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【摘要】目的：建立RP-HPLC法测定熊去氧胆酸片中熊去氧胆酸含量的方法。方法：使用Kromasil C18色谱柱（150mm×4.6 mm，5μm），以乙腈-0.025mol?L-1磷酸溶液（体积比45:55，用20%氢氧化钠调PH至2.5±0.3）为流动相；流速为1.2mL/min,检测波长为205nm，柱温为30℃。结果：熊去氧胆酸片中熊去氧胆酸及有关物质在测定范围内线性关系良好，测试方法精密度、稳定性、重现性良好（RSD<2%）,平均回收率为98.5%～100.4%。结论：RP-HPLC应用于熊去氧胆酸中熊去氧胆酸及相关物质含量的测定具有简便、灵敏度高、准确性强的优势，能有效控制熊去氧胆酸片的质量。
【关键词】高效液相色谱法；熊去氧胆酸片；胆酸；胆石酸；鹅去氧胆酸
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2017）01-0374-02
熊去氧胆酸是一种亲水性胆汁酸，其化学结构为3a，7β二羟基一5β胆烷酸[1]。熊去氧胆酸片纯品为白色粉末，以酸碱滴定法和薄层法为标准含量测定方法，存在专属性不强、精确度不高的不足。本文拟建立一种熊去氧胆酸片中熊去氧胆酸含量的RP-HPLC方法。
1.仪器与材料
日本岛津LC-10AT型高效液相色谱仪，ANASTR色谱工作站（天津），日本岛津SPD-10A紫外可见检测器，日本Shimadzu公司UV-2450型紫外可见分光光度计，色谱柱为KromasilC18(150mm×4.6mm，5μm。所有对照品均取自中国药品生物制品检定所，熊去氧胆酸（批号：0855-9103），鹅去氧胆酸(批号:121240-312260)、胆酸(批号:221160-312146)、胆石酸(批号:221159-312347)，熊去氧胆酸片（常州制药厂，规格：50mg/片，批号：151201-151203）。实验用乙腈，甲醇为色谱纯，甲醇、磷酸为分析纯，水为重蒸水。
2.方法与结果
2.1 色谱条件及系统适用性实验
色谱柱为Kromasil C18（150mm×4.6mm，5μm）；以乙腈- 0.025mol/L磷酸溶液（体积比45:55，PH2.5±0.3）为流动相；流速1.2mL/min，检测波长205nm，柱温30℃。分别取对照品溶液、空白辅料及熊去氧胆酸片供试品溶液，根据上述色谱条件进行样品分析，理论板数按熊去氧胆酸峰计算应不低于3500，空白辅料不干扰样品测定，熊去氧胆酸及其他组分均分离良好，分离度符合药典要求。
2.2 溶液的制备
2.2.1对照品溶液配置 精密称取适量熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸、胆石酸、胆酸作为对照品，用甲醇溶液溶解并稀释定容。作为对照品贮备液浓度分别为:熊去氧胆酸20mg/mL，鹅去氧胆酸0.2mg/mL，胆石酸0.05mg/mL，胆酸0.3mg/mL，4℃保存。
2.2.2供试品溶液配制 取熊去氧胆酸片样片，粉碎后精密称定500mg置50mL容量瓶中，加甲醇溶解定容，过滤得样品溶液。
2.3 标准曲线的制备
以峰面积（A）及对照品溶液浓度(ρ)进行线性回归分析，得标准曲线回归方程：A =1.572×105C-9.693×103，r=0.9995。表明各组分在测定范围内线性关系良好。
2.4 精密度试验
在上述色谱条件下，精密量取熊去氧胆酸对照品储备液20ul，重复进样5次进行测试。记录峰面积，并计算得出熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸、胆石酸、胆酸峰面积比值的RSD分别为1.16%、1.22%、1.38%和1.59%，表明仪器精密度良好。
2.5 稳定性试验
取供试品溶液于0、2、4、6、8和10h分别进样20uL进行分析，测定得到熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸、胆石酸、胆酸RSD分别为1.09%、1.08%、1.30%和1.21%，说明样品溶液10h内稳定性好，符合分析要求。
2.6 重复性试验
取相同批次样品5份，参照“2.22”进行平行制备并测定，测得熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸、胆石酸、胆酸平均含量分别为9.89%、0.19%、0.01%、0.29%，RSD分别为1.3%、1.6%、0.9%、1.2%（n=5），重现性较好.
2.7 加样回收率试验
精密称取熊去氧胆酸样品3份，精密加入对照品贮备液适量。按照“2.22”色谱条件下进行制备，计算回收率。结果显示4组成分平均回收率为98.5%～100.4%，表明该方法准确可靠。
2.8 样品含量测定
分别取3批熊去氧胆酸片样品，按照“2.22”项方法制备成供试品溶液并测定，计算各组分含量，结果见表。
3.讨论
熊去氧胆酸片的质量控制测试办法文献报道有气相色谱法、HPLC法和TLC法等[2]，本研究结果显示4种物质在205nm检测波长下能产生较好吸收。流动相选择乙腈-0.025mol/L磷酸溶液（体积比45:55 PH2.5±0.3）时基线分离情况良好，取得满意效果，且精密度、稳定性、重现性良好（RSD<2%），平均回收率高。
因此，RP-HPLC具有简便、灵敏度高、准确性强等优点， 能有效控制熊去氧胆酸片的质量，该分析方法值得临床推广。
【参考文献】
[1]金玉，郑长青.RP-HPLC法测定熊去氧胆酸胶囊中熊去氧胆酸及有关物质的含量[J].沈阳药科大学学报，2014，31(4):288-292.
[2]孙文霞，黄毅岚，张丹.RP—HPLC法测定熊去氧胆酸中的有关物质[J].药物分析杂志，2007，27(4):590-592.
论文作者:彭波,朱华艳
论文发表刊物:《医药前沿》2017年1月第1期
论文发表时间:2017/2/8
标签：胆酸论文; 溶液论文; 色谱论文; 样品论文; 含量论文; 精密论文; 批号论文; 《医药前沿》2017年1月第1期论文;