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摘要：目的 通过高效液相色谱法测定芪胶升白胶囊中阿魏酸的含量的探讨。方法 通过色谱柱、流动相、流速、紫外检测器等方式，来进行芪胶升白胶囊中阿魏酸的含量的测定。结果 通过测定得出芪胶升白胶囊中阿魏酸的含量保持在0．2239～1．1195μg的范围内，并且呈现成线性关系，平均回收率达到了98．84%。结论 此种测定方法具有简便、准确的优势，可作为芪胶升白胶囊质量控制的方法。
关键词：高效液相色谱法；芪胶升白胶囊；阿魏酸的含量测定
一、实验材料
1、仪器
Agilent1100高效液相色谱仪工作站（美国安杰仑公司），配置G1322A真空在线脱气机，G1312A四元梯度泵，G1329A自动进样仪，G1316A柱温箱，G1315A二极管阵列检测器。
2、试药
阿魏酸对照品（中国食品药品检定院，批号：110773-201012），其纯度用高效液相色谱峰的面积归一化法计算大于98．0%；甲醇、乙腈（色谱纯，国药集团）；其余试剂为分析纯；芪胶升白胶囊（贵阳德昌祥药业有限公司，批号：20110799，20120901，20121201），纯净水由Millipore净水器（美国）产生。
二、方法与结果
1、色谱条件
色谱柱：岛津C18柱（5020-39001）；流动相：乙腈－（体积分数）0．085%磷酸溶液（17∶83）；流速：1.0mL?min－1；紫外检测波长：316nm；柱温：35℃；进样量：10μL；在此条件下阿魏酸峰的理论塔板数为8087。
2、流动相的选择
通过查阅相关文献，对不同的流动相系统甲醇－（浓度）0．05mol?L－1磷酸二氢钾，乙腈-水，乙腈－（体积分数）0．1%磷酸，乙腈－（体积分数）0．1%冰乙酸，甲醇－（体积分数）0．05%磷酸溶液，乙腈－（体积分数）0．085%磷酸溶液等进行比较，结果发现当用甲醇－（浓度）0．05mol?L－1磷酸二氢钾，乙腈-水为流动相时，分离程度较差；当乙腈－（体积分数）0．1%冰乙酸溶液为流动相时，在316nm波长下对基线干扰较大；而甲醇－（体积分数）0．05%磷酸溶液为流动相分析时间太长，因此，选择乙腈－（体积分数）0．085%磷酸溶液作为流动相；对流动相比例经过不断改进摸索条件，确定乙腈－（体积分数）0．085%磷酸溶液（17∶83）为最佳流动相。
3、标准曲线的制备
精密称取阿魏酸对照品适量，加（体积分数）70%甲醇适应溶解并定量稀释成含阿魏酸111．95mg?L－1的贮备液。分别精密量取贮备液2mL，4mL，6mL，8mL用（体积分数）70%甲醇定量稀释至10mL，制成对照品，按2．1项下色谱条件进样分析，测定峰面积值（A），并以A对进样浓度（C）进行回归，绘制标准曲线。线性关系考察见表1。回归方程：A=63．199C－561．19，r=0．9987，线性范围：0．2239～1．1195μg。
4、供试品溶液的制备
称取本品内容物6．2448g，置具密封盖的棕色瓶中锥形瓶中，精密加入体积分数70%甲醇20mL，密闭，称定质量；加热回流30min，静置冷却，再称质量，用体积分数70%甲醇补减失的质量，摇匀，静置，取上清液经0．2μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。重复1次，制备1份平行供试液。
5、稳定性实验
以对照品溶液连续进样重复测定的结果评价本品溶液的稳定性。取对照品溶液，分别于0h，4h，8h，12h按2．1项下色谱条件测定，阿魏酸峰面积基本不变，ＲSD为0．33%，表明本品溶液在12h内基本稳定。
6、精密度实验
以对照品溶液连续进样重复测定的结果评价仪器的精密度。取对照品溶液，按色谱条件连续测定5次，结果阿魏酸峰面积的ＲSD为0．2%，表明仪器精密度良好。见表2。
7、重复性实验
以样品供试液连续进样重复测定的结果评价高效液相色谱法的重复性。按照拟订的含量测定方法，取同批号样品5份，分别制备样品供试液，按2．1项下色谱条件测定5次，结果阿魏酸峰面积的ＲSD为0．1%，表明本方法重复性良好。见表3。
8、回收率实验
取5份已知含量的样品，分别加入对照品贮备液1mL，按2．3项下方法操作，按2．1项下色谱条件测定，结果见表4。
9、空白实验
按处方比例称取除了当归以外的其他药材，按制备工艺制成供试液，参照样品测定法测定，在主成分出峰处无干扰。
10、样品测定
对同一厂家不同批号样品的含量测定结果见表5。
三、讨论
笔者在制备供试品溶液时，参考了《中华人民共和国药典》2010年版一部中当归的药材处理方法。考虑到阿魏酸不太稳定，供试品制备及对照品配制均采用棕色容量瓶。不同提取方法的选择：由于芪胶升白胶囊为一种中药复方制剂，成分复杂。笔者还曾对含量测定中供试品溶液制备方法进行了比较，比较了超声提取和回流提取。结果表明，超声30min，处理样品，结果所测含量与本实验回流提取结果相比，超声提取有效成分含量较低。故选择较简便的回流方法作为供试品溶液的制备方法。
采用高效液相色谱法含量测定选择检测波长时，为取得满意的结果，选用阿魏酸的检测波长为316nm，选用该波长测定，其他组分及辅料无干扰，使其能达到最大吸收。文献报道的高效液相色谱法测定阿魏酸的方法较多，多用甲醇：甲酸（95∶5）、体积分数50%甲醇、体积分数50%乙醇等作溶剂，但在实际测定过程中，采用上述溶剂，阿魏酸对照品含量迅速降低，即使在避光及冰箱（4℃）保存的条件下，也只能保持1～3h的稳定性，难以获得准确的测定结果，采用少量甲醇：甲酸（95∶5）将阿魏酸溶解后，用甲酸：水（5∶95）作溶剂，可抑制阿魏酸分解，在避光及冰箱（4℃）保存的条件下，可保持48h以上稳定，但仍应避免强光照射及过高温度。由于阿魏酸在醇溶液中见光、遇热不稳定，长时间放置出现2个色谱峰，供试品配制后须及时测定。实验过程中尝试用乙腈-甲醇－（体积分数）0．1%磷酸（44∶46∶33），乙腈-水-冰醋酸（60∶40∶1），甲醇－（体积分数）0．2%磷酸（80∶20）为流动相，经比较选用乙腈－（体积分数）0.085%磷酸溶液（17∶83），比例最佳，峰形及柱效较好。高效液相色谱法测定阿魏酸的含量，是一个新型的技术。采用该方法时，需要注意的问题很多，主要包括色谱柱的选择，色谱条件的确定，标准曲线的制作，标样的制备等，多个因素综合影响实验的结果。在本实验中，采用HPLC法测定芪胶升白胶囊中阿魏酸含量，方法简便、准确、重现性好，可以作为芪胶升白胶囊质量控制的方法。
四、结论
阿魏酸是一种具有多功能的药用物质。对于阿魏酸的研究测定，具有深远意义。提取和测定阿魏酸有多种方法。随着科技的进步，医学事业的不断发展，高效液相色谱法逐渐的被应用到中药含量测定中，对医学的提高和进步具有很大的推动作用。本文采用高效液相色谱法对芪胶升白胶囊中阿魏酸的含量进行测定，方法简便、准确、重现性好，可以作为芪胶升白胶囊质量控制的方法，同时也可应用到其他组成的测定，为临床安全有效用药提供保障。
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论文作者:窦一凡,刘会香
论文发表刊物:《健康世界》2015年5期供稿
论文发表时间:2015/10/23
标签：色谱论文; 溶液论文; 阿魏酸论文; 高效论文; 甲醇论文; 体积论文; 含量论文; 《健康世界》2015年5期供稿论文;