倪力强[1]2001年在《柴枳合剂治疗慢性酒精性肝损伤大鼠的实验研究》文中进行了进一步梳理目的： 观察中药复方柴枳合剂对慢性酒精性肝损伤大鼠的治疗效应，探讨其可能的作用机制。 方法： 60％乙醇灌胃经24w建立慢性酒精性肝损伤大鼠模型。用柴枳合剂治疗2w，并与东宝肝素进行对比。观测：（1）血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、谷氨酰转肽酶（GGT）；（2）血清总胆固醇（Chol）、甘油叁酯（TG）；（3）肝脏微粒体后上清超氧化物歧化酶（SOD）、心肌黄酶（DTD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）及脂质过氧化物（LPO）；（4）肝线粒体脂溶性荧光色素（LsFP）；（5）肝总磷脂（PL）、总胆固醇（Chol）及膜磷脂组分磷脂酰胆碱（PC）、磷脂酰乙醇胺（PE）、磷脂酰丝氨酸（PS）、磷脂酰肌醇（PI）、神经磷脂（SM）；（6）肝组织病理。 结果： 60％乙醇灌胃24w可建立慢性酒精性肝损伤大鼠模型，模型2w内稳定。 与自然恢复组比较：柴枳合剂显着减轻肝细胞脂肪变；降低血清ALT、AST、ALP、GGT活性；提高血清Chol、降低血清TG；显着提高肝细胞微粒体后上清SOD、DTD活性，并能降低LPO含量；显着降低肝细胞线粒体LsFP含量；降低肝Cho1、SM含量，提高PC、PE含量；降低膜老化指数C/P，SM/PC。 结论： 柴枳合剂治疗慢性酒精性肝损伤大鼠的效应及作用机制为： 1减轻肝细胞脂肪变； 2促进肝细胞功能恢复； 3调整脂质代谢； 4抗脂质过氧化：提高抗氧化酶活性、降低脂质过氧化物含量； 5保护肝细胞膜、改善肝细胞膜流动性。
包桂花[2]2009年在《蒙药甘露益肝胶囊的药学研究》文中进行了进一步梳理蒙药甘露益肝汤散(蒙古名音译为额力根阿尔仙,意译为肝之甘露)是内蒙古民族大学蒙医药学院巴根那教授在传统方光明盐四味汤散的基础上化裁而成并应用于临床的经验方。由荜茇、干姜、诃子、光明盐4味药物组成。具有良好的保肝、醒酒功效。为满足临床需求,本课题将这一经验方研制成蒙药新药甘露益肝胶囊。首先对经验方甘露益肝汤散和传统方光明盐四味汤散进行大、小鼠酒精性肝损伤的药效学实验比较研究,确定了甘露益肝胶囊的处方。选用L_9(3~4)正交表设计试验,HPLC法测定评价指标胡椒碱的提取转移率、没食子酸的煎出转移率,同时考察总浸出物,研究优化了提取工艺。结果,荜茇、干姜的乙醇提取最佳工艺方案为A_1B_2C_1,即用8倍量(B_2)的90%乙醇(A_1)、以1ml·min~(-1)的速度(C_1)缓缓渗漉,胡椒碱的转移率可达99%;诃子、光明盐、及荜茇和干姜药渣等群药的水煎提取最佳工艺方案为A_3B_3C_3,即取药物最粗粉,加7倍量水,煎煮3次,每次煎煮1.5小时,没食子酸的煎出转移率可达65%。采用薄层色谱法对处方中的荜茇、干姜、诃子进行了鉴别研究;应用HPLC法对处方君药荜茇的主要成分胡椒碱、佐药诃子主含的没食子酸,分别进行了含量测定研究。结果,薄层色谱中各味药的特征斑点清晰,专属性强;含量测定方法精密度高、稳定性及重复性好。胡椒碱及没食子酸的平均回收率为99.75%、98.72%,RSD为2.54%、1.93%(n=6)。对甘露益肝胶囊进行了水分测定,崩解时限测定,装量差异、微生物限度、砷盐、重金属检查。结果,全部符合《中华人民共和国药典》(2005版)有关规定。对甘露益肝胶囊的叁批样品进行了稳定性试验研究,加速试验(40℃,RH75%)考察了6个月,长期试验常温留样观察18个月(仍在继续进行中)。结果,各项指标均符合规定。各月考察结果与0月结果相比较变化很小,提示本品质量24个月内稳定。对甘露益肝胶囊进行大、小鼠酒精性肝损伤及小鼠解酒等药效学实验研究,考察了该药的主要药效。结果表明,甘露益肝胶囊能够明显降低酒精性肝损伤致大、小鼠肝脾指数,血清中ALT、AST的活性及肝脏组织内MDA的水平的提高;使酒精致肝细胞脂肪变性、坏死等明显好转;明显缩短小鼠睡眠时间。提示,甘露益肝胶囊对酒精性肝损伤具有一定的保护作用,并有显着的解酒功效。对小鼠急性毒性试验结果表明,小鼠最大给药量为32.0g·kg~(-1)·d(以胶囊剂计),该给药量为临床等效量的约700倍(体重按70kg计算),表明本品在常用剂量范围内是安全的。
丁里玉[3]2004年在《抗纤1号胶囊的制备及加硒抗肝纤维化作用机理的研究》文中认为“肝纤维化”(Liver fibrosis)是诸多慢性肝病发展至肝硬化过程中所共有的病理组织学改变。无论何种原因(如病毒、乙醇、寄生虫、铜铁沉积等)均可引起的慢性肝损伤，同时启动肝纤维化的过程，其共同的病理变化是以胶原为主的ECM各成分增多或/和降解相对不足，并过多沉积在肝内引起肝纤维化，如不能在此阶段中止肝纤维化的进程，病情进一步发展就会引起肝小叶改建、假小叶形成，成为肝硬化，引起门脉高压及肝功能衰竭等严重不良后果，或由肝硬化直接演变为肝癌。由此可以看出，肝纤维化是肝硬化发病不可逾越的必经阶段，阻断肝纤维化的发生和发展对防治肝硬化具有重要意义。着名肝病学家Hans Popper指出：“谁能阻止或减缓肝纤维化的发生、发展，谁就将治愈绝大多数慢性肝病。”因此，阻断与逆转肝纤维化已被作为治疗各种慢性肝病，防治肝硬化的一个新起点。由此可见，肝纤维化的形成与发展是极其复杂的过程。因此，人们十分重视肝纤维化的治疗研究。许多西药(如前列腺素、马洛替酯、D－青霉胺、秋水仙碱等)对肝纤维化有一定治疗作用，但因其效果不理想，且毒副作用大，临床应用受到限制。那么如何预防及治疗肝纤维化成为当今医学界的难题。祖国医学认为该病的病因病机是各种外感内伤因素长期损伤肝脏，或肝病久病而郁，致肝气郁结，瘀血凝滞，邪盛正衰而逐渐形成。近年来中药复方多途径、多层次、多靶点的综合药理学治疗肝纤维化研究已显示出较好的前景，研究的深度也在不断加深。目前本研究室所采用的抗纤1号(丹参、莪术、鳖甲等组成)主要以活血化瘀为主，兼以软坚散结，在临床使用中已经获得很好的临床疗效，动物实验也取得了满意的结果。为了进一步探讨该方抗肝纤维化的作用，进行汤剂与胶囊不同剂型的比较实验研究。目前研究发现，肝纤维化患者的血清硒和发硒含量显着降低，提示肝纤维化与缺硒有着密切的关系。硒作为体内重要抗氧化系统GSH-Px(谷胱甘肽过氧化物酶)和PHGPx(磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶)的必需组分，能够清除体内的氧自由基，同时参与机体免疫反应，可能在拮抗自由基对组<WP=5>织细胞的损害方面发挥着重要作用。因此采用抗纤1号汤剂和与加硒相结合和胶囊与胶囊加硒相结合治疗大鼠肝纤维化实验比较研究。细胞因子(cytokine)是于20世纪50年代在研究感染性疾病中发现的，是一组具有自分泌、旁分泌和内分泌活性的激素样蛋白质，作用于肝脏的细胞因子在功能上可以加强肝细胞之间的联系，通过作用于细胞生长、分化、受体表达等方面，调节细胞的激活、内环境的平衡和组织的修复。其中HSC的激活是肝纤维化发生的中心环节。HSC的激活受多种细胞因子(CK)的调控，如转化生长因子(TGF)、肿瘤坏死因子(TNF)、胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)、白细胞介素-Ⅰ(IL-Ⅰ)、白细胞介素-6(IL-6)、血小板衍生生长因子(PDGF)等。其中关键的CK主要是PDGF、IGF-Ⅰ和TGFβ。其中IGF-Ⅰ与肝纤维化关系最密切。IGF-Ⅰ在肝纤维化中具有促纤维化和护肝、抗纤维化的双重作用。本研究在建立大鼠肝纤维化模型的基础上，采用抗纤1号汤剂与加硒相结合和胶囊与胶囊加硒治疗42天后，来观察大鼠肝纤维化组织中IGF-ⅠR免疫组化与原位杂交表达进行实验比较研究。实验研究内容主要包括以下四个部分：1. 抗纤1号胶囊的制备工艺研究目的 根据抗纤1号处方组成和各药味之间的关系，参考各药物所含成分的理化性质和药理作用的研究基础上；根据与治疗作用相关的有效成分或有效部位的理化性质，结合制剂制备上的要求等实际情况，进行工艺路线的设计，工艺方法和条件的筛选，制定出方法简便，条件确定的稳定工艺。以优选抗纤1号胶囊的最佳提取工艺与制备方法。方法 所有提取实验均采用正交设计。包括郁金、叁棱、莪术叁味药材挥发油的提取及β-环糊精包合物制备，丹参和当归的乙醇提取，鳖甲、土鳖虫及上述药物的药渣水提工艺筛选研究。以挥发油的重量、丹参酮ⅡA的含量及得膏率等为指标，考察药材粒度、回流时间、加水量、投料配比、乙醇浓度、溶媒用量、煎煮次数等因素对提取的影响。结果：⑴挥发油的提取结果：根据方差分析，确定最优提取工艺条件为药材浸泡3h，加8倍量水，加热回流提取7h。药材粒度为粗粉。最佳的因素组合应为A2B2C3D3。⑵挥发油的β-环糊精包合结果：根据实验所得最佳的因素组合应为A3B1C3，即β-环糊精：挥发油=8∶1，加2倍量水，<WP=6>研磨30min。⑶丹参和当归醇提结果：根据实验所得最佳的因素组合应为A2B2C3D2，即85%乙醇：溶媒用10倍量，回流时间为3.5h，提取次数为2次。⑷土鳖虫和鳖甲及药渣的水提结果：根据实验所得其最佳工艺应为A2B2C3，即提取次数2次，加水量10倍量，提取时间为2h。结论 在研究抗纤1号胶囊的制备工艺时对药味采用了分类提取的方法。利用正交设计将抗纤1号方剂各因素、各水平之间的组合均匀搭配，合理安排，可以用较少的，有代表性的处理组合数据，高效、快速、经济的多因素试验设计方法筛选抗纤1号胶囊的最佳制备工艺，找出影响制备中的主要因素、次要因素及较优组合，采用先提取挥发油，然后水提工艺与乙醇提取工艺双提法更适合有效活性物质的提取；优选出最佳
张玮[4]2003年在《复方鳖甲软肝方药物血清对大鼠离体肝星形细胞作用机理研究》文中研究表明肝纤维化是诸多慢性肝病的基础病理改变。肝纤维化的机制为细胞外基质(extracelluar matrix，ECM)的合成与降解失衡，导致ECM过度沉积所致。肝纤维化进一步发展即肝硬化。此时，肝的正常组织结构已被破坏，进一步发展，肝中央静脉周围和汇管区出现小叶间隔，形成假小叶，即可出现肝功能障碍。因此，积极防治肝纤维化的发生，无论从延缓或阻断肝硬化的形成，还是逆转肝纤维化病理进程，均具有十分重要的意义。近年来，大量资料表明，肝星形细胞(hepatocyte stellate cells ，HSC)是肝脏主要产生ECM的细胞，也是各种病因导致肝纤维化发生的共同中心环节。HSC活化是产生胶原的关键环节。HSC活化后，可出现细胞性状和细胞功能的改变。最突出的表现为ECM的合成与降解的失衡。HSC的活化可分为活化启动和活化持续两个阶段。HSC的活化依靠于细胞内信号转导的同时，还与核转录因子的调节密切相关。目前以HSC为靶向治疗肝纤维化的主要措施包括：①去除病因，减轻肝脏炎症，间接抑制HSC的活化；②选择性阻止HSC合成ECM；③促进HSC对ECM的降解④促进过剩的HSC凋亡，减少其数量。目前，西医对肝纤维化的治疗主要集中在防止肝损伤、抗炎、干预细胞内信号转导通路、拮抗促纤维化细胞因子作用、抑制胶原合成(转录水平或翻译水平)、促进胶原降解和促进HSC凋亡等多个方面。中医药对肝纤维化的治疗通常采用是活血化瘀、益气养阴、软肝散结、清热利湿和调理肝脾等治则。本实验采取的复方鳖甲软肝方由鳖甲、党参等十一味中药组成。其功能为：扶正祛邪，活血化瘀。扶正：党参健脾益气，紫河车益肾填精。驱邪：板蓝根清热解毒。活血化瘀：鳖甲，入肝、肾经，既可软坚散结，又可滋阴潜阳。当归养血活血，莪术行气祛瘀。其临床有效率达81.67%，治愈率达55.23%。本方系国家级中药新药(批准文号：国药准字1999，2-102号)已上市。本研究拟采用复方鳖甲软肝方药物血清对大鼠离体肝星形细胞作用机理开展实验研究。目的在于进一步深入了解复方鳖甲软肝方药物血清对HSC的增殖，活化以及对ECM降解和合成的影响。此外，本研究还从活化的HSC细胞内信号转导及核转录因子方面探讨复方鳖甲软肝方对HSC活化所产生的影响。<WP=4>1.复方鳖甲软肝方药物血清对HSC增殖影响的实验研究本实验从离体的角度观察复方鳖甲软肝方药物血清对肝星形细胞(HSC)增殖的影响，以探讨其抗肝纤维化的作用机制。研究表明，肝纤维化是一种常见的慢性进行性肝病，肝星形细胞的活化增殖以及细胞外基质(ECM)的沉积是肝纤维化的两个重要环节。肝星形细胞的大量增殖，可以合成过多的胶原、蛋白多糖等ECM成分，与肝纤维化的发生、发展过程密切相关。本实验结果显示，不同剂量的复方鳖甲软肝方药物血清作用48 h、72 h均可抑制肝星形细胞的增殖，尤以高、中剂量组明显，提示复方鳖甲软肝方药物血清抑制肝星形细胞增殖的药物效应与药物浓度呈量效依赖关系，其机制可能与药物中的有效物质能阻止HSC分泌血小板衍生生长因子(PDGF)和阻止HSC已分泌的PDGF与HSC受体结合有关，从而起到抑制肝星形细胞的活化增殖，达到治疗肝纤维化的作用。而培养24h，各组无显着性差异，提示HSC的增殖需要一个从接受细胞信号刺激活化到HSC增殖数量发生显着变化的时间过程，从本实验结果提示，该时间过程无疑要大于24h。因此，如何在早期通过抑制HSC的增殖途径达到遏止HSC的迅速增殖，无疑具有重要的临床意义。与本室以往活血化瘀方药物血清的MTT实验结果相比，培养48h、72h，复方鳖甲软肝方药物血清与活血化瘀方药物血清均可显着抑制肝星形细胞的活化增殖，表明复方鳖甲软肝方药物血清与活血化瘀方药物血清均能抑制肝星形细胞的增殖。2.复方鳖甲软肝方药物血清对HSC活化影响的实验研究本实验采用免疫组化技术观察复方鳖甲软肝方药物血清对肝星形细胞(HSC)中α-SMA、desmin、突触素表达的影响，以探讨其抗肝纤维化的作用机制。研究表明，肝星形细胞的活化是肝纤维化的中心环节。活化的主要特征包括肝星形细胞中α-SMA、desmin和突触素的表达。本实验结果显示在时间上desmin、突触素的表达早于α-SMA的表达。突触素作为一种较新的HSC活化指标，可通过自分泌、旁分泌等方式参与肝纤维化发生、发展过程。并为肝纤维化的发生发展过程中神经调节的参与提供了指标依据。实验结果还显示，复方鳖甲软肝方药物血清作用24h、48h、72h均可显着抑制desmin和突触素的表达；复方鳖甲软肝方药物血清作用48h、72h还可显着α-SMA的表达，提示复方鳖甲软肝方药物血清可抑制HSC的活化。由于肝纤维化时α-SMA、desmin和突触素在表达时间上存在差异，而复方鳖甲软肝方药物血清抑制α-SMA、desmin和突触素的表达时间上也同样存在差异，故推测复方鳖甲软肝方药物血清抑制α-SMA、desmin和突触素表达的作用机制可能存在差异，详情有待进一步研究。实验结果还显示，培养24h，各组α-SMA表达并不显着，提示HSC中α-SMA的表达同样需要一个时间阶段，同增殖实验结果提示一样，如在早期加以积极治疗，则可取得更好的疗效。与本室以往<WP=5>活血化瘀方药物血清对α-SMA影响的实验结果相比
参考文献：
[1]. 柴枳合剂治疗慢性酒精性肝损伤大鼠的实验研究[D]. 倪力强. 辽宁中医学院. 2001
[2]. 蒙药甘露益肝胶囊的药学研究[D]. 包桂花. 辽宁中医药大学. 2009
[3]. 抗纤1号胶囊的制备及加硒抗肝纤维化作用机理的研究[D]. 丁里玉. 河北医科大学. 2004
[4]. 复方鳖甲软肝方药物血清对大鼠离体肝星形细胞作用机理研究[D]. 张玮. 北京中医药大学. 2003
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