邓艳春[1]2000年在《一种新的抑癌候选基因的克隆及其功能的初步研究》文中研究表明本研究采用锚定引物PCR法从正常人脑cDNA中克隆到一个含有酰基携带蛋白(ACP)样结构域的新基因。该克隆具有完整读框区，全长为2.2kb，目前已经获得5′端1182bp。该基因编码一个含有357个氨基酸残基的蛋白质，分子量约40kD，故命名为p40。在用正常脑组织和胶质瘤组织消减杂交时发现编码p40的基因属于一种在正常脑组织高表达，胶质瘤组织低表达(或不表达)，而胶质瘤细胞系(BT325)不表达的差异表达基因。其后，组织原位杂交和免疫组化研究又进一步证实了这一发现。 mRNA组织表达分布研究表明，p40基因在唾液腺表达量最高，其次是脑组织的胼胝体和尾状核，在脑组织的白质、神经核团和皮质有广泛的高表达(脑垂体除外)；在骨骼肌的表达水平第三，在循环、消化、呼吸和泌尿生殖系统的多种脏器亦有不同水平的表达，而在胸腺、骨髓和睾丸表达量很低，在外周血白细胞则无表达。该基因在胎儿组织中的表达状态研究表明其在
尚学义[2]2007年在《稳定转染抑癌候选基因ndrg2对脑胶质瘤细胞系抑制作用的研究》文中进行了进一步梳理人ndrg2(N-myc downstream regulated gene 2)基因是本课题组用消减杂交法从人脑内克隆得到的一个抑癌候选基因,已被Gen Bank收录,登录号为AF159092。它定位于染色体14q11.2,mRNA全长2024bp,编码一个含有357个氨基酸残基、分子量约为40kDa的蛋白质。ndrg2为ndrg基因家族成员之一,该家族成员有4个:ndrg1, ndrg2, ndrg3, ndrg4,且该基因家族成员的氨基酸组成在从低等生物到高等生物的进化中有相当高的保守性,以上提示该基因家族在细胞的生命过程起着重要作用。本课题组初步研究结果显示,该基因在多种正常组织中高表达,而在某些肿瘤组织和肿瘤细胞系中低表达或无表达,比如发现该基因在肺癌和肝癌中的表达明显低于相应的癌旁组织,还发现该基因在体外可抑制多种肿瘤细胞系的生长,如瞬时转染胶质瘤细胞系BT325具有抑制细胞增殖的功能,推测该基因可能与肿瘤的发生发展有关,因此提出ndrg2可能为新的候选抑癌基因。但其作用的具体机制尚不清楚。为了深入研究ndrg2基因的功能,阐明其在体内的作用机制,弄清具体的信号传导通路及其如何与其他分子相互作用。本课题组拟建立稳定转染抑癌候选基因ndrg2的脑胶质瘤细胞系并进行细胞生物学检测,今后进一步对该基因进行深入研究。首先,通过RT-PCR检测方法检测几种常见的肿瘤细胞(肺癌细胞A549、人胚肾细胞293、乳腺癌细胞sk-br-3、结肠癌细胞HT29、人脑胶质瘤细胞U251、U87以及胃癌细胞SGC-7901等细胞株),比较其ndrg2表达含量的差异,结果发现在不同肿瘤细胞系中ndrg2 mRNA表达含量大不相同,在人胚肾细胞293中有较高的表达,在A549、HT-29、U251、7901细胞中低表达,在sk-br-3和U87细胞中没有检测到ndrg2的表达。考虑到U251细胞系为较常见的胶质瘤细胞系,其ndrg2表达量低,选用U251作为本次实验稳定转染的靶细胞。本实验用已构建好的质粒pEGFP-c2-ndrg2转染U251细胞系,经G418进行筛选后,挑取单克隆进行培养。之后,采用荧光显微镜观察、RT-PCR、western印迹等方法验证获得的表达细胞株是否过表达ndrg2。经上述方法验证无误后,初步认为转染是成功的,本课题组首次建立了稳定转染ndrg2的胶质瘤细胞系。外源性基因ndrg2在胶质瘤细胞中的稳定表达会对细胞有哪些影响呢?为了解决这一问题,本次试验还采用流式细胞术、MTT法、平板克隆形成试验对稳定转染后胶质瘤细胞U251的性状进行了检测。稳定转染ndrg2后的U251处于G1期细胞数为73.2%,明显高于转染空载体的U251 G1期细胞数(47.5%),说明稳定转染后的U251细胞增殖能力明显下降,大多数细胞处于G1期,DNA合成期细胞减少。同样,MTT法和平板克隆形成试验的结果也分别表明稳定转染ndrg2后的细胞生长能力下降,克隆形成能力有所降低。由此可见,外源性基因ndrg2的稳定表达对胶质瘤细胞起到了一种抑制作用。本实验首次建立了稳定转染ndrg2的脑胶质瘤细胞系U251,同时对外源性ndrg2基因在胶质瘤细胞中的稳定表达进行细胞生物学检测,发现转染后的胶质瘤细胞在增殖速度、生长能力以及克隆形成能力等方面都较前有所降低,认为ndrg2基因对胶质瘤细胞具有抑制作用,这也与之前本课题组在瞬时转染胶质瘤细胞系所得的结果相一致,进一步验证了ndrg2是一种抑癌基因的理论。关于ndrg2在体内的信号传导途径及其如何发挥作用,本课题组将进行进一步的探索。
江宁[3]2010年在《NDRG2在食管鳞癌组织中表达及在体外对食管鳞癌细胞功能影响的初步研究》文中认为食管癌是消化道最常见的恶性肿瘤之一，其两种病理类型：食管鳞癌和腺癌，具有不同的病因、病理和地理分布。中国和亚洲地区高发的为食管鳞癌。中国食管癌死亡率位居62种肿瘤死因的第四位，是一种极其常见的恶性肿瘤类型。食管癌缺乏早期诊断指标，一经发现多已到达晚期。尽管现在食管癌的治疗在手术、放疗、化疗方面取得了很大的进步，但是对患者远期存活改善仍不容乐观。因此迫切需要深入揭示食管癌发生与发展的分子生物学机制，阐明决定食管癌恶性生物学行为的关键基因，提供新的诊断和治疗靶点，提高食管癌患者生存率。人NDRG2基因是本校生物化学与分子生物学教研室于1999年克隆的一个新基因（GenBank Accession AF159092），属于NDR(N·myc-downstreamregulated gene)家族，与同家族NDRG1基因具有很高的同源性。该基因位于14q11.2，包括16个外显子和15个内含子。该序列编码357个氨基酸残基，分子量为40kD的蛋白质。前期关于NDRG2的研究显示，NDRG2与细胞生长、分化、凋亡、应激反应等生理过程有关。NDRG2在多种肿瘤组织与癌旁或正常组织中存在差异表达。外源性过表达NDRG2，对多种肿瘤细胞体外增殖具有抑制作用。虽然具体机制目前仍不清楚，但我们推测其可能为一种新的抑癌基因，广泛调节多种肿瘤细胞的生物学特性。目前，NDRG2基因在食管鳞癌组织中表达及其对食管鳞癌细胞系生物学功能的影响在国内外尚未见报道。本研究探讨了NDRG2分子在食管鳞癌组织中的表达及其对人食管鳞癌细胞系Eca-109体外增殖和凋亡等生物学行为的影响，为揭示NDRG2在食管鳞癌发生发展中的作用提供实验基础。本课题包括两个部分：首先，用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法检测11例食管癌及其配对癌旁组织中NDRG2表达情况。SP免疫组化方法检测39例食管癌组织及其配对癌旁组织中NDRG2的表达情况，并对NDRG2表达与患者年龄、性别、食管癌分期、分化、转移等各临床参数相关性做统计学分析。第二，进一步在体外利用携带NDRG2基因的腺病毒载体高效转染人食管鳞癌Eca-109细胞，通过western blot和RT-PCR方法分别检测转染前后食管癌细胞NDRG2表达变化。通过MTT比色实验、流式细胞仪测定的方法分别观察NDRG2对人食管癌细胞生长、增殖和凋亡的影响。结果显示，11例食管癌组织标本中有7例组织存在癌和癌旁的差异表达。食管癌组织石蜡切片中NDRG2表达显著低于癌旁组织，并且与食管癌淋巴结转移、临床分期和分化程度有关，而与年龄、性别无关。腺病毒介导NDRG2感染人食管鳞癌细胞系Eca-109后，NDRG2的mRNA和蛋白表达水平明显上调；MTT生长曲线显示NDRG2转染组细胞增殖受到明显抑制；流式细胞仪检测显示感染后的Eca-109细胞G2期细胞明显减少（P<0.01），S期细胞明显增多（P<0.01）；感染后的Eca-109细胞中凋亡细胞明显增多，感染48h后达16.0%。以上结果提示NDRG2作为一种抑癌候选基因，与食管鳞癌细胞分化、增殖及凋亡有关。NDRG2可能成为食管鳞癌病情进展评估、预后判断的有效指标，并有望成为食管鳞癌基因治疗的新靶点。
杨怡[4]2009年在《抑癌候选基因NDRG2在淋巴瘤中的表达及意义》文中研究表明【背景】淋巴瘤是一组起源于淋巴结或其他淋巴组织的恶性肿瘤,分为霍奇金病(简称HD)和非霍奇金淋巴瘤(简称NHL)两大类,其中NHL又包括T细胞淋巴瘤、B细胞淋巴瘤和NK细胞淋巴瘤。NK/T细胞淋巴瘤是恶性淋巴瘤中的一种独立的病种,其瘤细胞大部分来源于成熟的NK细胞,少部分来自NK样T细胞,故称为NK/T细胞淋巴瘤。近年来,对淋巴瘤发病的分子机制进行了深入的研究,发现了一些参与淋巴瘤形成、发展的重要分子通路,主要包括:EB病毒感染、多种信号途径的异常活化以及多种抗凋亡机制的存在。NDRG2(N-myc downstream regulated gene 2)是本研究组用锚定引物PCR方法从正常人脑cDNA文库中克隆得到的一个新基因,基因库登录号为AF159092Hj。本研究组采用多种方法对其mRNA及组织分布表达进行了研究,发现NDRG2在人体多种正常组织和器官均有不同程度的表达,而在相应的肿瘤组织中低表达或不表达,提示NDRG2可能是一个抑癌基因。近几年来,NDRG2在胃癌、乳腺癌、肝癌等中表达的研究均有报道,本实验结合淋巴瘤发病的分子机制阐述了NDRG2的可能作用,了解NDRG2在淋巴瘤中的表达情况,对阐明淋巴瘤的发病机制以及治疗具有一定意义。【目的】1.探讨NDRG2在不同淋巴瘤组织的表达情况及与临床资料的关系;2.探讨NDRG2在淋巴瘤、正常、病变组织的表达情况。【方法】1.淋巴瘤组织芯片购于陕西超英生物公司,芯片编号:CC15-17-001、CC15-19-003,其中淋巴瘤81例,36例为T细胞淋巴瘤,45例为B细胞淋巴瘤;淋巴结良性病变组织40例;淋巴结正常组织40例;2.48例NK/T细胞淋巴瘤组织蜡块来自西京医院病理科,光镜诊断为恶性淋巴瘤,按照2008年WHO淋巴瘤新的分类方法明确诊断为NK/T细胞淋巴瘤,诊断前均未做过任何放疗或化疗。根据Ann Arbor分期可分为:Ⅰ期21例,Ⅱ期18例,Ⅲ期6例,Ⅳ期3例,其中男29例,女19例,平均年龄52.87±15.02岁,所有病人有完整临床资料,4μm厚连续切片;3.免疫组织化学染色法,具体操作按说明书进行,常规二甲苯脱蜡水化,高压修复抗原,甲醇封闭内源性过氧化物酶,滴加小鼠抗NDRG2单克隆抗体(抗体稀释度为1:75),DAB显色,蒸馏水洗终止显色。以0.01 mol/L PBS取代第一抗体进行孵育作为空白对照;4.NDRG2免疫反应阳性产物的定量分析在密封片号的情况下,请西京医院病理医师独立在光学显微镜下对切片染色阳性情况进行评估,选择10个高倍视野进行计数,根据染色程度和着色细胞百分率进行半定量结果判定:胞质基本不着色记0分,阳性细胞染淡黄色记1分,染棕黄色记2分,染棕褐色记3分;着色细胞占计数细胞百分率≤5 %,记0分,5 %～25 %记1分,26 %～50 %记2分,50 %～75 %记3分,>75 %记4分,上述两项得分乘积作为最后判断结果:0分为阴性(-),1～4分为弱阳性表达(+),5～8分为中等强度表达(++),9～12分为强阳性表达(+++);5.利用SPSS 12.0软件包对结果进行统计学分析。计数资料间比较采用卡方检验和精确概率法。P<0.05为差异有统计学意义,P>0.05差异无统计学意义。【结果】1.NERG2免疫反应阳性产物呈棕褐色,定位于胞质,胞核不着色。2.统计结果显示正常淋巴结,淋巴结良性病变及淋巴瘤组织中NDRG2的阳性表达率分别为92.5 % ( 37 /40 ), 67.5 % (27 /40), 18.5%(15/81),三者相比具有统计学意义(P<0.05)。3.石蜡包埋NK/T细胞淋巴瘤组织中阳性表达率是6.2%(3/48);组织芯片包含的B细胞淋巴瘤及T细胞淋巴瘤阳性表达率分别为13.3 % (6/45)和25.0% (9/36)。经过统计分析, P﹤0.05,三者相比差异有统计学意义。NDRG2在NK/T细胞淋巴瘤的阳性率要低于B细胞淋巴瘤和T细胞淋巴瘤。4 . NDRG2的表达水平与NK/T细胞淋巴瘤病人的年龄、性别、临床分期无关(P>0.05)。【结论】1.NDRG2作为一种新的抑癌侯选基因,在淋巴瘤组织中可有较低量的表达,NDRG2在正常淋巴组织中的阳性表达率要高于淋巴瘤组织。2.本研究发现不同类型淋巴瘤组织的阳性表达率存在差异,总的来说,淋巴瘤中的阳性表达率是较低的,在大部分淋巴瘤组织中呈低表达或不表达,提示其低表达可能参与淋巴瘤的发生,为明确淋巴瘤的发病机制提供了线索。
秦晓琴[5]2010年在《NDRG2与组蛋白乙酰化在脑胶质瘤细胞系中的相关性研究》文中指出研究背景脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤,其发病率高,死亡率高,治疗困难,目前还没有完全有效的治疗方法。虽然其发病机理尚不完全明确,但普遍认为其发生和发展是多个癌基因过度表达和抑癌基因失活的结果。其中抑癌基因的失活起了很重要的作用,近期的研究表明,组蛋白乙酰化水平与肿瘤的产生、增殖和抑癌基因的表达水平有着密切的关系。因此,通过对抑癌基因作用途径的研究,弄清脑胶质瘤的发病机制,为其治疗带来希望。NDRG2基因是我们课题组首次于1999年用消减杂交法从人脑内克隆的一个新的抑癌候选基因。同源性分析表明,其与NDRG1具有高度的同源性,并含有一个能携带酰基的酰基携带蛋白结构域,故称为NDRG2。前期的研究表明,其在体内分布广泛,在终末分化的细胞中高表达;在增殖旺盛的组织中低表达;在同一组织内,在胚胎和新生期中低表达,在成年的相同组织中高表达。研究还发现NDRG2为多种肿瘤组织与相应正常组织的差异表达基因,在胶质瘤的组织和细胞系中,发现其表达明显的降低。同时在胶质瘤中过表达NDRG2基因时,发现其可抑制肿瘤细胞增殖,发生周期阻滞。我们初步明确其不但是一种抑癌候选基因,更是一种与细胞生长发育和分化增殖调控相关的重要基因。近期来的研究表明,抑癌基因的作用途径多与表观遗传学有关,目前发现的表观修饰主要包括DNA的甲基化,组蛋白的甲基化、磷酸化、乙酰化、泛素化和非编码RNA的调控染色质的再修饰等。在组蛋白的修饰中,研究最多的是组蛋白的乙酰化。结合对NDRG2的生物信息学分析结果,因其分子内含有一个可以携带酰基的酰基携带蛋白结构域,NDRG2作为一种与细胞生长发育和分化增殖相关的重要基因,其很可能参与了组蛋白乙酰化或去乙酰化过程。从来没有人对于NDRG2与组蛋白乙酰化或去乙酰化的关系进行研究。目前对于组蛋白乙酰化和去乙酰化调控基因转录机制的研究还处于初级阶段。组蛋白乙酰化和去乙酰化修饰是基因转录调控的重要机制之一。组蛋白乙酰化酶(HATs)和组蛋白去乙酰化酶(HDACs)是组蛋白乙酰化的关键酶,其决定着组蛋白乙酰化的程度,参与了肿瘤异常基因表达。组蛋白乙酰化机制与肿瘤细胞增殖和分化有着密切的关系。曲古抑菌素A(TSA)是一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂,其通过结合在组蛋白去乙酰化酶分子的催化中心,而可逆或非可逆地抑制HDAC的活性;作用于细胞,可引起染色体组蛋白广泛的乙酰化,从而提高组蛋白的乙酰化水平,调节某些基因的表达。研究表明组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACI)具有调节细胞周期,诱导多种肿瘤细胞株的生长停滞、分化或凋亡。为了深入研究NDRG2的功能,明确NDRG2与组蛋白乙酰化的关系,同时为进一步探索胶质瘤发病机制和新的治疗策略,本课题组拟通过组蛋白去乙酰化酶抑制剂处理,并利用腺病毒载体和siRNA技术转染人脑胶质瘤细胞系后观察NDRG2和组蛋白乙酰化的表达情况,进一步对该基因进行深入研究。实验方法1.首先利用组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)处理脑胶质瘤细胞系U251和U87,观察其细胞生长曲线,细胞周期的变化,并用Real-time PCR和Western blot方法观察了NDRG2和组蛋白乙酰化H3,H4和HDAC1的表达情况。2.利用腺病毒重组NDRG2载体转染脑胶质瘤细胞系U251后,用Real-time PCR和Western blot方法观察外源性过表达NDRG2后对组蛋白乙酰化H3,H4和HDAC1的水平的影响。3.用siRNA瞬时转染脑胶质瘤细胞系U251后,仍采用Real-time PCR和Western blot方法观察化学合成的三对NDRG2特异性siRNA的干涉效果,同时观察抑制NDRG2的表达后对上述三种蛋白表达的影响。实验结果1.TSA可明显抑制U251和U87细胞增殖,并引起细胞周期阻滞。TSA刺激后可同时上调NDRG2和组蛋白乙酰化H3和H4的表达,降低HDAC1的水平。2.在蛋白水平,外源性过表达NDRG2可以上调组蛋白H3和H4的乙酰化水平,对HDAC1的表达降低不明显。但在mRNA水平,过表达NDRG2可显著降低HDAC1的表达量。3.我们首先用Real-time PCR和Western blot方法验证了NDRG2siRNA的干涉效果,化学合成的三对NDRG2特异性siRNA均有效抑制NDRG2的表达量。在mRNA水平,抑制NDRG2的表达可以提高HDAC1的表达水平。在蛋白水平,抑制NDRG2的表达可以降低组蛋白乙酰化H3和H4的表达量,同样对HDAC1的表达量升高不明显。结论1.TSA能够抑制脑胶质瘤细胞U251和U87的增殖,并发生周期阻滞,未出现凋亡。2.TSA能够同时提高NDRG2和组蛋白乙酰化水平,降低HDAC1的表达量。3.NDRG2能够同时调节组蛋白乙酰化和去乙酰化水平,参与了组蛋白乙酰化/去乙酰化过程,但NDRG2是通过什么方式影响组蛋白乙酰化过程的变化呢?还有待我们进一步研究。
王立峰[6]2006年在《一种新的低氧应激反应基因NDRG2的确定及其功能的初步研究》文中研究说明人源NDRG2(又名SYLD或KIAA1248)是我室在1999年利用基于PCR的消减杂交技术进行神经胶质瘤与正常脑组织的基因表达差异研究时发现的一个低表达的新基因[GenBank登录号AF159092]，其mRNA全长为2024bp，编码一个含有357个氨基酸残基、分子量约41kDa的功能未知蛋白。该基因染色体定位在14q11.2，含有16个外显子，15个内含子。由于该基因在氨基酸序列上与已发现的N-myc下游基因NDRG1(N-myc down-stream regulated gene 1)具有较高的同源性，将其命名为NDRG2。该基因在成人骨骼肌、脑和心肌中高表达，而在其他组织中低表达或不表达。国内外其他实验室也相继报道了该基因。 近些年来对NDRG2基因进行了大量的研究，但其功能到现在仍然没有明确。为了深入探索该基因的功能，我们利用PSA，Superfamily和3D-PSSM等软件分别从Ndrg2蛋白的二级结构，空间构象和折叠分类等方面进行预测，结果发现Ndrg2在结构上(19-298位氨基酸)与α／β水解酶类蛋白具有高度的同源性，而α／β水解酶家族包括多种细胞抗氧化应激反应的酶类，提示该基因可能参与氧化应激。通过对NDRG2启动子区进行相关软件的分析，我们找到了三个可能的HRE(Hypoxia
佚名[7]2005年在《国家自然科学基金委员会生命科学部2005年度资助自由申请科学基金项目一览表》文中提出项目名称申请者姓名依托单位1微生物学学科(99项)我国云南热带、亚热带地区含羞草、羊蹄甲和决明根瘤菌的刘晓云西南林学院遗传多样性、系统发育研究我国酸性土壤分离的诺卡氏菌型放线菌的DNA指纹图谱鉴定张建丽北京理工大学和分类研究中国外瓶霉分子系统学分析李东明
参考文献：
[1]. 一种新的抑癌候选基因的克隆及其功能的初步研究[D]. 邓艳春. 第四军医大学. 2000
[2]. 稳定转染抑癌候选基因ndrg2对脑胶质瘤细胞系抑制作用的研究[D]. 尚学义. 第四军医大学. 2007
[3]. NDRG2在食管鳞癌组织中表达及在体外对食管鳞癌细胞功能影响的初步研究[D]. 江宁. 第四军医大学. 2010
[4]. 抑癌候选基因NDRG2在淋巴瘤中的表达及意义[D]. 杨怡. 第四军医大学. 2009
[5]. NDRG2与组蛋白乙酰化在脑胶质瘤细胞系中的相关性研究[D]. 秦晓琴. 第四军医大学. 2010
[6]. 一种新的低氧应激反应基因NDRG2的确定及其功能的初步研究[D]. 王立峰. 第四军医大学. 2006
[7]. 国家自然科学基金委员会生命科学部2005年度资助自由申请科学基金项目一览表[J]. 佚名. 生命科学. 2005
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