陈乃江 李玲 杨颖
（江苏省连云港市药品检验所 222006）
【摘要】 目的：建立HPLC法测定甲茸壮骨通痹胶囊中四种成分的含量。方法：采用Phenomenex C18色谱柱，以乙腈-0.1%磷酸溶液（40:60）（用三乙胺调节pH 至3.1）为流动相，柱温为室温，流速为1.0mL•min-1，检测波长254nm。结果：吡罗昔康、萘普生、双氯芬酸钠、吲哚美辛在0.5～25µg范围内与其相应峰面积均呈良好线性关系，回收率满足要求。结论:方法简便,结果准确,可作为本品认定和活性成分测定控制方法。
【关键词】 HPLC；吡罗昔康；萘普生；双氯芬酸钠；吲哚美辛
【中图分类号】R97 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）32-0097-02
本文通过高效液相色谱-二极管阵列检测器（HPLC-DAD）， 对于未知的多组分比较光谱相关性对样品色谱峰进行归属，判定其含有吡罗昔康；萘普生、双氯芬酸钠和吲哚美辛成分，并对其定量分析。
1.仪器与试药
Waters-2695型液相色谱仪，2996型紫外检测器，Empower色谱工作站；色谱柱：Phenomenex C18 柱Gemini（250×4.6mm，5um）；吡罗昔康对照品（中国药品生物制品检验所，批号：100177-200603，含量99.8%）；萘普生对照品（中国药品生物制品检验所，批号：100198-201205含量99.9%）；双氯芬酸钠（中国药品生物制品检验所，批号：100334-200302）；吲哚美辛（中国药品生物制品检验所，批号：1100258-200904）；乙腈为色谱纯，磷酸为优级纯，水为纯化水，样品为连云港市食品药品监督管理局抽检样品。
2.方法与结果
2.1 色谱条件
流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（40:60）（用三乙胺调节pH 至3.1）为流动相；流速：1.0mL•min-1，检测波长：254nm；柱温：室温；进样体积：10µL；在该色谱条件下理论板数均不低于2000，其出峰顺序依次为:吡罗昔康、萘普生、双氯芬酸钠、吲哚美辛。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取吡罗昔康对照品25.20mg，萘普生对照品25.30mg，双氯芬酸钠对照品25.12mg，吲哚美辛24.80mg对照品，加流动相50mL，振摇超声10分钟使溶解，放冷并用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
精密量取对照品储备液5mL置25mL量瓶中，用流动相稀释到刻度，作为对照品溶液。
2.3 样品溶液的制备
取本品内容物约两粒量，精密称定，置200mL容量瓶中，加流动相100mL摇匀，超声10分钟，放冷并用流动相稀释至刻度，用0.45µm滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2.4 标准曲线的制备
取对照品溶液分别进样5µL、10µL、15µL、20µL、25µL，测定波长:254nm，以吸收面积（Y）对进样质量(X)进行线性回归。结果表明吡罗昔康、萘普生、双氯芬酸钠、吲哚美辛有良好的线性关系（见表1）。
2.5 紫外光谱比较
通过PDA分别截取对照和样品溶液中吡罗昔康、萘普生、双氯芬酸钠、吲哚美辛四种成分的紫外光谱，很大程度上完全吻合一致，很大程度上也反映了两者是同一种物质。
2.6 重复性试验
精密称取该批号样品5份，按照样品测定的方法操作，测得吡罗昔康、萘普生、双氯芬酸钠、吲哚美辛含量，结果表明RSD为分别为1.9%，1.7%，2.3%，1.2%。
2.7 加样回收试验
精密称取已知含量的样品约二粒量，置200ml容量瓶中，加流动相50mL摇匀，超声10分钟，放冷并用流动相稀释至刻度，用0.45µm滤膜滤过，分别精密移取续滤液10mL置6个25mL的量瓶中，精密加入对照品储备溶液1，2，3mL(每两份)，然后用流动相稀释到刻度，照样品含量方法操作进样10µL，记录色谱图，对照品高中低3个浓度平均回收率计算得：吡罗昔康为99.20%（RSD=1.7%，n=6），萘普生为101.55%（RSD=1.4%，n=6），双氯芬酸钠为98.60%（RSD=2.4%，n=6），吲哚美辛为99.10%（RSD=1.5%，n=6）。
2.8 稳定性实验
取样品新配的供试品溶液分别在0，1，3，5，8h进样10µL， 测定 吡罗昔康、萘普生、双氯芬酸钠和吲哚美辛的峰面积，吡罗昔康、萘普生、双氯芬酸钠和吲哚美辛在8小时稳定性很好RSD分别为为1.0%，1.4%，1.5%和0.8%，可以满足实验要求。
2.9 样品的含量测定
取供试品，按上述样品溶液制备，依上述色谱条件测定含量，分别进样10µL，记录色谱图，外标法计算，样品含量测定结果为：吡罗昔康1.07（mg/粒），萘普生13.7（mg/粒），双氯芬酸钠7.02（mg/粒），吲哚美辛3.23（mg/粒）。
3.讨论
检测波长和流动相，采用DAD检测器，很大程度上可以选择任意紫外波长，综合考虑样品四组分的吸收强度和含量差异，选择254nm波长四组分都有较强的响应值，且吸收强度接近，峰形美观。流动相的选择，笔者曾选择甲醇：水做为流动相，吡罗昔康和萘普生出峰很好，双氯芬酸钠和吲哚美辛分离效果不佳，而选用乙腈-0.1%磷酸溶液（40:60）（用三乙胺调节pH 至3.0）为流动相，四者峰形相对较好，且同周围的峰分离很好，为了确保结果的准却可靠，对照品及供试品溶液最好是临用现制。笔者曾多次用不同的流动相来比较和分析处理样品，在不同的流动相条件，样品中四组分的保留时间同对应对照品一致，很大程度上确认了样品中至少添加这四种物质。
【参考文献】
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[Z].北京:化学工业出版社，2010.
论文作者:陈乃江,李玲,杨颖
论文发表刊物:《医药前沿》2015年11月第32期
论文发表时间:2016/5/4
标签：吲哚论文; 样品论文; 溶液论文; 色谱论文; 酸钠论文; 普生论文; 检验所论文; 《医药前沿》2015年11月第32期论文;