（汕头大学医学院第一附属医院 广东汕头 515031）
【摘要】目的：探讨高危HPV E6/E7 mRNA对宫颈病变的临床诊断价值。方法：根据病理诊断结果的不同分为两组，其中低级别宫颈病变组(慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变（CIN)I级）患者共70例为对照组，高级别宫颈病变（包括CINⅡ级、CINⅢ级及宫颈浸润癌）共78例患者为实验组，分别对上述宫颈细胞标本进行HPV DNA分型检测和高危HPV E6/E7 mRNA检测。结果：低级别宫颈病变组中高危HPV DNA的检出率（35.7%)明显高于高危HPVE6/E7 mRNA(14.2%),高级别宫颈病变组中高危HPV E6/E7 mRNA 的检出率（79.5%)明显低于高危HPV DNA(85.7%),差异有统计学意义（P<0.05);高危HPV E6/E7 mRNA检测的特异性、阳性预测值、阴性预测值（85.8%、86.1%、83.5% )均高于 HPV DNA分型检测（64.3%、70.5%、71.4%), 差异有统计学意义（P<0.05)。结论：高危HPV E6/E7 mRNA检测在临床诊断过程中大大降低过度检查和治疗的机会，避免了高频率和重复感染给患者带来的经济负担和精神压力。
【关键词】人乳头瘤状病毒HPV;HPV DNA检测；HPV E6/E7检测；宫颈癌；方法对比
【中图分类号】R730.4 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2016）14-0045-03
宫颈癌是指发生于宫颈阴道部或移行带的鳞状上皮细胞及宫颈管内膜的柱状上皮细胞交界处的恶性肿瘤。世界卫生组织相关统计信息结果显示，乳腺癌和宫颈癌是威胁女性健康的两大疾病，宫颈癌的发生率已跃居我国女性恶性肿瘤的首位，发病趋势呈现年轻化，且发生率逐年上升[1]。对宫颈癌的病因学研究结果发现人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV)是影响宫颈癌发生和发展的主要因素，近年来人们较多的应用HPV DNA检测方法对宫颈病变进行检测，HPV DNA联合细胞学检测越来越多的应用到临床上宫颈病变的筛查工作中，该方法的应用可以有效地降低宫颈癌的发生率，但是HPV DNA检测是一种病因检测，对致癌基因的转录情况及活动情况却无法预测。有研究指出高危HPV E6/E7 mRNA检测能对病毒的活动程度及病变程度进行预测[2]。为了探究其检测效果，本研究拟对高危HPV E6/E7 mRNA的临床诊断价值进行研究，现将研究结果报道如下。
1.对象与方法
1.1 研究对象
选取2015年1月～2015年12月间在汕头大学医学院第一附属医院妇产科就诊的148例患者（多以接触性出血、白带异常、下腹隐痛、阴道异常排液等就诊）作为研究对象，均行宫颈脱落细胞的液基细胞学检查（TCT）HPV DNA分型检测和高危HPV mRNA检测，对其中任意一样阳性者行阴道镜下宫颈活组织检查，并送病理科行组织病理学检查，以病理报告为金标准。根据病理诊断结果分为两组，低级别宫颈病变患者（慢性宫颈炎、CIN Ⅰ级患者）共70例为对照组，高级别宫颈病变患者（包括CIN Ⅱ级、CIN Ⅲ级及宫颈浸润癌）共78例为试验组。患者年龄在20～65岁之间，平均年龄为30.5±2.1岁，两组患者在年龄、病程、病史等方面差异均无统计学意义（P＞0.05)，具有可比性。
1.2 实验方法
TCT检测使用液基细胞学专用取材刷完全插入宫颈口，同一方向旋转3～5周，收集宫颈口及宫颈管的 脱落上皮细胞，并将采集的细胞涮洗在含有细胞保存液的小瓶内，经过制片、固定、染色后由专业病理科医师判读。诊断标准采用国际癌症协会推荐的2001年TBS（The Bethesda System）分级系统。HPV DNA分型检测采用凯普HPV专用宫颈刷，紧贴宫颈口稍用力顺时针旋转5周，放人专用的含有细胞保存液的试管瓶中。使用凯普医用核酸分子杂交仪及其配 套试剂对21种常见的基因型进行分型检测，包括14种高危 型 HPV（16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68），5 种低危型HPV（6、11、42、43、44）和两种中国人常见的亚型 HPV（53、CP8304）。步骤包括样本HPV的DNA提取、PCR扩 增、核酸分子快速导流杂交、结果判读。高危HPV E6/E7 mRNA检测采用TCT剩余标本，试剂盒和仪器均购自河南科蒂亚生物技术有限公司，针对14种高危HPV（16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66和68）检测。主要步骤包括裂解细胞、杂交捕获mRNA、信号放大、底物发光反应，经冷光仪检测为光子数，经Diacarta公司计算机软件计算转换后自动判断结果，最终获得拷贝数，拷贝数＞0为阳性。通过阴道镜下点宫颈组织活检，制成石蜡切片，由专业病理科医师阅片。组织病理诊断分为慢性宫颈炎、CIN Ⅰ级、CINⅡ级、CINⅢ级、宫颈浸润癌。
1.3 统计学方法
利用SPSS 17.0软件对上述数据进行处理分析，其中计量资料采用均数±标准差。对数据进行描述，组间比较采用t检验或非参数检验；计量资料采用率或百分比进行描述，组间比较采用卡方检验；两种检验方法的敏感度、特异性、阳性预测值（positive predictive value，PPV)及阴性预测值（negative predictive value，NPV）比较采用卡方检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2.结果
2.1 两种检测方法在上述患者中的检出率
研究结果发现，在低级别宫颈病变组和高级别宫颈病变 组患者利用高危HPV E6/E7 mRNA进行检测后发现阳性例数分别为10例和62例，其阳性率分别为14.2%和79.5%，利用HPV DNA分型检测发现高危HPV DNA阳性例数分别为25例和60例，其阳性率分别为35.7%和85.7%；所有研究对象中利用高危HPV E6/E7 mRNA检测发现阳性例数为72人，阳性率为48.6%，利用HPV DNA分型检测发现高危HPV DNA阳性例数为85人，阳性率为57.4%。在对两组研究结果进行统计检验后发现，低级别宫颈病变组中高危HPV DNA的检出率（35.7%）明显高于高危 HPV E6/E7 mRNA（14.2%），差异有统计学意义（χ2=5.59，P=0.018）；高级别宫颈病变组中高危HPV E6/E7m mRNA的检出率（79.5%）明显低于高危 HPV DNA（85.7%），差异有统计学意义（χ2=6.12，P=0.031)；高危HPV DNA检测的检出率（57.4%） 高于高危HPV E6/E7 mRNA检测的的检出率（48.6%），但差异无统计学意义(χ2=0.13，P＞0.05)，详见表1。
表1 两种检测方法的检出率对比
2.2 两种检测方法对高级别宫颈病变诊断评价
研究结果发现，高危HPV DNA检测的敏感度（85.7%）高于高危HPV E6/E7 mRNA检测的敏感度（79.5%），统计学检验后发现差异有统计学意义(χ2=6.73，P=0.014），高危HPV DNA检测的特异性（64.3%）低于 高危HPV E6/E7 mRNA检测的特异性（85.8%），差 异有统计学意义（χ2=5.69，P=0.031），高危HPV DNA检测的阳性预测值（70.5%）低于高危HPV E6/ E7 mRNA检测的阳性预测值（86.1%），差异有统计学意义（χ2=6.01，P=0.047），高危HPV DMA检测的阴性预测值（71.4%)低于高危HPV E6/E7 mRNA检测的阴性预测值（83.3%），差异有统计学意义（χ2=5.88，P=0.022），通过上述4个指标研究发现，除敏感度外高危HPV E6/E7 mRNA检测的特异性、阳性预测值、阴性预测值均高于HPV DNA分型检测，可见高危HPV E6/E7 mRNA检测能够较好地诊断宫颈疾病，尤其对于病变程度高的疾病，其诊断价值更高，具体见表2、表3。
表2 两种检测方法的病理诊断结果对比
3.讨论
宫颈癌是妇科常见恶性肿瘤之一，其人群发生率占女性恶性肿瘤的第2位[3]。近年来，发生率和病死率呈上升趋势，据相关资料研究结果显示，世界范围内2011年宫颈癌死亡人数是2000年的1.3倍，发生率呈年轻化趋势，受地区、经济、种族等因素的影响，子宫颈癌的发生率和病死率在不问国家、不间地区存在着明显的差异。HPV是在宫颈细胞中存在的双链闭环的小DNA病毒，内部约含有7900个碱基对，属于嗜上皮性病毒。临床研究发现，HPV病毒根据基因组核酸病毒的不同可以分为不同型别，迄今为止，已发现有150多个HPV亚型，其中40种证明与生殖道上皮层感染有关。HPV早期编码区中E6、E7基因是病毒癌基因一旦出现宫颈病变恶化现象的发生病毒细胞内的E6/E7基因将高度表达，高水平的E6/E7则提示宫颈水平属于高度恶化的水平。而作为E6、E7基因产物的E6/E7 mRNA则反映了癌基因活性，通过检测病毒内高危E6/E7 mRNA水平可以判断HPV感染水平。
综上所述，高危HPV E6/E7 mRNA检测手段作为一种常用的诊断手段，在临床诊断过程中可以结合癌基因的转录活性进行诊断，大大降低过度检查和治疗的机会，避免了因短期内高频率和重复感染给患者带来的经济负担和精神压力。由此可见，高危HPV E6/E7 mRNA检测在临床上具有很广泛的应用价值。
【参考文献】
[1] Wang HY，Lee D，Park S，et al. Diagnostic Performance of HPV E6/E7 mRNA and HPV DNA Assays for the Detection and Screening of Oncogenic Human Papillomavirus Infection among Woman with Cervical Lesions in China[J]. Asian Pac J Cancer Prev. 2015;16(17):7633-40.
[2] Li B，He Y，Han X，et al.Aberrant promoter methylation of SH3GL2 gene in vulvar squamous cell carcinoma correlates with clinicopathological characteristics and HPV infection status[J]. Int J Clin Exp Pathol. 2015 Nov 1;8(11):15442-7.
[3] Basu P，Banerjee D，Mittal S，et al.Sensitivity of APTIMA HPV E6/E7 mRNA test in comparison with hybrid capture 2 HPV DNA test for detection of high risk oncogenic human papillomavirus in 396 biopsy confirmed cervical cancers[J]. J Med Virol. 2016 Jul;88(7):1271-8. doi: 10.1002/jmv.24453.
论文作者:梁海燕,陈晓红,张苏伟
论文发表刊物:《心理医生》2016年14期
论文发表时间:2016/9/27
标签：宫颈论文; 统计学论文; 阳性论文; 宫颈癌论文; 检出论文; 患者论文; 两种论文; 《心理医生》2016年14期论文;