韩洋孟凡荣俞群
南京市中西医结合医院超声科江苏南京210014
【摘要】目的:逆穿刺活检法在兔肝肿瘤模型制作中的应用。方法:取60只新西兰大白兔，随机分为A、B、C3组，每组20只，超声引导下瘤块悬液注射法和逆穿刺活检法制作兔肝VX2肿瘤模型，术后超声观察28d。每组取3例肿瘤模型瘤体标本进行病理验证；每组取3例进行肿瘤的125I介入治疗实验。结果：兔肝VX2肿瘤模型制作方法中，A组兔肝模型肝内单发VX2肿瘤10只；B组兔肝模型肝内单发VX2肿瘤12只；C组兔肝模型肝内单发VX2肿瘤全部种植成功，未见腹壁浸润及腹腔种植。与A、B组相比，C组模型制作时间短，肝内单发VX2肿瘤种植成功率高。肿瘤病理显示三组病例均为兔肝VX2肿瘤，三组兔肿瘤模型均能满足125I介入治疗实验要求。结论：逆穿刺活检法制作兔肝VX2肿瘤模型能够满足实验要求，并且具有成功率高、损伤小。该法在兔肝VX2肿瘤模型制作中具有很高的应用价值。
【关键词】兔;肝VX2肿瘤模型;逆穿刺活检法
【中图分类号】R2465【文献标识码】B【文章编号】1674-8999(2013)08-0115-01
近年来，在肝癌的动物实验研究中，兔的肝VX2肿瘤模型具有可多部位种植及种植后成活率高，其形态学、生化和生物学特性与人类癌瘤相似，在科研实验中应用广泛。为提高兔的肝VX2肿瘤模型的制作成功率，本小组对肝VX2肿瘤模型的制作方法进行研究。
1材料与方法
实验动物:新西兰大白兔60只，体重约16～20kg，3～5月龄，雌雄不限，随机分为A、B、C三组，每组20只。
11建立兔肝VX2肿瘤模型：麻醉方法为盐酸氯胺酮注射液50mg/kg肌注法。
A组将VX2肿瘤从荷瘤兔后腿部剥离，将肿瘤块剪碎成约1mm3大小。在种植兔剑突下作一腹部切口，用眼科镊子将组织块埋入肝内部，深约5mm，然后填压凝胶海绵止血。
B组，用1ml针筒吸取剪碎的瘤块液02ml,内含大小约1mm3的VX2瘤块2～3个，在超声引导下，注射器针头经皮刺入肝左叶内，深度约15~20mm，将瘤块注入。
C组，①制作瘤块，用18G活检针于荷瘤兔腿部VX2肿瘤处穿刺活检，然后将瘤块组织条置入生理盐水中，清洗后用剪刀剪为长约2mm的瘤块。用1ml针筒吸取一个瘤块备用；②在超声引导下，将备用针管经皮刺入肝左叶内，深度约15~20mm，然后快速推入瘤块。
12超声观察：术后隔天1次对兔VX2肿瘤模型进行超声监测，记录接种区病灶的大小、回声、血供等超声改变。超声检查28d，每组选取三个瘤块较大者于不同时间处死实验动物，取出瘤块，进行病理学检查。
13治疗实验：每组抽取三例瘤体较小的模型，进行超声引导下125I粒子植入治疗。每周超声检查1次，观察瘤体大小，3周后，取出瘤体进行病理检查。
兔肝VX2肿瘤模型成功标准：肝内单发肿瘤形成，无腹壁浸润，无腹腔种植、腹水。
14统计方法：采用SPSS115统计软件进行统计，统计方法为x法和t检验法。
2结果
各组兔肝VX2肿瘤模型对比情况：A、B、C三组中，A组兔术后第2d精神状态差，进食量少；B、C组兔与实验前相比无明显异常。兔肝VX2肿瘤模型制作7d内，A组实验兔死亡5只，B组实验兔死亡1只，C组实验兔无死亡，成功率100%。14d后A组发生切口感染者5只；肝肿瘤自肝内向外生长，浸润腹壁者5只；B组发生浸润腹壁4只；腹腔种植3只，伴有腹水形成;3组中单发肝内肿瘤共42只，未见明显肝外浸润，符合肝VX2肿瘤模型标准。
肝VX2肿瘤介入治疗后观察结果显示，未经放射粒子125I治疗的兔肝VX2肿瘤继续生长，最后发生液化。经过植入125I治疗的瘤体体积缩小，回声增强。病理结果显示瘤细胞消失，瘤体纤维化。图3示肝VX2肿瘤植入125I声像图，高回声短线为125I粒子。
3讨论
兔肝VX2肿瘤模型是目前国内外常用的动物实验模型，其中比较成熟的方法有瘤块混悬液注射法和开腹手术瘤块埋入法［1-2］。这两种方法制取瘤块的步骤相同，需要将兔大腿部肿瘤切下来，然后再加工为1mm3大小的瘤块，费时费力，而且对瘤兔创伤大，每只瘤兔只能使用1次［3］，反复制作瘤兔耗费一定的实验时间。逆穿刺活检法属于微创方法，制取瘤块方便快捷，损伤小，能保证荷瘤兔的多次使用，为肝VX2肿瘤的后续实验带来更广阔的发展空间。
本研究显示，3组肝VX2肿瘤均为实体肿瘤，无液化，能达到肝VX2肿瘤的实验要求；与传统的瘤块制作方法相比，逆穿刺活检法瘤块制作时间明显缩短，而且肝VX2肿瘤种植成功率。
Liu等［4］采取A组方法制作兔肝VX2肿瘤时，成功率915%，高于本小组研究的成功率，但低于C组制作方法的成功率；与开腹手术瘤块埋入法相比（A组方法），逆穿刺活检法具有明显的优势：不需开腹，无开腹手术瘤块埋入法常见并发症，如出血多、损伤大、术中兔易产生麻醉意外等。与超声引导下瘤块悬液注射法相比，具有无腹腔种植，不易浸润腹壁、成功率高、模型性质稳定等优点。
逆穿刺活检法制作兔肝VX2肿瘤模型具有操作时间短、接种方法简单、位置可靠、重复性好、模型性质稳定、成瘤率高等特点。逆穿刺活检法在肝VX2肿瘤模型制作中的成功应用。综上所述，逆穿刺活检法制作兔肝VX2肿瘤模型具有成功率高。
参考文献
［1］Zou X,Liu Q,Zhou X,Ultrasound-guided percutaneous laser and ethanol ablation of rabbit VX2 liver tumors［J］.Acta Radiol.2013,54(2):181187
［2］韩建波,仇毓东.入肝血流阻断下射频消融后毁损灶周围肝组织的病理变化［J］.中国普通外科杂志,201221(7):840844
［3］Gao L,Song JR,Zhang JW.Chloroquine Promotes the Anticancer Effect of TACE in a Rabbit VX2 Liver Tumor Model［Ｊ］.Int J Biol Sci.2013,9(4):322330
［4］Liu Y,Akers WJ,Bauer AQ,Intraoperative detection of liver tumors aided by a fluorescence goggle system and multimodal imaging［J］.Analyst.2013,138(8):22542257
论文作者:韩洋孟凡荣俞群
论文发表刊物:《中医学报》2013年8月第23卷供稿
论文发表时间:2014-3-20
标签：肿瘤论文; 模型论文; 超声论文; 方法论文; 腹壁论文; 成功率论文; 率高论文; 《中医学报》2013年8月第23卷供稿论文;