彭泽[1]1989年在《单克隆抗体与博来霉素A_6偶联物治疗肝癌实验研究》文中研究指明肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，其对大多数临床肿瘤化疗药物不敏感。博来霉素A_6(A_6)为博来霉素中的单一组分，对肝癌细胞有较强杀伤作用，对祼鼠移植人肝癌BEL-7402有明显抑制作用，本研究将抗肝癌单克隆抗体与A_6偶联，观察偶联物对肝癌细胞的杀伤作用和对裸鼠移植入肝癌的疗效。 用人肝癌BEL-7402免疫BALB／c小鼠，取免疫鼠脾细胞与小鼠SP2／O骨髓瘤细胞融合。得杂交瘤780株，筛选出分泌抗人肝癌抗体杂交瘤143株，其中H111分泌的抗体为IgG_1型。与人肝癌BEL-7402，人肝癌7721和人肝癌PLC有强阳性反应，与人鼻咽癌CNE-2和人咽上皮癌KB细胞有弱交叉反应，与人大肠癌HT-29，人肺癌A549，人胚肺二倍体细胞2BS无交叉反应。PAP-酶免疫组化证明与BEL-7402细胞膜表面抗原结合。~(126)I标H111单抗在荷瘤裸鼠体内分布以肿瘤最多达1.33％。 用Dextran T40为中介体的方法连接H111单抗和博来霉素A_6，偶联物兼有两者的生物活性，抗体与A_6偶联率为1：287，抗体活性大部保留，A_6保留原活性6.3％．~(125)I标记H111-Dex-A_6偶联物在裸鼠移植人肝癌组织中有较多分布。 H111-Dex-A_6偶联物作用1小时对人肝癌BEL-7402细胞克隆形成90％抑制浓度(IC90)为0.127uM，A_6为15.16uM，非特异性单抗M3与A_6偶联物(M3-Dex-A_6)为9.33uM，H111-Dex-A_6比A_6提高119倍，比M3-Dex-A_6提高73倍；对KB细胞克隆形成IC90 H111-Dex-A_6为0.825uM，As为11.49uM，M3-Dex-A_6为13.19uM，H111-Dex-A_6比A_6和M3-Dex-A_6分别提高14和16倍；H111-Dex-A_6对BEL-7402细胞毒性比KB细胞强6.5倍。同时加入游高H111单抗能阻断H111-Dex-A_6细胞毒性：同时加入M3单抗和非针对同一抗原决定簇的单抗Hp_1均不能阻断H111-Dex-A_6的细胞毒作用。 人肝癌BEL-7402移植于裸鼠皮下，6天后分别腹腔注射A_6，H111单抗与A_6混合物，M3-Dex-A_6偶联物和H111-Dex-A_偶联物，另一组注射磷酸缓冲液(PBS)为对照，每周二次，共8次，第28天后测量瘤体积。PBS
彭泽, 甄永苏[2]1991年在《单克隆抗体与博来霉素A6偶联物对肝癌的实验研究》文中研究表明用Dextran T40为中介体的方法偶联抗人肝癌单抗Hlll和博来霉素A6,体外实验显示Hlll与A6偶联物对人肝癌细胞抑制90%克隆生成浓度(IC_(90))为0.17μmol/L:游离A6以及无关抗体与A6偶联物M3-A6分别为17/μmol/L和7μmol/L;同时加入Hlll单抗明显降低Hill-A6偶联物的细胞毒性;体内实验证明:Hlll-A6偶联物对裸鼠移植的人肝癌抑制率达78%,等剂量A6,M3-A6偶联物和Hlll与A6混合物的抑制率均约为30%。结果表明单抗Hlll与A6偶联物对肝癌的抑制作用明显比游离A6强。
邓甬川, 甄永苏, 郑树, 江敏[3]1993年在《大鼠单克隆抗体与博来霉素A6偶联物治疗人大肠癌实验研究》文中研究指明用Dextran T-40为中介体偶联大鼠抗人大肠癌单克隆抗体R19和博来霉素A6。体外实验显示R19与A6偶联物对人盲肠癌细胞Hce-8693抑制50%克隆生成浓度(IC_(50))为0.019μmol/L;游离A6及无关单抗与A6偶联物M3-A6分别为1.05和1.00μmol/L;对人结肠HT-29细胞IC_(50)为0.078μmol/L,而游离A6为4.0μmol/L。同时加入R19单抗能阻断R19-A6偶联物的细胞毒性。体内实验显示:R19-A6偶联物对裸鼠移植的人盲肠癌生长的抑制率达90%,而同等剂量的游离A6,R19与A6混合物和M3-A6的抑制率分别为52,34和48%。结果表明单抗R19与A6偶联物对人大肠癌的抑制作用明显比游离A6强。
江敏[4]1996年在《大鼠单克隆抗体的制备、鉴定、基因克隆、抗原分析以及药物偶联物的抗肿瘤作用研究》文中指出大鼠抗体具有一些小鼠抗体不具备的特点，抗体分子的轻链95％为κ型。因此可以利用小鼠抗大鼠抗体Igκ-1a抗体，高度特异性地将接种于Igκ-1b大鼠体内的具有Igκ-1a等位基因杂交瘤抗体分离纯化出来。通常认为大鼠杂交瘤单克隆抗体难以制备获取。本研究用人免疫球蛋白IgG、IgM和辣根过氧物酶免疫LOU／C大鼠，并与大鼠IR983F细胞融合，获得数株抗人IgG、IgM和辣根过氧化物酶的单克隆抗体，融合率在70％以上，杂交瘤能在培养条件下长期生长并稳定地分泌抗体，动物体内接种能产生含有较高浓度抗体的腹水，抗体的提取方法简便、有效，ELISA测定显示数株单克隆抗体均有较高的亲和力，亲和常数为10~7-10~(10)M~(-1)，因此用大鼠杂交瘤技术制备高亲和力的单克隆抗体是可行的，有利于抗体的大量制备。 以人肝癌BEL-7402细胞作为靶抗原免疫LOU／C大鼠，取其脾细胞与大鼠IR983F骨髓瘤细胞融合，获得稳定分泌抗人肝癌单克隆抗体3A5杂交瘤细胞株。ELISA交叉反应检测3A5对人肝癌BEL-7402、7721和Q3细胞皆呈强阳性，对人口腔鳞癌KB细胞、人胚肺2BS细胞和小鼠正常肝细胞等呈阴性。免疫组织化学检测单抗3A5对人体各正常器官组织的交叉反应显示，此抗体对人正常心、肝、脾、肺、淋巴结，中枢神经系统、肾小球、甲状腺、血液细胞等均无反应，对肾小管上皮细胞显示弱阳性，而对临床肝癌、肠癌的病理切片则显极强的阳性反应。单克隆抗体经免疫亲和层析分离后，SDS-PAGE凝胶电泳显示抗体的纯度达95％以上，符合单克隆抗体临床应用的标准。免疫电镜研究显示，单抗3A5对靶细胞特异性结合与内化，肝癌细胞内单抗3A5胶体金颗粒簇数为0.89，KB细胞为0.22，相差4倍。肝癌细胞对胶体金颗粒的内化能被预先加入的单抗3A5特异性地封闭。将单抗3A5与平阳霉素进行偶联，用克隆生成法观察偶联物和游离平阳霉素对肿瘤细胞的杀伤作用，按IC50比较，偶联物对靶细胞肝癌细胞的杀伤作用(IC50=7.5×10~(-9)M)比对非靶细胞KB细胞的作用(IC50=7×10~(-7)M)约强100倍。偶联物对靶细胞的作用比游离平阳霉素(IC50=3×10~(-7)M)约强50倍。 单抗3A5用木瓜蛋白酶消化制备得单抗的Fab片段，抗体片段的反应活性略
参考文献：
[1]. 单克隆抗体与博来霉素A_6偶联物治疗肝癌实验研究[D]. 彭泽. 中国协和医科大学. 1989
[2]. 单克隆抗体与博来霉素A6偶联物对肝癌的实验研究[J]. 彭泽, 甄永苏. 药学学报. 1991
[3]. 大鼠单克隆抗体与博来霉素A6偶联物治疗人大肠癌实验研究[J]. 邓甬川, 甄永苏, 郑树, 江敏. 药学学报. 1993
[4]. 大鼠单克隆抗体的制备、鉴定、基因克隆、抗原分析以及药物偶联物的抗肿瘤作用研究[D]. 江敏. 中国协和医科大学. 1996