中南大学湘雅医学院 湖南长沙 410000
蜘蛛丝是蜘蛛吐出后遇到空气即变硬的一种骨蛋白纤维丝，形状精细，质地坚韧，富有弹性。在我国民间，蜘蛛丝作为一种专方药材已有很长的历史，主要用于外伤止血，伤口包扎，具有良好的止血、杀菌消炎的作用。《本草纲目》在虫部第四十卷记载，可“治出血不止，蛛丝散方”，《医心方》第十八卷记载“又方，以蛛蛛膜贴之，血即止”。可见，蜘蛛丝止血，确有其效果。但迄今为止，医学上关于蜘蛛丝的研究多限于其作为手术缝合线的应用，未见有关其促凝止血作用的深入研究报道，因此，就蜘蛛丝促凝止血作用做初步实验观察，以期初步了解其功能机理。
一、材料
1，材料：蜘蛛丝（粉）、蚕丝粉、人体全血、流式离心机。美国Beckmancoulter公司生产的全自动凝血分析仪ACL TOP和美国Becton-Dick-inson（BD）公司生产的FACSCalibur型流式细胞仪。
2，试剂：①美国Beckmancouher公司ACL系列凝血仪配套试剂：凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血酶原时间（Am）、凝血酶时间（TT）、纤维蛋白原（FIB-clauss）测定为凝固法，D-二聚体（D-dimer）~J定为免疫比浊法，抗凝血酶-Ⅲ（AT-m）测定为发色底物法。②美国BD公司生产：血小板激活复合物（PAC）-1为异硫氰酸荧光素（FITC）标记的抗人血小板活化GPⅡb／Ⅲa．CD62p为藻红蛋白（PE）标记的抗人CD62p抗体。CD61 PerCP为Peri-dinin chlorophyll protein（PerCP）标记的血小板糖蛋白酶的单克隆抗体。
3，仪器：显微镜、37?C恒温箱、超净工作台
4，耗材：一次性针头，玻片，
二、实验方法
1，蜘蛛丝粉末的制备：购买蜘蛛丝，去掉其中杂物，以水漂洗，用蒸馏水漂洗数次，放置在捣碎机内充分粉碎，过滤，烘干（40°以下）后加细砂研磨，再加入蒸馏水，静置数分钟后等沉淀聚集，上清液过滤去掉，留下沉淀，风干即得。
2，PT获得：8%构椽酸钠（1：9）抗凝全血30mL，取1mL与等量的固定剂（2mmol/L戊二醛3mmol/L 叠氮钠-PBs，Ph7.4）混合，室温作用30min；余血800r/min离心10min，取上层富含血小板血浆（PRP），以台氏液（138mmol/LNaCl，29mmol/LKCl，0.4mmol/LNaH2PO4，1.8mmon/LCaCl2，12mmol/LNaH2PO4，5.5moml/L葡萄糖，pH7.4）洗涤2次，再以台氏液悬浮，取0.5ml血小板悬液加入终浓度为5微mol/ L LADP（sing），作用5min，同上固定；另取0.5ml血小板悬液加入终浓度为500U/L 凝血酶（Sigma），37?C，不搅拌，作用3min，同上固定，即分别为固定的全血ADP戍凝血酶活化的血小板。
3，分组：取六只相同的洁净试管，编号1-6号，1-3组为第一大组，4-6组为第二大组。按如下表格要求分别向1-6号试管加入不同试剂，混合均匀置于37?C恒温箱中放置。
该图为一号试管刚刚完全凝固时，三只试管的凝血情况。可看出当1号试管完全凝集时，2、3号试管凝集程度低。
在第二大组中，各试管涂片镜下血小板凝集情况为：
4号试管涂片镜下观察到大部分PT凝集成了粒状或块状；
由以上实验结果可知：蜘蛛丝（粉）有显著的凝血止血作用，并且有其独特的（不同于一般蛋白，如蚕丝）促进凝血止血和促进PT的凝集的机制。
四、讨论
1，蜘蛛丝民间用于刀刃止血，包扎伤口，历史悠久。实验显示，由于蜘蛛丝的粘性，只要在血液中加入一小段，就可以加快凝血速度。本实验是对其止血机制的研究，在一定程度上解释了其用于日常止血的原理，同时也提供了一种用于止血的新物质，并且对于扩大其用途，进一步更好得利用这种物质的价值提供了新的思路。
2，蜘蛛丝可用在眼科、神经科等精细手术中。实验显示，蜘蛛丝具有一定的促进伤口痊愈和凝血的功能，将使其在伤口包覆材料方面获得广泛的应用，如脉管伤口修复材料，止血敷料、止血片和缝合线等。蜘蛛丝的软韧性也具有一定的临床价值，可以减少丝线突然断裂的可能性，细小的蜘蛛丝可运用于改善缝合线等，适合于眼科、神经科等精细的手术。
3，蜘蛛丝促凝血功能可从对血小板的激活、在内外源性凝血途径的作用以及在内皮细胞修复（创伤修复）三方面进行探究。蜘蛛丝的成分较简单，已有相关研究人员做了检测。在近几年，美国麻省的国家陆年生活化学指挥中心和加拿大魁北克内克夏生物科技公司从蜘蛛身上抽取止蜘蛛基因转移入山羊体内，让羊奶具有蜘蛛丝蛋白，再利用特殊纺丝程序，将羊奶中的蜘蛛丝蛋白纺成人造蜘蛛丝，也为蜘蛛丝的大规模生产提供了可能性，从而为未来大规模运用于生活、生产，手术中止血带来了良好前景。
参考文献：
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[3]潘志娟，李春萍，盛家镛，等.高性能蛋白质纤维蜘蛛丝的研究与应用（2）［J］.综述与翻译，2004，（11）：44.
[4]美科学家从蜘蛛毒液中提取抗心律失常的药物［J］.国内外科技动态，2001，（2），43.
作者简介：林锦雯：女，1992年9月出生。中南大学湘雅医学院大学本科在读。研究方向：循证医学。
论文作者:林锦雯
论文发表刊物:《健康世界》2015年15期
论文发表时间:2016/5/30
标签：蜘蛛论文; 血小板论文; 试管论文; 凝血论文; 作用论文; 美国论文; 缝合线论文; 《健康世界》2015年15期论文;