1. 西南医科大学药学院，四川 泸州 646000；2.绵阳市第三人民医院，四川 绵阳 621000
摘要：目的 建立CUMS大鼠抑郁模型，研究尼美舒利对慢性应激大鼠海马CA1区和CA3区5-HT1A的影响。方法 采用慢性不可预见性温和应激建立大鼠抑郁模型，尼美舒利（3、6和12 mg·kg-1）和氟西汀（3mg·kg-1）在造模完成后灌胃给药，每天一次，连续21d。结果 与正常组相比，模型组大鼠水平运动和垂直运动降低（P<0.01），静止不动的时间较正常组增加（P<0.01）。模型组大鼠进入高架十字迷宫进入总次数和开臂次数及停留时间百分率均较正常组减少（P<0.01），模型组大鼠海马神经元细胞丢失和核固缩明显增多，海马CA1区、CA3区5-HT1A表达强度低，阳性颗粒数目少且着色浅淡。
关键词：尼美舒利；抑郁；免疫组化；海马；
抑郁症是一种临床常见的精神障碍性疾病，抑郁症可由多种因素诱发，具体发病机制不明。深入的探讨其发病机制是达到有效治疗的必要途径。单胺类神经递质作用的低下与抑郁症的发病密切相关，有研究发现细胞因子可通过影响突触内单胺递质的浓度及更新，或影响单胺受体的数量及功能，或作用于单胺转运体而引起单胺递质功能下降[1]。而海马是慢性应激反应主要受影响的中枢，是炎性细胞因子作用的重要靶点之一。依据海马细胞形态、不同皮质区发育的差异及纤维排列的不同可将其划分为四个不同区域：CA1、CA2、CA3和DG区域。海马的CAl、CA3区在学习记忆中担负着尤其重要的作用[2-4]。美洛昔康对CUMS诱导的大鼠抑郁行为有明显的改善作用[5]。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1动物、药品与试剂 清洁级♂SD大鼠48只，（180~220g）, 由重庆医科大学实验动物中心提供，正常饮食，实验环境为25℃，光照与黑暗交替各12h，饲养一周以适应实验环境。氟西汀（武汉胜天宇生物科技有限公司）；尼美舒利（湖北键源化工有限公司）；
1.1.2主要仪器 旷场实验行为测试仪，强迫游泳行为测试仪，高架十字迷宫（重庆医科大学药理实验室制），电子天平（德国sartorius），HH型电热恒温水浴锅（上海医疗器械七厂）
1.2 方法
1.2.1 分组与给药 SD大鼠48只，首先用旷场实验做行为学评分，采用随机区组设计，按旷场实验评分随机分为六组,每组8只。1正常组：正常饲养 2尼美舒利低剂量组：抑郁模型+尼美舒利低剂量（3mg·kg-1.d）3尼美舒利中剂量组：抑郁模型+尼美舒利中剂量（6mg·kg-1.d）4尼美舒利高剂量组：抑郁模型+尼美舒利高剂量（12mg·kg-1.d）5阳性对照组：抑郁模型+氟西汀（3mg·kg-1.d）6模型组：21天慢性不可预见性应激制备抑郁模型。造模完成后灌胃给药，连续21天。
1.2.2 慢性温和不可预见性应激模型 以慢性不可预见性的温和刺激结合孤养建立抑郁模型。除正常组外其余各组大鼠，接受21d各种不同刺激，包括禁食24h，禁水24h，4℃冰水游泳5min，潮湿垫料，昼夜颠倒，热刺激（45℃，5min)，45°鼠笼倾斜24h，异味刺激。每天随机选择一种刺激，同种刺激不能连续出现，每种刺激不得超过3次。
1.2.3海马病理形态学观察 大鼠用多聚甲醛灌注后，迅速取出脑组织，置于注满4％多聚甲醛的玻璃瓶中，密封瓶口固定6-8 h，常规石蜡包埋，脑组织冠状切片，厚约5 um。1石蜡切片脱蜡，梯度乙醇水化；2苏木素染色300s后自来水冲洗；3用盐酸乙醇分化半分钟；4自来水浸泡15分钟；5伊红溶液染色120s；6常规脱水，中性树脂封片。7光镜（×400）下观察神经细胞的病理变化。
1.2.4 免疫组化方法检测海马组织5-HT1A蛋白表达的变化 大鼠经多聚甲醛灌注后，取出脑组织，放置于注满4％多聚甲醛的玻璃瓶中，固定6-8h并密封瓶口，常规石蜡包埋，脑组织冠状切片，厚约5um。1石蜡切片常规脱蜡用3％的H2O2孵育5～10分钟，已消除过氧化物酶；2抗原热修复：将PH=6.0的枸橼酸盐缓冲液置放于容器内，并放入水浴锅中，温度达92℃下即开始计时，1200s后自然冷却；3滴加封闭血清室温孵育10～15分钟，甩去石蜡组织切片上多余的液体，不需冲洗；4孵育一抗：按1:50比列稀释抗体，37℃孵育2小时；5孵育二抗：滴加生物素标记的羊抗兔抗体，37℃孵育30分钟；6辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素液，37℃湿盒孵育15分钟；7各部之间PBS冲洗5分钟×3次；8显微镜下控制DAB显色。自来水充分洗涤。苏木素溶液复染，盐酸酒精分化2-3s，中性树脂封固后镜下观察蛋白表达，且拍照、留存。利用Image-Pro Plus6.0进行图像的分析处理，测量阳性表达细胞的平均光密度值。
1.2.5统计学处理 实验数据表示，采用SPSS20统计软件进行分析，用Dunnett’s t进行组间比较。
2 结果
2.1行为学实验结果
根据前期的实验结果显示[7]，21d造模完成以后，与正常组相比，模型组大鼠水平运动和垂直运动降低（P<0.01），静止不动的时间较正常组增加（P<0.01）。模型组大鼠进入高架十字迷宫进入总次数和开臂次数及停留时间百分率均较正常组减少（P<0.01）。说明CUMS致大鼠出现抑郁行为。
2.4抑郁大鼠海马病理形态的变化 正常大鼠海马神经元层次分明，核固缩和细胞丢失较少，模型组大鼠海马神经元细胞丢失和核固缩明显增多，尼美舒利3、6和12mg﹒kg-1组海马神经元损伤明显减轻，氟西汀组海马神经元损伤与模型组有明显差异。见图1
参考文献：
[1]王东林, 林文娟. 细胞因子与抑郁症发病机制研究进展[J]. Chin J Nerv Ment Dis, 2007, 33(9): 572-574.
[2] Chan RH, Song D, Goonawardena AV, et al. Changes of hippocampal CA3-CA1 population nonlinear dynamics across different training sessions in rats performing a memory-dependent task[J]. Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc, 2010, 11(9): 5464-5467.
[3] Guo JY, Li CY, Ruan YP, et al. Chronic treatment with celecoxib reverses chronic unpredictable stress-induced depressive-like behavior via reducing cyclooxygenase-2 expression in rat brain[J]. Eur J Pharmacol, 2009, 612(1-3): 54-60.
[4] 罗文, 马庆阳, 韦丽佳, 等. 美洛昔康对慢性应激大鼠抑郁行为的影响[J]. 中国药理学通报, 2012, 28(1): 123-127.
[5]曹莉莎, 罗文, 王继生, 等. 尼美舒利对慢性应激大鼠抑郁行为的影响[J]. 中国医院药学杂志, 2014, 34（11）: 890-895.
论文作者:李敏1，曹莉莎2，何淼泉2，罗文2，王继生2
论文发表刊物:《中华急诊医学杂志》2016年6月
论文发表时间:2016/12/12
标签：大鼠论文; 模型论文; 抑郁论文; 多聚甲醛论文; 神经元论文; 石蜡论文; 切片论文; 《中华急诊医学杂志》2016年6月论文;