王岩
哈药集团制药总厂质检中心 150000
摘要：目的：头孢曲松钠，是第三代头孢菌素类抗生素，它能抵抗革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌，用于敏感致病菌所致的下呼吸道感染、尿路、胆道感染，以及腹腔感染、盆腔感染、皮肤软组织感染、骨和关节感染、败血症、脑膜炎等及手术期感染预防。研究表明β—内酰胺类抗生素引发的速发型过敏反应并非药物本身所致，而是与药物中存在的高分子聚合物有关，β—内酰胺类抗生素中的各种高分子杂质虽然结构不同，但通常具有相似的生物学特性（如致过敏性），故在质量控制中一般不需要对不同结构的聚合物进行每项控制，而只需控制其总量，本文中应用 以SephdexG-10葡聚糖凝胶填充的色谱柱与高效液相色谱仪系统相连接，并通过高效液相色谱法对头孢曲松钠中的高分子聚合物进行了相应的检测，并对相应的分析方法进行适当的调整，本方法操作简单、专属性强、灵敏度高，可用于头孢曲松钠中高分子聚合物的含量测定
关键词：高效液相色谱法；头孢曲松钠；高分子聚合物；含量测定
随着时代的发展以及国家医药领域的进步，越来越多先进的测定方法被应用到了药品的质量及成分检测中，其中以高效液相色谱法尤为突出。高效液相色谱法是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法具有分离效率高，选择性好，检测灵敏度高，操作自动化，应用范围广等特点，临床上应用的β—内酰胺类抗生素分子量都较小，他们本身只是半抗原，不具有免疫原性也不能引发过敏反应，但当他们与大分子载体共价结合后或当他们自身聚合后就容易引发过敏反应。因此，控制产品中的高分子杂质具有重要的意义，因上述药品的特性本文采用高效液相色谱法对不同批号的头抱曲松钠的高分子聚合物的含量进行了简单的试验分析。
一、仪器与试剂
LC-10Avp高压输液泵，SPD-10Avp紫外检侧器（SHIMADZU公司）；头孢曲松对照品由中国药品生物检验检定所提供；色谱柱为依利特SephdexG-10葡聚糖凝胶填充；磷酸二氢钠为固体试剂。
二、色谱条件
SephdexG-10凝胶色谱柱（400mmx10mm）；流动相A：PH值为7.0的0.1mol/L磷酸盐缓冲液[0.1mol/L磷酸二氢钠溶液-0.1mol/L磷酸二氢钠溶液（61：39）]；流动相B：水；流速：1.0ml/min；检测波长：254nm；柱温：室温。
三、方法
1．系统适用性实验
取0.4mg/ml蓝色葡聚糖2000溶液100ul，注入液相色谱仪，分别以流动相A、B为流动相进行分别测定，记录色谱图，如图1，测得理论板数按蓝色葡聚糖2000峰计算为987，拖尾因子为1.3，在两种流动相系统中蓝色葡聚糖2000峰的保留时间比值为0.98和1.00
精密称取头孢曲松钠200mg，置10ml量瓶中，加0.4mg/ml蓝色葡聚糖2000溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，取100ul注入高效液相色谱仪，用流动相A进行测定，记录色谱图，如图2，测得高聚体的峰高与单体与高聚体之间的谷高比为3.7
图1 蓝色葡聚糖2000峰
四、耐用性考察
本试验分别考察了采用不同柱温、流速、波长、pH、流动相盐浓度对头孢曲松钠聚合物含量测定的影响，其中流动相的耐用性试验，微调磷酸盐缓冲盐的浓度，分别用0.09mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）和0.11mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）进行考察，发现微调流动相盐浓度对分离度和柱效均无明显影响，说明以0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）为流动相的耐用性良好。因此，最终选择0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）为流动相。另外，通过考察不同柱温、流速、波长、pH对供试品中高分子聚合物含量测定的影响，结果表明上述因素在一定范围内变化对高分子聚合物峰之间以及高分子聚合物峰与主峰之间的分离度影响不大，说明本方法耐用性较好。
五、讨论
1. 流动相的选择
在酸性和碱性条件下头孢曲松钠均可发生聚合反应，因此测定时应选择pH为中性的流动相系统。选用0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）为流动相，发现高分子聚合物与样品能达到基线分离。
2.色谱柱的选择
用简单的凝胶色谱系统测定头孢曲松钠样品中高分子聚合物时，由于所测聚合物含量偏低，并无法得到完整的聚合物峰，因此选择SephadexG-10凝胶为填料的不锈钢色谱柱，能更好的分离头孢曲松与头孢曲松高分子聚合物，其方法简便，灵敏，准确，重现性好。
3. 色谱柱的保养
为了不使被测物质和杂质停留在色谱柱中，在每次的样品分析工作完成后，都应及时清洗色谱柱，由于流动相中含有大量的缓冲盐溶液，则应先用纯化水冲洗色谱柱，然后再用甲醇等极性稍若的溶剂将吸附在柱内的极性小的物质洗脱出来，洗脱液的用量一般为柱体积的20倍即可。
4.对照品的选择和准确度的考察
由于头孢曲松高分子聚合物是由头孢曲松单体分子通过分子间的氢键、静电相互作用、疏水相互作用而形成的，未破坏其分子结构，也未改变其化学性质，头孢曲松高分子聚合物和头孢曲松单体分子具有相似的色谱行为，因此可以用头孢曲松作为对照品，来测定头孢曲松高分子聚合物的含量。本研究重复性试验中连续测定了5份供试品中高分子聚合物的含量，其RSD为0.69％，说明本方法的重复性较好；另外，通过考察不同柱温、流速、波长、pH、流动相盐浓度对供试品中高分子聚合物含量测定的影响，结果表明上述因素在一定范围内变化对高分子聚合物峰之间以及高分子聚合物峰与主峰之间的分离度影响不大，说明本方法耐用性较好。由此说明本方法测定头孢曲松钠中高分子聚合物的含量的准确度较好。
综上所述，本方法操作简单、专属性强、灵敏度高，可用于头孢曲松钠中高分子聚合物的含量测定
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论文作者:王岩
论文发表刊物:《健康世界》2018年6期
论文发表时间:2018/5/30
标签：头孢论文; 聚合物论文; 色谱论文; 高分子论文; 曲松论文; 含量论文; 缓冲液论文; 《健康世界》2018年6期论文;