吴凤麟
长沙市公安局毒品检测鉴定中心 湖南长沙 410000
【摘 要】目的：建立测定尿液中的氯胺酮的固相微萃取结合气相色谱-质谱法。方法：优化影响SPME萃取结果的萃取时间、萃取头类型、离子强度、解析时间、萃取温度等因素条件，并对尿液中的氯胺酮进行分析。结果：范围在0.5?g/ml-2.5?g/ml时线性关系良好，0.9956为其线性相关系数，2.5?g/L为氯胺酮的最小检测限。结论：固相微萃取结合气相色谱-质谱检验尿液中的氯胺酮，该方法处理简单，分析迅速，提取物杂质少，灵敏度较高，可满足法医分析毒物的要求，且适用于实际尿液检测案例。
【关键词】固相微萃；气相色谱-质谱；尿液；氯胺酮
[Abstract] objective：to establish a determination of ketamine in urine of solid phase microextraction combined with gas chromatography - mass spectrometry. Methods：optimization of SPME extraction result of extraction time，extraction head type，ionic strength，analytical factors such as time，extraction temperature condition，and analyzes the ketamine in urine. Results：the range（including in 0.5 g/ml - 0.5（including g/ml linear relationship is good，for the linear correlation coefficient of 0.9956，2.5（including g/L for the minimum detection limit ketamine. Conclusion：the combination of solid-phase microextraction and gas chromatography - mass spectrometry in urine test ketamine，the method is simple，rapid analysis，extract less impurity，high sensitivity and can meet the requirements of forensic analysis poison，and is suitable for the actual urine test cases.
[Key words] solid phase micro extraction；Gas chromatography - mass spectrometry；Urine；ketamine
氯胺酮又称为K粉（katamine），化学名称是消旋-2-邻-氯苯基-2-甲氨基环己酮，氯胺酮是一种白色的结晶状粉末，且易溶于水，可微溶于乙醇中[1]。氯胺酮可使人们产生精神分裂症类的症状，此作用在成人中较常见且突出，儿童对此反应较轻，因此常作为麻醉药用于临床的外科检查及小手术中，同时也可作为全麻药物中的诱导剂，或者复合其他麻醉药共同使用[2]。氯胺酮属于国家管制的精神依赖性药物。近几年，非法使用氯胺酮情况越来越频繁，单独使用或者混合苯丙胺类一起使用。国外关于体内氯胺酮的报道较多，多为过量或者中毒致死案例，国内主要是关于氯胺酮的体外样品分析[3]。但目前，市场上未有有效、快速的筛选氯胺酮免疫测试剂，建立有效、准确、快速的检测技术，能够积极打击吸毒犯罪，并为滥用氯胺酮涉毒者提供有力证据，因此尿液中氯胺酮的检测具有重要作用[4]。本文主要采用固相微萃取结合气相色谱-质谱方法检验尿液中的氯胺酮，该方法集聚提取、富集及进样为一体，且快速有效，取得了满意效果。
1 实验仪器、试剂及方法
1.1 实验仪器及试剂
美国生产的气相色谱-质谱仪器Varian CP-3800/SATRUN 2000，30m×0.25mm×0.25?m；SPME装置；型号为JL-180的超声波清洗器；聚二乙醇/二乙烯基苯CW/DVB，聚丙烯脂PA85?m，聚二甲基硅氧烷PDMS100?m；0.1g/2ml的氯胺酮标样；NaOH（pH=13）缓冲液；近期未服用药物、健康自愿者排泄的尿液作为空白尿液。
1.2 实验条件
1.2.1 质谱条件：电子轰击离子源EI，有40至300amu的扫描范围，200℃的阱温。
1.2.2 色谱条件：260℃的进样器，未分流进样，将分流闸打开0.01min；180℃初始柱温、1ml/min的氦气，保持2分钟，并以每分钟10℃的速度将温度上升至280℃，保持15分钟。
1.3 实验方法：将检测尿液取出1ml，并将含量为1ml的NaOH（pH=13）缓冲液以及含量为0.4mg无水Na2SO4加入检测尿液中，均匀混合后，将其置于超声波清洗器中，在液体中部插入萃取头，并设置超声波清洗器温度（27℃），萃取时间为45分钟。后将萃取头取下，放置于气相色谱汽化室中进行解析，时间为5分钟。
2 实验结果
2.1 考察萃取条件
2.1.1 选择萃取头：本次试验选取三种萃取头在相同条件下测定氯胺酮，如65?m的CW/DVB、85?m的PA、100?m的PDMS。实验结果表明，在65?mCW/DVB涂抹涂层的萃取头，是三种萃取头中萃取效果最好的。
2.1.2 选择萃取温度以及萃取时间：萃取头及水样膜之间会产生一层水膜，导致萃取物向涂层方向扩散受阻，本次试验通过使用超声波清洗器的加热及超声作用，快速促进萃取平衡，将检验的灵敏度得以提高。但在操作过程中，萃取头吸附是一个不断放热的过程，如若温度较高，会使得萃取头及被测物之间亲合度明显削弱，由此导致检验的灵敏度降低。由表1可看出，在不同的温度下，SPME对于富集氯胺酮的效果，本次试验中从表1可看出，萃取效果最好时的温度为27℃。在此温度条件下（27℃），考察了氯胺酮萃取量和SPME吸附时间之间的关系，由表2可看出，有效萃取氯胺酮的时间为45分钟。由此，本次实验选取45分钟为萃取时间。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆
表1 萃取温度和氯胺酮富集量之间的关系
峰高（×106）温度（℃）
1.0 21
2.7 27
1.4 30
1.7 34
表2 氯胺酮的SPME（CW/DVB的萃取头）萃取量和吸附时间之间的关系
峰高（×107）萃取时间（分钟）
4.9 5
10.4 30
12.7 45
12.3 50
2.1.3 离子强度对萃取效率的影响 盐析剂的添加会增加活度系数，使得氯胺酮溶解度降低，由此萃取效率得以提高。本次实验中考察了不同量硫酸钠和萃取结果之间的关系，选择添加不同浓度的硫酸钠分析萃取效果，浓度分别为5%、10%、15%、20%、25%、27%。实验结果表明，随着硫酸钠浓度的提高，萃取效果显著增加，当硫酸钠浓度≥20%时，不同浓度的萃取效果基本无差别。因此本次试验的萃取条件为添加20%浓度的硫酸钠。
2.1.4 选择热解析时间 本次试验分别设定四个热解析时间，分别为1.0min、2.0min、3.0min、4.0min、5.0min，将已经萃取吸附的待测目标化合物SPME的萃取头放置于气相色谱的汽化室中，进行热解析并仔细观察。实验结果表明，在4min时，氯胺酮就已经完成热解析。但为了方便在实验室中进行操作，将热解析时间设定为5分钟。
2.1.5 选择pH值 本次选择pH值为7/8/9/10/13等五种检测液进行试验，由表3可看出，随着时间的推移，SPME萃取量逐渐增加，由此可得，本次试验选取NaOH（pH=13）缓冲液进行萃取。
表3 SPME萃取量和pH值之间的关系
峰高（×107）萃取时间（分钟）
7.6 7
7.9 8
8.7 9
10.4 10
12.5 13
2.1.6 线性关系和检出限 将氯胺酮标准溶液添加于1.0?g、2.0?g、3.0?g、4.0?g、5.0?g的尿液中，并绘制氯胺酮的响应值和浓度之间的曲线关系，得出氯胺酮和峰高浓度范围在0.5?g/ml-2.5?g/ml之内时线性关系良好。本次试验得出的线性方程Y=1548.4560X-2411.0341，其中X=0.9956。将基线噪声3倍对应待测物含量作为方法检测限，该方法测定结果表明，2.5?g/L为氯胺酮的最小检测限。
3 讨 论
实验仪器进样时衬管内轴上部温度是不相同的，其中温度最高位置在中部，在汽化器内，由于SPME的萃取纤维汽化点位置的不同，均影响着色谱检测的灵敏度。为了确保萃取头上部的样品可迅速汽化，以此提高检测灵敏度，本次试验的进样解脱点确定为SPME最长针头的长度[5]。
本次试验中萃取头确定为65?m的CW/DVB，其极性较强，在实验操作中发现，萃取头不仅吸附尿液中的药物，与此同时也吸附与其极性较近的物质[6]。因此，在进行解析前，将萃取头用蒸馏水冲洗干净，能够清除其中的杂志，降低对本实验的干扰。同时，萃取头萃取后，将其放置于空气中做0.5至1分钟的停留，挥发水气候再行解析，避免萃取头涂层的脱落[7]。
综上所述，固相微萃取结合气相色谱-质谱检验尿液中的氯胺酮，该方法操作快捷简便，检测材料的用量少，回收利用率较高，提取物杂质少，灵敏度较高，可满足法医分析毒物的要求。
参考文献：
[1]肖昆，王玉瑾.固相微萃取膜技术结合气相色谱法检验尿样中曲马多[J].中国卫生检验杂志，2013，23（17）：3368-3369.
[2]许振乾，赵艳军，刘雪芹.顶空固相微萃取-气相色谱-质谱法分析尿液中的卤代麻醉剂[J].中国医药导刊，2014，16（9）：1270-1272.
[3]邹薇，张梦萍，邱爱玲.尿中甲苯的顶空固相微萃取-气相色谱测定法[J].环境与健康杂志，2013，30（8）：743-744.
[4]刘源，刘晓云，马安德，等.超快速液相色谱-串联质谱法同时测定尿液中氯胺酮及其代谢产物去甲氯胺酮[J].中国药物依赖性杂志，2015，24（1）：41-46.
[5]邹薇，张梦萍，卫海燕.尿中2，5-己二酮测定的顶空固相微萃取气相色谱法[J].中华劳动卫生职业病杂志，2015，33（4）：297-298.
[6]张梦萍，邹薇，孟磊.顶空固相微萃取气相色谱法测定尿中三苯[J].中国辐射卫生，2014，23（4）：370-372.
[7]张月琴，叶能胜，谷学新，等.微波辅助萃取-气相色谱法测定尿液中的氯胺酮[J].分析化学，2009，37（2）：311.
论文作者:吴凤麟
论文发表刊物:《航空军医》2016年第12期
论文发表时间:2016/7/21
标签：氯胺酮论文; 尿液论文; 色谱论文; 气相论文; 温度论文; 时间论文; 硫酸钠论文; 《航空军医》2016年第12期论文;