1.昆明市食品药品检验研究院 云南 昆明 650000
2.保山中医药高等专科学校中医药系 云南 保山 678000
摘 要：目的：采用高效液相色谱法（HPLC）和高分离度快速液相色谱法（RRLC）测定复方丹参片中三七含量。方法：采用HPLC法（药典方法）和高分离度快速液相色谱法（RRLC），Eclipse plus C18 3.5μm，4.6*100mm柱，流动相为乙腈和水梯度洗脱；流速：1.0mL/min ；检测波长：203nm；柱温：25℃。结果：《中国药典》2010年版第一增补本中，复方丹参片中三七含量测定用HPLC（高效液相色谱）法，此法分析需要高性能的系统和很长的分析时间。利用RRLC（高分离度快速液相色谱）法分析简便、快速，高效、节省溶剂和时间，线性关系良好。结论： RRLC法简便可行，分析时间短，重复性好，可用于复方丹参片中三七的4种有效成分的含量测定。
关键词：复方丹参片；三七；含量测定； RRLC
复方丹参片中用RRLC进行三七含量测定研究的文献并不多,其他研究主要集中在对三七药材的HPLC法研究和UPLC（超高效液相色谱）法研究。本文采用高效液相色谱法（HPLC）和高分离度快速液相色谱法（RRLC）测定复方丹参片中三七含量。建立测定复方丹参片中三七含量的RRLC（高分离度快速液相色谱）法。
1.仪器和试药
1.1 仪器
Agilent1260高效液相色谱仪(YX001)，附紫外检测器；MS205DU天平（METTLER TOLEDO）；AL-204天平（METTLER TOLEDO）； KQ5200DB型数控超声波清洗器（昆山市超生仪器有限公司）；微量无机除热原型超纯水机（型号：SC082664）；
1.2 试药
乙腈为色谱纯，甲醇为分析纯，水。
2.方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Eclipse plus C18 3.5μm，4.6*100mm柱流速：1.0ml/min柱温：30℃ ； 紫外检测波长：203nm流动相：乙腈为流动相A ,以水为流动相B ,按下表进行梯度洗脱。见表3。
2.2. 对照品溶液的制备
精密称取人参皂苷Rgl对照品、人参皂苷Rb1对照品、三七皂苷R1对照品及人参皂苷Re对照品适量，加70%甲醇制成每lml含人参皂苷Rgl及人参皂苷Rb1各0. 2mg，三七皂苷R1及人参皂苷Re各0. 05mg的混合溶液。
2.3 供试品溶液制备
按照《中国药典》2010年版第二增补本方法制备供试品：取上述样品共4批供试品各10片，除去包衣，精密称定，研细，取约1g ,精密称定，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，超声处理（功率250W,频率33kHz)30分钟，放置过夜，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4 RRLC法测定复方丹参片中三七的含量
采用高效液相色谱法（HPLC）作为检测复方丹参片中三七含量的方法，有效的控制了该药品的质量，但是该方法所需消耗的时间较长，进样一针需要110分钟左右，所需的流动相体积也很大。
4.结果和讨论
4.1 HPLC和RRLC测定复方丹参片中三七含量保留时间对比
4.2 HPLC和RRLC测定复方丹参片中三七含量分离度对比
5、结果和讨论
从上述两种方法测定结果可以得出结论：（1）HPLC法测定样品中的三七含量需要110分钟左右，而RRLC法则只需要35分钟左右，RRLC法比HPLC法更节省分析时间，节省溶剂，更高效和环保；（2）从表9中可看出，使用RRLC法测定的4个样品含量差异较大，可能是由于各样品遵循的药典版本不同导致的。（2010年版药典一部仅对丹参酮IIA，丹酚酸B进行检测，而《中国药典》2010年版第二增补本则是在此基础上增加了对三七的检测。）（3）由于梯度洗脱，基线在不同梯度席拓时会有降低或上升。因为RRLC比HPLC用更小颗粒的填料和更小的内径，更短的分析时间，所以RRLC的基线比HPLC基线更平稳，信噪比和灵敏度也更高。采用RRLC法测定复方丹参片中三七的4种成分的线性关系考察，可以看出，三七皂苷R1在0.25ug~1.50ug间呈良好线性关系；人参皂苷Rg1在0.99ug~5.9ug间呈良好线性关系；人参皂苷Re在0.022ug~1.3ug间呈良好线性关系；人参皂苷Rb1在0.96ug~5.8ug间呈良好线性关系。（2）RRLC实验法仪器精密度好，RSD值在2%左右；（3）在我们设定的色谱条件下，可以看出供试品的分析时间减短了，而人参皂苷Rg1与人参皂苷Re之间的分离度也大于1.5，比较理想。
本实验对于高效液相色谱仪的色谱柱进行了优化实验，分别对比了C18长柱（5.0μm，4.6*250mm），C18短柱（5.0μm，4.6*150mm）及C18微径柱（3.5μm，4.6*100mm），结果显示C18短柱虽然可以测定出复方丹参片中的三七4个成分，但是达不到很好的理论塔板数及分离度。C18长柱虽然可以达到要求的分离度和塔板数，但是需要消耗较长的时间，仍不理想。而采用C18微径柱则有效的改善了理论塔板数及分离度不够的问题，同时也使得各成分保留时间大大缩短。
参考文献
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[4] 国家药典委员会.中华人民共和国药:第一增补本[Z].北京：中国医药科技出版社，2010：201-202.
论文作者:禄美云1, 赵兴蕊2
论文发表刊物:《医师在线》2019年第01期
论文发表时间:2019/3/4
标签：丹参论文; 复方论文; 色谱论文; 片中论文; 人参论文; 含量论文; 高效论文; 《医师在线》2019年第01期论文;