性鉴别，斑点清晰，重现性好;采用高效液相色谱法对10批青娥方提取液中松脂醇二葡萄糖昔、补骨脂素和异补骨脂素进行定量测定:松脂醇二葡萄糖昔的平均含量为0.520mg·g一，，RsD为3 .2%;补骨脂素的平均含量为1 .1 43 mg·g一，，RsD为2.20，0;异补骨脂素的平均含量为1.o07mg.g一’，RsD为2.3%。本研究为青娥方质量控制方法提供了定性、定t分析依据。 选用双侧去卵巢所致的雌性大鼠骨质疏松模型，骨疏康颗粒为阳性药，考察了青娥方醇提物对骨质疏松模型大鼠的作用。给予青娥方醇提物后，给药组与模型组的大鼠相比，给药高剂量组大鼠的骨密度和骨强度明显增加，血清ALP活性明显降低，血清骨钙素、雌二醇水平有显着性的提高(P<0.05)，提示青娥方具有一定的雌激素样作用，可有效抑制过高的骨转换率，促进骨形成而发挥抗骨质疏松作用。 采用细胞血清药理学方法，首次利用青娥方含药血清进行体外促成骨样细胞UMR106增殖和分化作用的试验。本试验在排除空白血清对成骨样细胞增殖和分化活性的干扰后，建立了青娥方含药血清对成骨样细胞的生长曲线，证实了青娥方含药血清对成骨样细胞的增殖和分化活性同样具有显着的促进作用。同时结合青娥方在大鼠体内的抗骨质疏松药效学实验，进一步证实了青娥方具有促进骨形成的抗骨质疏松作用。 本研究在中医药学理论和实践的指导下，将天然药物化学、细胞分子生物学、分析化学和药理学等多学科技术相结合，从多侧面研究了青娥方对成骨细胞的作用，初步探讨了复方中药青娥方的配伍作用、药效物质基础和质量控制指标，优化了其提取工艺，建立了其质量控制方法，并对其进行了药效学和细胞血清药理学研究。为研制能促进骨形成，从根本上治疗骨质疏松症的中药新药奠定基础，同时也为防治骨质疏松症复方中药的现代化作了有意义的探索。
陈亚琼[3]2001年在《补肾中药醇提活性部位促成骨作用及机制》文中提出补肾中药在预防和治疗骨质疏松时表现出类似于雌激素样作用，而对生殖系统的作用则不明显。这两种效应是否通过雌激素受体而起作用，一直是我们渴望探讨和解决的问题。本实验以雌激素样作用为线索，从整体、细胞、分子、基因等四个不同层面，对补肾中药醇提活性部位（AS-RKCB）进行了系统的研究。通过对骨密度、骨生物力学、成骨细胞标志物的检测和原位杂交技术，验证了AS-RKCB在体外和体内的促进成骨作用，阐明了发挥雌激素样效应的受体作用机制，揭示了通过促进成骨细胞分化关键基因——核心编码因子（cbfal）的表达，调节其下游基因产物骨钙素分泌的关系。结果如下： 1．AS-RKCB提高卵巢摘除小鼠股骨的骨密度，增强骨的结构力学性 能，减少骨转换率，促进骨形成，有效防止了因卵巢切除诱导的 骨质疏松。 2．AS-RKCB对生殖系统有弱雌激素样活性，但增加子宫湿重和OVX小 鼠阴道上皮细胞角化率的作用仅为雌激素的十分之一；对OVX小 鼠子宫组织有保护作用。D 第一军医大学博士研究生论文D13．AS亿KCB以时间剂量依赖方式促进TE85细胞增殖和碱性磷酸酶活 ll 性，是通过雌激素受体激活途径而起作用；AS亿KCB促进TE85D 细胞分泌骨钙素的机制与雌激素受体通路无关。」14．AS亿KCB促进成骨细胞分化关键基因Cbfal的表达，调节其下游基 lD 因产物骨钙素的分泌增加。D
孟繁浩[4]2004年在《中药精选小复方骨疏丹促成骨细胞骨形成作用的研究》文中指出“骨疏丹”处方是基于传统中医学和现代医学对骨质疏松症的认识，利用“中药小复方精选系统操作技术平台”及“《普济方》数据库管理系统”精心拟定而成。骨疏丹方剂由淫羊藿、蛇床子、骨碎补和丹参四味中药组成。 本论文首先建立了君药淫羊藿中3种有效成分--淫羊藿苷、朝藿定B和朝藿定C同时定量的分析方法。采用高效液相色谱法，色谱柱为Hypersil BDS C_(18)，流动相为乙腈-醋酸水溶液(pH 3.0，25：75，ν/ν)，检测波长为260nm，流速为1.0mL·min~(-1)，内标为甲氧苄啶，测定了16个不同产地不同品种淫羊藿药材中淫羊藿苷、朝藿定B和朝藿定C的含量。结果表明：淫羊藿苷、朝藿定B和朝藿定C分别在0.21～172μg·mL~(-1)、0.18～144μg·mL~(-1)和0.16～132μg·mL~(-1)范围内，线性良好(r≥0.9996)；平均回收率分别为97.2％、98.0％和98.7％；RSD分别为2.0％、2.1％和1.9％(n=9)。不同产地不同品种淫羊藿药材中各成分的含量差别较大。其次，建立了臣药蛇床子中蛇床子素和欧前胡素2种成分同时定量的分析方法。采用高效液相色谱法，Kromasil C_8为色谱柱，甲醇-水(65：35，ν/ν)为流动相，检测波长为310nm，流速为0.8mL·min~(-1)，醋酸氟轻松为内标，测定了13个不同产地蛇床子药材中蛇床子素和欧前胡素的含量。结果表明：蛇床子素和欧前胡素分别在13～208mg·mL~(-1)和8～128mg·mL~(-1)范围内，线性良好(r≥0.9998)；平均回收率分别为98.2％和97.5％；RSD分别为1.7％和2.0％(n=9)。不同产地蛇床子药材中各成分的含量差别较大。再次，建立了臣药骨碎补中柚皮苷和新北美圣草苷2种成分同时定量的分析方法。采用高效液相色谱法，Hypersil ODS_2为色谱柱，乙腈-水(20：80，ν/ν)为流动相，检测波长为283nm，流速为1.0mL·min~(-1)，测定了7个不同产地骨碎补药材及5个易混品或伪品中柚皮苷和新北美圣草苷的含量。结果表明：柚皮苷和新北美圣草苷分别在10～400mg·mL~(-1)和12～480mg·mL~(-1)范围内，线性良好(r≥0.9997)；平均回收率分别为100.0％和99.4％；RSD分别为1.4％和2.0％(n=9)。骨碎补正品与易混品或伪品中的成沈阳药科大学博士学位论文摘要分差异很大。 成骨细胞是骨形成的主要功能细胞，因此刺激成骨细胞骨形成的药物将具有独特的抗骨质疏松的活性。本论文应用本实验室建立的成骨样细胞UMR106活性检测技术，以促进成骨细胞增殖和分化的作用为活性检测指标，利用正交试验设计法对骨疏丹方剂进行了拆方研究，考察了16个子方对成骨样细胞UMR106的作用，从细胞水平确证了骨疏丹处方中四种单味药之间君臣佐使的配伍作用，确定了骨疏丹最佳组方为淫羊蓉:蛇床子:骨碎补:丹参(2:1:1:1)。并且采用成骨样细胞UMR106体外共培养的方法，从多个侧面考察了骨疏丹方剂促成骨细胞的活性作用。结果表明骨疏丹方剂的75%乙醇提取液在试验的浓度范围内，具有显着的促细胞增殖和分化作用，当浓度为1.0x10-amg’mL一，时，增殖率为46.8%;当浓度为1 .ox 10一mg’mL一时，分化提高率为40.1%。 中药的活性成分(群)是中药防治疾病的物质基础，在骨疏丹方剂促成骨样细胞增殖和分化活性研究中，发现不同的药物具有不同的作用特点，说明成骨样细胞的增殖分化与细胞培养液中药物的成分有关。采用多种色谱分离技术，以活性测试为导向，对君药淫羊蓝的主要活性部位正丁醇层、臣药蛇床子的主要活性部位氯仿层和骨碎补的主要活性部位正丁醇层分别进行了活性成分的追踪分离，结果表明:淫羊落昔、朝蓝定B和朝菠定C等黄酮类化合物是淫羊蓝中的主要活性成分(群);蛇床子中的主要活性成分(群)是香豆素类化合物，蛇床子素、欧前胡素和香柑内醋具有显着的促进成骨样细胞增殖和分化作用;新北美圣草昔和抽皮昔是骨碎补中促成骨样细胞增殖的主要活性成分(群)。 本论文对骨疏丹方剂的提取工艺与质童控制方法进行了研究。采用正交试验设计法，以淫羊茗昔、蛇床子素、抽皮昔和丹参酮11^的含量以及浸膏重量为评价指标，对提取溶剂用量、提取溶剂浓度和提取时间叁个因素进行优化，确定了骨疏丹方剂的最优提取工艺为:12倍量75%乙醇为提取溶剂，提取3次，每次90分钟。采用薄层色谱法对骨疏丹方剂进行了定性鉴别，斑点清晰，专属性好。采用高效液相色谱法建立了骨疏丹方剂中淫羊蕃昔、蛇床子素、袖皮昔和丹参酮H^的含量测定方法，结果表明:淫羊蓝营、蛇床子素、抽皮昔和丹参酮11^分别在11.5一115林g·mL’l、38.5礴62林g·mL”、15.0一299林g·mL一1和1.90一3.80陀.mL’’范围内，线性良好(;多0.9998);平均回收率分别为99.4%、99.2%、99.1%沈阳药科大学博士学位论文摘要和97.8%;RSD分别为1 .7%、1 .6%、2.2%和2.4%(n=9)。本研究为骨疏丹方剂的质量控制提供了定性、定量分析依据。 选用双侧去卵巢所致雌性大鼠骨质疏松模型，骨疏康颗粒为阳性药，考察了骨疏丹方剂的骨质疏松作用。给予骨疏丹方剂后，与模型组的大鼠相比，高剂量给药组大鼠的骨密度和骨强度明显增加，血清ALP活性明显降低，血清骨钙素、?
王大为[5]2001年在《促进成骨细胞骨形成的中药及其活性成分的研究》文中进行了进一步梳理成骨细胞是骨形成的主要功能细胞，因此刺激成骨细胞骨形成的药物将具有独特的抗骨质疏松的活性。为了筛选和开发新型、高效的防治骨质疏松的药物，本研究首次建立了成骨样UMR106细胞体外培养为抗骨质疏松药物的活性筛选模型。以成骨样细胞的增殖和分化为活性检测指标，成骨样细胞的增殖以MTT法测定，氟化钠为阳性对照药。成骨样细胞的分化采用测定细胞内碱性磷酸酶活性的方法，地塞米松为阳性对照药，同时考察了溶剂乙醇和二甲基亚砜对细胞增殖和分化的影响。 依据传统中医“肾主骨”的理论，选择补肾中药为主要研究对象，考察它们对成骨样细胞骨形成的活性。将中药和一些未作药用的植物的提取物与成骨样细胞体外共同培养，在所研究的15种补肾中药中对成骨样细胞增殖有促进作用的有9种，在所研究的15种其它中药中对成骨样细胞增殖有促进作用的有4种，而对53种还未作药用的植物的活性测试发现只有2种有显着活性；12种中药中有6种能促进成骨样细胞分化。其中有4种补肾中药既能促进成骨样细胞增殖，又能促进成骨样细胞分化，它们是：补骨脂、槲寄生、淫羊藿、川牛膝。 对补骨脂不同极性萃取物进一步进行成骨样细胞增殖和分化活性测试，发现补骨脂乙酸乙酯萃取物为补骨脂中的主要活性部分。又选用雌性大鼠双侧去卵巢所致的骨质疏松模型，依替膦酸二钠盐为阳性药，考察补骨脂乙酸乙酯萃取物对骨质疏松模型大鼠的作用。结果表明，给予补骨脂乙酸乙酯萃取物的大鼠与模型组大鼠相比，骨密度、骨钙含量显着增加。 为了追踪分离补骨脂乙酸乙酯萃取物中的活性成分，本实验采用多种色谱分离技术，以活性测试为导向，结合波谱技术及理化数据，从补骨脂乙酸乙酯萃取物中分离并鉴定了4个活性化合物的化学结构，它们是具有促进细胞增殖和分化作用的补骨脂异黄酮（corylin）和补骨脂二氢黄酮（bavachin），对细胞分化有一定促进作用的异补骨脂素（isopsoralen）和补骨脂素（psoralen）。 由于补骨脂中黄酮类化合物的分析测定未见报道，因此，本研究首次建立了同时测定补骨脂中补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮的HI，LC分析方法。色谱靴为：ODS柱，流动相：甲醇20 nnnoM醋酸铰缓冲液，pH4刀的733，州；流速：0．SInljlnin；检测波长：240nln。本实验采用普通回流6小时后用乙酸乙酪苹取叁次的样品制备方法，以补骨脂二氢黄酮和补骨脂异黄酮计RSD分别为3＊％和3．6％，回收率分别为94．9％和96．2％。并对8个不同产地的补骨脂药材中补骨脂二氢黄酮和补骨脂异黄酮进行了含量测定。 此外，本研究考察了一些黄酮类化合物对成骨样细胞的作用。结果发现：中药淫羊蕾中的主要成分淫羊蕾昔及其大鼠体内主要代谢物淫羊霍次苦H具有类似的作用，可显着促进成骨样细胞的增殖：中药懈寄生总黄酮对成骨样细胞的增殖有一定的促进作用，并可显着提高细胞内ALP活性；大豆昔元及其衍生物对U’MR106细胞的增殖作用不明显。对于中药补骨脂中分离的两个促成骨样细胞增殖的活性成分补骨脂H氢黄酮和补骨脂异黄酮，采用 Western blotting的方法考察不同时间对 U’MR106细胞周期蛋白 CyClin E的表达，结果它们对 CyClinE的表达没有显着影响。 本实验所建立的细胞培养方法具有快速、所需样品量少和作用直接的优点，尤其适用于中药中微量成分的药效及活性成分的追踪研究，而且动物体内实验结果证实了本方法的可靠性，为从天然药物中寻找和开发新型有效的防治骨质疏松的药物提供了一种便捷的手段。大量中药及植物促进成骨样细胞骨形成活性筛选结果表明，补肾中药的“壮骨”作用可能与其对成骨细胞活性的促进作用有关，中药补骨脂中的黄酮成分可能具有防治骨质疏松的活性。
潘亚磊[6]2014年在《杜仲有效组分预防废用性骨质疏松作用及机制研究》文中提出目的杜仲作为我国名贵滋补药材，具有补肝肾、强筋骨等功效，在传统中医及现代医学中被广泛应用以治疗骨相关疾病。本课题在前期实验基础上，对杜仲促成骨有效组分进行筛选找出活性部位，并在动物水平对其预防废用性骨质疏松作用进行研究，进一步在分子水平揭示其防治骨质疏松的作用机制。方法以杜仲提取物中总木脂素含量为考察指标，采用Plackett-Burman二水平实验从提取溶剂种类、浓度、提取时间、温度、次数、杜仲皮粉碎程度及料液比七个因素中筛选影响总木脂素含量的主要因素，进一步采用响应面法对提取工艺进行优化以提高杜仲提取物中总木脂素的含量。采用尾悬吊法建立大鼠废用性骨质疏松模型，以阿仑膦酸钠为阳性对照药物，研究杜仲提取物及其有效组分对废用性骨质疏松的预防作用。大鼠灌胃给药两周后实施尾悬吊，尾悬吊时间为四周并在尾悬吊过程中持续每天灌胃给药。实验结束后，观察大鼠主要脏器有无病变并计算脏器指数；采用全自动生化仪及ELISA法对大鼠血清和尿液中钙、磷水平以及骨代谢相关指标进行测定；采用双能X射线骨密度仪测定骨密度；采用叁点弯曲实验对大鼠股骨生物力学性能进行分析；采用microCT分析大鼠股骨干骺端的骨小梁微结构特性。培养类成骨细胞株MC3T3-E1和大鼠原代成骨细胞，采用MTT法、碱性磷酸酶活性测定和矿化结节茜素红染色等方法，筛选杜仲促进成骨细胞增殖、分化及矿化的有效组分。采用HPLC法测定有效组分中主要化合物含量。采用实时定量PCR和Western blot法研究杜仲40组分、松脂醇二葡萄糖苷、桃叶珊瑚苷和京尼平苷对骨代谢相关信号通路的mRNA及蛋白表达量的影响。结果Plackett-Burman二水平实验结果显示影响提取杜仲总木脂素的叁个主要因素为乙醇浓度，提取时间和提取温度。对这叁个因素进行响应面实验设计及分析，得到最优提取工艺为：将杜仲皮粉碎至40目，以液料比为10:1的体积加入62%乙醇，在72°C下提取111min，提取次数为2次。此时，杜仲提取物中总木脂素含量为1.86±0.012%，杜仲提取物得率为12.35±0.26%。大鼠尾悬吊4周后体重下降，但脏器指数无显着差异，杜仲提取物和杜仲40组分治疗对尾悬吊引起的体重下降和脏器指数都无显着影响。尾悬吊大鼠血清中抗酒石酸酸性磷酸酶及尿中的脱氧吡啶啉、Ⅰ型胶原C-末端交联肽和Ⅰ型胶原N-末端交联肽含量均明显升高，同时尿中的钙、磷含量也增加，提示骨吸收增强。骨形成指标碱性磷酸酶和骨钙素在尾悬吊后则下降。杜仲提取物与杜仲40组分显着抑制骨吸收指标的上升，并增加骨形成指标，而阿仑膦酸钠治疗仅可抑制骨吸收指标上升。与尾悬吊相比，杜仲提取物与杜仲40组分显着抑制尾悬吊造成的骨密度下降，保护股骨骨小梁的微结构，改善大鼠的股骨生物力学性能。杜仲提取物经有机溶剂分段萃取后得到石油醚组分、二氯甲烷组分、乙酸乙酯组分和水相组分，其中水相部位对MC3T3-E1和原代成骨细胞的增殖、分化和矿化的能力最强。进一步用大孔树脂分离水相组分后得到，20组分、40组分、60组分和80组分，其中40组分可以显着促进MC3T3-E1和原代成骨细胞的增殖，分化和矿化。HPLC结果显示杜仲40组分中松脂醇二葡萄糖苷、桃叶珊瑚苷和京尼平苷含量分别为28.63±1.46%、17.24±0.89%和14.87±0.94%，叁种单体化合物可不同程度显着促进类成骨细胞株MC3T3-E1和原代成骨细胞的增殖，分化和矿化。成骨细胞培养过程中加入杜仲40组分、松脂醇二葡萄糖苷、桃叶珊瑚苷和京尼平苷24h可以显着提高BMP-2信号通路中BMP-2、p38、P-p38、ERK、P-ERK和Runx-2蛋白的表达。同时，杜仲40组分和松脂醇二葡萄糖苷还可提高OPG/RANKL/RANK信号通路OPG的表达、降低RANKL表达。结论杜仲总提取物及其有效组分即杜仲40组分对大鼠尾悬吊所致骨质疏松具有明显的预防作用，能明显抑制尾悬吊引起的骨质减少，保护股骨骨小梁的微结构，改善大鼠的股骨生物力学性能。杜仲40组分是杜仲促成骨作用的有效组分，其中有效成分为松脂醇二葡萄糖苷、桃叶珊瑚苷和京尼平苷等化合物。BMP-2和OPG/RANKL/RANK信号通路可能是杜仲有效组分发挥其促进成骨作用的主要作用途径。
侯秋科[7]2016年在《龟板有效成分促间充质干细胞成骨分化的miRNA-VDR网络机制》文中指出研究目的：骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells, BMSCs)是目前研究最多、应用潜力最大的干细胞之一,是研究增殖与分化机理的理想模型。但是,骨髓中BMSCs含量极少,长期增殖活性弱,扩增速度慢,逐渐向脂肪老化,无法满足大量的临床需求。众多的体外转染和体内移植研究表明,移植的BMSCs增殖活力不够,存活量较少,严重限制了BMSCs的应用研究。而且BMSCs成骨活性弱,骨化过程较慢,因此,如何提高BMSCs的成骨潜能是近年来研究的热点。补肾中药提取物龟板及其有效成分可以诱导干细胞向成骨分化。近几年来本课题组着重探讨了补肾龟板对各类干细胞的定向分化作用。积累了丰富的前期研究工作基础。前期研究发现龟板提取物促进BMSCs向成骨分化可能与其内的小分子脂肪酸类、脂肪酸酯类、甾体直接进入细胞膜作用内部核受体有关。龟板提取物可上调BMSCs定向成骨分化过程中维生素D受体(vitamin D responsive, VDR)的表达,这在一定的程度上揭示龟板促进BMSCs定向成骨分化的可能机制。因此,本研究在前期工作的基础上深入研究探索龟板及其有效成分靶向VDR对骨髓间充质干细胞成骨分化作用的分子机制研究。研究方法：1.通过lncRNA芯片技术分析龟板有效成分差异性表达情况,运用生物信息学方法,预测分析差异性表达的lncRNA共表达基因,预测分析其共表达的靶基因,运用生物学功能聚类分析的方法了解其参与成骨分化的相关情况,通过trans和cis预测分析差异性lncRNA参与基因的调控机制,构建TF-lncRNA-靶基因叁者的网络关系。2.构建了维生素D受体反应元件(vitamin D responsive element, VDRE)驱动的荧光素酶(Luc)报告基因系统,确定了VDR这一核受体靶基因对龟板促成骨分化活性成分反应元件,寻找出促BMSCs成骨分化的最佳龟板提取物(PTE)组分。3.转染维生素D受体(VDR)与其功能区截断体到骨髓间充质干细胞(BMSCs)中,观察何种核受体功能区在龟板有效成分促成骨分化中起作用。4.以龟板及其有效成分干预BMSCs,正常BMSCs作为对照组,通过miRNA基因芯片筛查及qRT-PCR进行验证,发现成骨分化方面有关的miRNA信息。5.结合前面miRNA基因芯片和qRT-PCR信息,筛选出miRNA-351,其靶基因为VDR mRNA,特引入rno-miR-351 mimic与预测靶基因VDR 3'UTR双荧光素酶检测,以验证miRNA是否抑制候选靶基因翻译水平。研究结果：1.通过lncRNA基因芯片的分析结果发现了龟板有效成分差异性表达的lncRNA和mRNA。2. pathway和GO聚类分析确定了分子之间的生物学功能,并进一步分析了龟板有效成分差异性表达的lncRNA与TF及cis调控的关系。3.通过trans分析,构建了lncRNA-mRNA-转录因子叁元共调控网络。4.时效表达初步结论：各组分均有不同程度的促进作用。不同剂量的结构类似物在药物作用最佳时间点,有不同程度的促进作用,30 μ g/mL对VDRE的表达效率最高。5.4甾酮(S9)是作用于VDR的配体结合结构域(pCMV-Myc-VDR-C)而促进BMSCs成骨分化的。6.经过基因芯片检测数据进行分析,我们发现经过龟板总提取物(2B)、S9干预后,miRNA-330-3p、miRNA-200a-5p、miRNA-296-3p表达上调,同时miRNA-615. miRNA-351-3p、miRNA-129-1-3p、miRNA-466b-2-3p、miRNA-466b-1-3p表达下调。7.筛选出的miRNA-351模拟物可有效抑制VDR的表达,而在转染miRNA-351抑制剂组则可促进VDR蛋白的表达,miRNA-351与VDR有相应的结合位点,能在其翻译水平有效抑制VDR的表达。研究结论：祖国传统中药龟板及其有效成分可靶向VDR促进BMSCs成骨分化,其机制之一是通过抑制miRNA-351表达,增强VDR翻译水平,初步发现在调控成骨分化的过程中所形成的“中药小分子物质-miRNA-mRNA-lncRNA"的多元调控网络。
李东胜[8]2011年在《六味地黄胶囊治疗绝经后骨质疏松症的疗效研究》文中指出目的通过文献综合分析,本研究采用补益肝肾为治疗绝经后骨质疏松症之肝肾阴虚型的治疗法则,选用传统阴阳双补经典方-六味地黄胶囊,对绝经后骨质疏松症进行临床研究,以证实六味地黄胶囊治疗绝经后骨质疏松症的合理性、有效性与可行性。方法随机分组病例共100例,均为本院就诊的绝经后妇女,绝经5年以上,年龄为55-70岁,治疗研究组(六味地黄胶囊组)70例,阳性对照组(强骨胶囊组)30例,所选病人在治疗前半年内均未使用治疗骨质疏松症及影响骨代谢的药物。主要观察项目：双能X线骨密度测量仪测定腰椎2-4正位及左股骨上端骨密度(BMD)及腰背四肢疼痛变化,从而了解六味地黄胶囊的治疗效果,与阳性对照组进行对比分析,并于治疗前及治疗后6个月检测：①.生殖轴功能指标：E2、FSH、LH；②.骨形成指标：ALP、BGP;③.骨吸收指标：FTH、CT;④.骨代谢相关细胞因子：IL-6、TNF-a、IGF-I,比较治疗前后差异性。结果六味地黄胶囊治疗组显效率和总有效率分别为11.43%和80.00%,强骨胶囊对照组显效率和总有效率分别为13.33%和76.67%,说明：在PMOP临床综合疗效方面：六味地黄胶囊与强骨胶囊有相近的临床疗效,但前者在缓解临床主症(疼痛),改善腰椎BMD方面,优于后者。治疗前后检测结果示：除PTH外,其它指标两组自身前后比较都有显着差异(P<0.05-0.01)；两组间比较：FSH、LH、ALP、FTH、CT、IL-6、TNF-a指标无明显差异；E2、BGP、IGF-I指标有明显差异(P<0.05),这说明六味地黄胶囊同强骨胶囊,都具有促进骨形成,降低骨吸收的双重调节功能,但六味地黄胶囊在促进骨形成方面,明显优于强骨胶囊,这可能与其：为复方,补肾药多,含植物雌激素多,其雌激素作用和活性较强,提高体内性激素水平(E2水平升高)更突出,干预人体内稳态系统更强有关。结论本临床研究结果证明：六味地黄胶囊与强骨胶囊均能明显改善骨密度,降低骨转化率,减轻PMOP引起的骨性疼痛；六味地黄胶囊与强骨胶囊虽都具有促进骨形成,降低骨吸收的双重调节功能,但前者更善于“促进骨形成”,后者更专注于“降低骨吸收”,在这个层面上,从中医理论上讲：六味地黄胶囊重在“扶正”,强骨胶囊重在“祛邪”,“正盛邪自祛,邪去正自安”,为两者治疗PMOP提供了在中医治疗研究依据；另一方面,六味地黄胶囊为补肾复方,比单味强骨胶囊的补肾作用更强,对防治PMOP具有一定临床意义。
肖亚平, 曾杰, 焦琳娜, 徐晓玉[9]2018年在《补肾中药对骨质疏松症的治疗及其信号通路调节作用的研究进展》文中研究说明有关补肾中药对于骨质疏松症的治疗及其信号通路调节作用的研究较多,但缺乏系统性的归纳总结。该文综合整理和分析了近10年来淫羊藿、骨碎补、蛇床子、杜仲、补骨脂、续断等经典补肾中药对骨质疏松症的治疗作用及其信号通路的调节作用。根据现有研究结果得出如下结论:(1)补肾中药主要通过BMP-Smads、Wnt/β-catenin、MAPK、PI3K/AKT等信号通路,促进成骨细胞的骨形成作用;通过OPG/RANKL/RANK、雌激素、CTSK等信号通路抑制破骨细胞的骨吸收作用,达到治疗骨质疏松症的目的。淫羊藿、骨碎补、蛇床子、补骨脂可通过上调BMP-Smads、Wnt/β-catenin信号通路中BMP-2、Smad1/5/8、Wnt3a及β-catenin等关键蛋白及基因的表达,促进成骨细胞的骨形成;淫羊藿、骨碎补、蛇床子、杜仲、补骨脂、续断通过介导OPG/RANKL/RANK信号通路,上调OPG和OPG/RANKL的表达,抑制破骨细胞的骨吸收。(2)补肾中药能通过多种途径防治骨质疏松症:淫羊藿中的淫羊藿苷、骨碎补中的柚皮苷、蛇床子中的蛇床子素、补骨脂中的补骨脂素既可以通过调控BMP-Smads、Wnt/β-catenin等信号通路促进骨形成,又可以活化OPG/RANKL/RANK、CTSK等信号通路抑制骨吸收。(3)补肾中药对防治骨质疏松症的信号通路的相互联系(crosstalk)和整体动物实验的研究有待进一步深入,有待阐明其多靶点和多途径的作用机制与综合调控作用。
刘曼[10]2007年在《骨疏丹促成骨细胞活性的物质基础相关研究》文中研究指明骨疏丹处方是基于传统中医学和现代医学对骨质疏松症的认识，利用“中药小复方精选系统操作技术平台”及“《普济方》数据库管理系统”精心拟定而成。骨疏丹方剂由淫羊藿、蛇床子、骨碎补和丹参四味中药组成。本室的前期研究证明了该方的促成骨细胞骨形成作用，并发现了它的活性部位和一些活性成分，对其中几种活性成分进行了定量测定和药动学研究。本文建立了骨疏丹方剂的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱，色谱柱为Diamonsil~(TM)C_(18)，流动相为乙腈-20 mmoL·L~(-1)NaH_2PO_4溶液，采用梯度洗脱，检测波长为270 nm，柱温为25℃，流速为1.0 mL·min~(-1)。对用撤药法对骨疏丹方剂拆方所得处方进行HPLC色谱指纹图谱分析，将各处方的指纹峰峰面积与促成骨样细胞增殖活性数据进行相关分析，结果表明：从指纹图谱中得到了18个主要色谱峰，其中9个色谱峰与活性相关，它们所代表的化学成分是骨疏丹方剂促成骨样细胞增殖活性的物质基础。将各处方的组成与促成骨样细胞增殖活性数据进行相关分析，结果方中各味药的配伍关系与中医组方原则一致。采用HPLC法和超高效液相色谱质谱联用(UPLC-MS)进行骨疏丹方剂的血清药物化学研究，分析大鼠口服骨疏丹和君药淫羊藿提取物后含药血清中的化学成分。HPLC分析条件与骨疏丹指纹图谱相同。UPLC-MS分析条件如下：色谱柱为ACQUITY UPLC~(TM) BEH C_(18)，流动相为乙腈-0.1％醋酸水溶液，梯度洗脱，流速为0.25 mL·min~(-1)，柱温为40℃；质谱条件采用ESI源，正离子检测方式，扫描方式为全离子扫描，扫描范围110—1000 amu。结果从大鼠口服骨疏丹方剂后的含药血清中检测出方剂中的4个成分和2个代谢物，其中方剂中的成分有朝藿定B、淫羊藿苷和蛇床子素。这些成分及代谢产物可能是骨疏丹在体内发挥作用的物质。建立了测定骨疏丹方剂总黄酮和总香豆素的分光光度法。总黄酮测定采用叁氯化铝络合分光光度法，以淫羊藿苷为对照，检测波长414nm；总香豆素测定采用紫外分光光度法，以蛇床子素为对照，检测波长320hm。线性范围分别为10-40μg·mL~(-1)及2-12μg·mL~(-1)。平均回收率分别为98.3％，RSD为1.1％和99.5％，RSD为1.9％。测得含量分别为2.32％和2.05％。方法简便，准确，可作为骨疏丹方剂质量控制的手段之一。建立了同时测定大鼠血浆中淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅱ和蛇床子素的液相色谱-串联质谱法(LC-MS／MS)，以卡马西平为内标，血浆样品处理采用沉淀蛋白法，质谱条件采用ESI源，正离子检测方式，多反应监测(MRM)。淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅱ和蛇床子素分别在2.0-200.0ng·mL~(-1)，2.0-200.0 ng·mL~(-1)和2.0-500.0 ng·mL~(-1)范围内线性关系良好。日内和日间精密度均不大于14.1％，准确度在-6.0～9.0％之内。淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅱ和蛇床子素的回收率均大于80％。研究了大鼠口服骨疏丹后淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅱ和蛇床子素的药物动力学。淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ的C_(max)分别为101.82 ng·mL~(-1)和46.28 ng·mL~(-1)，T_(max)分别为0.16 h和0.24 h，t_(1／2)均为0.28 h，AUC_(0～∞)分别为23.20 ng·mL~(-1)·h和16.32 ng·mL~(-1)·h。均表现为吸收快，消除快。蛇床子素的C_(max)为671.73 ng·mL~(-1)，T_(max)为0.70 h，t_(1／2)为4.83 h，AUC_(0～∞)为1813 ng·mL~(-1)·h，表现为吸收快，而消除较慢，有双峰现象。本研究在中医药学理论的指导下，将中药学、分析化学、药物动力学和计算机技术相结合，对骨疏丹的促成骨样细胞活性的物质基础进行了研究，为骨疏丹方剂的研究开发做了有意义的探索。
参考文献：
[1]. 补肾中药醇提活性部位促成骨作用及机制[C]. 陈亚琼, 吴曙光. 第一届国际骨矿研究学术会议摘要文集. 2001
[2]. 青娥方促进成骨细胞骨形成活性成分的相关研究[D]. 熊志立. 沈阳药科大学. 2003
[3]. 补肾中药醇提活性部位促成骨作用及机制[D]. 陈亚琼. 第一军医大学. 2001
[4]. 中药精选小复方骨疏丹促成骨细胞骨形成作用的研究[D]. 孟繁浩. 沈阳药科大学. 2004
[5]. 促进成骨细胞骨形成的中药及其活性成分的研究[D]. 王大为. 沈阳药科大学. 2001
[6]. 杜仲有效组分预防废用性骨质疏松作用及机制研究[D]. 潘亚磊. 西北工业大学. 2014
[7]. 龟板有效成分促间充质干细胞成骨分化的miRNA-VDR网络机制[D]. 侯秋科. 广州中医药大学. 2016
[8]. 六味地黄胶囊治疗绝经后骨质疏松症的疗效研究[D]. 李东胜. 广州中医药大学. 2011
[9]. 补肾中药对骨质疏松症的治疗及其信号通路调节作用的研究进展[J]. 肖亚平, 曾杰, 焦琳娜, 徐晓玉. 中国中药杂志. 2018
[10]. 骨疏丹促成骨细胞活性的物质基础相关研究[D]. 刘曼. 沈阳药科大学. 2007
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