大连大学附属中山医院
摘要：目的：探讨血管内皮生长因子-C（VEGF-C）在结直肠癌中的表达及其与淋巴管生成和淋巴转移的关系。方法：应用免疫组织化学染色SP法检测48例结直肠癌患者肿瘤原发病灶及据肿瘤病灶5-10cm的正常对照组织中VEGF-C及D2-40的表达情况。结果：VEGF-C在结直肠癌及正常组织中的表达差异具有统计学意义（x2=23.263，P<0.001）；VEGF-C在有无淋巴转移组中的表达差异具有统计学意义（x2=24.300，P<0.001）；结直肠癌及正常组织中的LVD差异具有统计学意义（t=﹣21.163，P<0.001）；有无淋巴转移组的LVD差异具有统计学意义（t=6.371，P<0.001）；VEGF-C阳性表达与阴性表达的LVD差异具有统计学意义（t=5.134，P<0.001）。结论：VEGF-C在结直肠癌组织中高表达，并可能促进其淋巴管生成及淋巴转移。
关键词：结直肠癌；血管内皮生长因子-C；D2-40；淋巴管生成；淋巴转移
结直肠癌是常见的消化系统恶性肿瘤之一，发病率不断上升，预后较差；淋巴转移严重影响其预后；淋巴管生成在淋巴转移中发挥重要作用。VEGF-C作为目前研究最多的淋巴管生成因子被认为在结直肠癌的淋巴管生成中发挥重要作用。我们利用免疫组织化学法检测48例结直肠癌组织及正常对照组织中VEGF-C的表达，并通过检测D2-40在以上组织中的表达反映淋巴管密度（LVD），以探讨VEGF-C在结直肠癌组织中的表达及其与淋巴管生成和淋巴转移的关系。
1材料与方法
1.1实验标本
收集我院2013年1月至2014年11月胃肠外科经结直肠癌根治术切除标本48例，术后病理均证实为腺癌，其中男30例，女18例，年龄42-83岁，中位年龄64岁，有淋巴转移者27例，无淋巴转移者21例；并选取据肿瘤病灶5-10cm组织作为正常对照。所有标本均经4%中性甲醛固定，石蜡包埋，连续4um厚度切片。
1.2实验试剂
兔抗人VEGF-C单克隆抗体、鼠抗人D2-40单克隆抗体、EDTA抗原修复液（PH9.5）、二抗和DAB试剂盒均购自福建迈新生物技术有限公司。
1.3实验方法
将切片常规脱蜡至水，VEGF-C组及D2-40组切片均至于EDTA抗原修复液（PH9.5）中行抗原修复，严格按照免疫组织化学SP法进行染色（具体步骤严格按照试剂盒规定），苏木素复染，梯度酒精脱水，中性树脂封片。
1.4实验结果判定
1.4.1 VEGF-C染色判定 以细胞胞质中出现黄色或棕黄色颗粒为阳性细胞，在200倍镜下观察5个高倍视野下细胞染色强度及染色比例；染色强度：以无染色为0分，淡黄色为1分，黄色或深黄色为2分，褐色或棕褐色为3分；染色比例：无染色细胞或阳性细胞数所占比例﹤5%为0分，﹥5%～25%为1分，﹥25%～50%为2分，﹥50%～75%为3分，﹥75%为4分；两者评分相乘≧4分为阳性表达。
1.4.2 D2-40染色判定 D2-40标记的淋巴管密度按照Weidner法判定，以阳性着色的单个细胞或细胞簇记为1个阳性微淋巴管，先在100倍镜下确定5个着色最密集区域，然后在200倍光镜下分别计数5个视野，取平均值。
1.5统计学方法 应用SPSS15.0统计软件对数据进行处理，计数资料采用x2检验；计量资料以±s表示，2组间差异的比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 VEGF-C的表达与结直肠癌的关系
VEGF-C主要表达于肿瘤细胞及正常粘膜上皮细胞的细胞质内，呈淡黄色至棕黄色；在结直肠癌组织中呈强表达，在正常组织中呈弱表达或阴性；其在结直肠癌组中表达的阳性率为62.5 %（30/48），在正常对照组中表达的阳性率为14.6%（7/48），两者阳性率比较，差异具有统计学意义（x2=23.263，P<0.001），见表1。
2.2 VEGF-C表达与淋巴转移的关系
结直肠癌中VEGF-C在有淋巴转移组表达的阳性率为88.9%（24/27），无淋巴转移组表达的阳性率为22.2%（6/21），两者阳性率比较，差异具有统计学意义（x2=24.300，P<0.001），见表1。
2.3 结直肠癌与LVD的关系
D2-40主要特异表达于淋巴管内皮的胞质或胞膜，呈棕黄色索条状或不规则裂隙状，主要表达于结直肠癌周边区的间质细胞中，管壁较薄且不规则，呈散在或成簇分布，部分扩张或闭塞成狹隙状；结直肠癌中LVD为8.46±0.114，正常组织中LVD为3.96±0.116，差异具有统计学意义（t=﹣21.163，P<0.001），见表1。
2.4 淋巴转移与LVD的关系
有淋巴转移的27例结直肠癌组织中LVD为10.15±0.140，无淋巴转移的21例结直肠癌组织中LVD为6.29±0.127，两者比较差异具有统计学意义（t=6.371，P<0.001），见表1。
2.5 VEGF-C的表达与LVD的关系
VEGF-C阳性表达的30例结直肠癌组织中LVD为9.77±0.117，阴性表达的18例结直肠癌组织中LVD为6.28±0.219，两者比较差异具有统计学意义（t=5.134，P<0.001）。
表1 VEGF-C、LVD在结直肠癌中的表达及与淋巴转移的关系
3.讨论
淋巴转移作为结直肠癌最主要的转移方式，严重影响其预后，并对其临床分期及治疗方向起决定性的影响。目前观点认为，淋巴管生成因子在肿瘤的淋巴管生成中发挥重要作用，并最终影响肿瘤淋巴转移。VEGF-C是血管内皮生长因子家族（VEGF）成员之一，定位于人类染色体的4q34，是目前研究最多的淋巴管生成因子，是一种具有高度生物活性的功能性糖蛋白，具有很强的促进管腔内皮细胞分裂增殖的能力。Ishikawa等[1]研究发现VEGF-C与其受体VEGFR-3结合后，可诱导肿瘤周围或内部的淋巴管生成，并可促使新生淋巴管与原有淋巴管相融合，进而影响肿瘤的淋巴转移。Ren等[2]研究发现VEGF-C在结直肠癌组织中呈强阳性表达，并且与淋巴转移及局部浸润具有相关性，提示VEGF-C的高表达可能促进结直肠癌的进展及淋巴转移。D2-40是Marks等[3]于1999年在研究生殖细胞肿瘤和胚胎睾丸的精母细胞表面时新发现的一种唾液酸粘蛋白，能通过唾液酸蛋白特异性结合、检测肿瘤淋巴管内皮上固定的抗原决定簇。
本次研究结果显示，VEGF-C在结直肠癌中的阳性率明显高于正常对照组；而且VEGF-C在有淋巴转移组中的阳性率明显高于无淋巴转移组；而且在VEGF-C阳性组织中的淋巴管密度（LVD）值显著高于阴性组织中，提示VEGF-C的高表达可能与结直肠癌的淋巴管生成及淋巴转移有关。未来，通过检测以上两者在结直肠癌中的表达，有可能为临床诊断提供更为准确的病理分期，并对结直肠癌的术后治疗具有重要的指导意义。
参考文献：
[1]Ishikawa M，Kitayama J，Kazama S，et al.Expression of vascular endothelial growth factor C and D（VEGF-C and D）is an important risk factor for lymphatic metastasis in undifferentiated early gastric carcinoma[J].Jpn J Clin Oncol，2003；33（1）：21-27.
[2]Ren YW，Gao F，Song F，et al.VEGF-C and podoplianin expression of colorectal cancer tissues and its clinical significance analysis[J].Chin J Cancer Prev Treat，2013，20（20）：1592- 1595.
[3]Marks A，Sutherland DR，Bailey D，et al.Characterization and distribution of an oncofetal antigen（M2A antigen）expressed on testicular germ cell tumours[J].Br J Cancer. 1999；80（3-4）：569-78.
论文作者:张月蒙1,林峰2
论文发表刊物:《健康世界》2015年7期
论文发表时间:2015/10/30
标签：淋巴管论文; 淋巴论文; 结直肠癌论文; 组织论文; 阳性论文; 统计学论文; 差异论文; 《健康世界》2015年7期论文;