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摘要 目的：建立感清糖浆的HPLC特征指纹图谱分析方法，为全面的质量评价提供依据。方法：采用HPLC法，色谱柱为Diamonsil C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；以乙腈-0.1%磷酸水溶液作为流动相，梯度洗脱：0~30min，10%~20%乙腈；30~50min，20%~25%乙腈；50~80min，25%~35%乙腈；80~120min，35%~85%乙腈；体积流量1.0mL/min；检测波长282nm；进样量10μl。结果：采用《中药色谱特征图谱相似度评价系统2012版》进行分析，建立了感清糖浆HPLC特征指纹图谱的共有模式，指认了芦丁、石吊兰素、金丝桃苷、没食子酸4个特征峰。结论：首次建立了感清糖浆的HPLC对照特征指纹图谱，该方法简单、快速，重复性好，对感清糖浆的整体质量提出了更高的要求，为质量控制和评价标准提供充分的依据。
关键词：感清糖浆；高效液相色谱法；特征指纹图谱；芦丁；石吊兰素；金丝桃苷；没食子酸
【中图分类号】R365【文献标识码】A【文章编号】1001-5213(2016)09-0365-02
应用色谱特征谱控制中药复方制剂的质量，是中药复方制剂走向国际的前提条件[1]。因此，本实验首次建立了感清糖浆的特征指纹图谱方法，初步确定共有峰的归属，保证临床用药的安全有效性。
1仪器与试药
Agilent Technologies 1200 series高效液相色谱仪；HS10260D型超声波清洗仪； YHG.600-BS-II型远红外鼓风干燥箱；RE-52A型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；色谱柱（AlltimaTMC18 、DiamonsilC18）；DiamonsilC18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）。石吊兰素（批号：111555-200602，含量测定用）；没食子酸（批号：110831-200803，含量测定用）芦丁（批号：100080-200707，含量测定用）金丝桃苷（批号：111521-201205，含量测定用)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为Diamonsil C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙睛-0.1%磷酸水，梯度洗脱，洗脱程序为0~30min，10%~20%乙腈；30~50min，20%~25%乙腈；50~80min，25%~35%乙腈；80~120min，35%~85%乙腈；检测波长282nm；流速1.0mL?min-1，进样量10μL；洗脱时间为120min。
2.2 对照品溶液的制备
取芦丁，没食子酸，石吊兰素，金丝桃苷各约0.2mg，精密称定，置5mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.3 供试品溶液的制备
精密量取感清糖浆10ml，加硅藻土5g，拌匀，在60℃烘干，放冷，研细，精密加入100mL甲醇，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液50ml，蒸干，残渣加水25ml 使溶解，用水饱和的正丁醇提取4次，每次25ml，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4 方法学考察
2.4.1 测定时间的确定
精密吸取感清糖浆供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪。，按“2.1”项下色谱条件进行测定，色谱峰显示，保留时间120min后，无色谱峰，故将时间确定120min。
2.4.2 精密度试验
取批号20140902样品，按照“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，连续进样5次，记录特征图谱。将色谱数据导出*.cdf格式文件，并将数据导入国家药典委员会2012年颁布的《中药色谱特征图谱相似度评价系统A版》进行评价（下同），计算得该5次特征图谱的相似度高于0.99，各共有色谱峰相对保留时间的RSD均小于0.09%，相对峰面积的RSD均小于0.72%，说明仪器精密度良好。
2.4.3 稳定性试验
取同一批（20140902）供试品溶液，分别在2h、4h、6h、8h、12h、24h、36h、48h进行测定，记录特征图谱。计算得48h内8次进样所得的特征图谱的相似度高于0.98，各色谱峰相对保留时间的RSD均小于0.08%，相对峰面积的RSD均小于0.64%，表明供试品在48h内较稳定。
2.4.4 重复性试验
取取批号20140902样品，按照“2.3”项下方法制备供试品溶液5份，按“2.1”项下色谱条件进行测定，各进一针，记录特征图谱。计算得5份供试品特征图谱的相似度均高于0.99，各色谱峰相对保留时间的RSD均小于0.06%，相对峰面积的RSD均小于1.10%，表明该方法重现性良好。
2.5 感清糖浆特征指纹图谱的建立
将10批感清糖浆分别按照“2.3”项下方法制备供试品溶液，并按照“2.1”项下色谱条件进样分析，采集色谱图，导入《中药色谱特征图谱相似度评价系统A版》，根据10批次供试品溶液测定结果，共标定15个共有峰，以中位数法生成对照特征图谱，见图1~2。将对照品溶液与样品进行比对，得到4个已知峰（芦丁、石吊兰素、金丝桃苷、没食子酸），11个未知峰，见图1。
3 讨论
本实验首次对感清糖浆建立了特征指纹图谱，摸索出了样品的前处理方法，采用硅藻土惰性材料与感清糖浆液体制剂混合，巧妙地将液体制剂转变成固体进行处理，有效地去除水分的干扰，并采用水饱和的正丁醇作为提取溶剂，充分去除大部分蔗糖辅料的干扰，达到良好除杂的效果，实验过程中找到了适合的色谱条件，并对方法进行了验证。对10批样品的测试，得出感清糖浆的对照特征图谱。且所建立的感清糖浆特征图谱准确度较高、专属性较强、耐受性较好，具备分析方法的可控性、可操作性及可重复性。
采用《中药色谱特征图谱相似度评价系统A版》数据处理，避免了图谱直观分析的主观性对分析结果的影响，可以发现样品生产工艺条件的稳定性以及在选材，提取过程中药材量配比的严格程度。以及同种药材由于产地，采收期的不同，有效成分的含量也会有显著的差别，整个工艺流程中条件控制也会对其质量造成影响。
在相似度考察中发现，不同批次之间的相似度达到了0.93以上，而不同样品与对照特征图谱相似度均达到了0. 93 以上，说明所得对照特征图谱在一定程度上反映出了不同样品间的共性及差异，适用性强，可以为该药品生产工艺标准化起到一定的促进作用。
将处方中药材按照处方比例分别用甲醇超声处理，按上述色谱方法进样，运用《中药色谱特征图谱相似度评价系统 A 版》将所得图谱与对照特征图谱进行比对，初步发现: 1号峰属于马兰草，2号峰属于蓝布正，3 号属于石吊兰，4 号属于木芙蓉叶。共有峰归属的初步确立还为感冒糖浆的综合质量评价提供有益的借鉴和参考依据。
参考文献
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论文作者:龙杰凤1，潘玉杰2
论文发表刊物:《中国医院药学杂志》2016年9月
论文发表时间:2016/11/2
标签：图谱论文; 色谱论文; 特征论文; 糖浆论文; 指纹论文; 溶液论文; 方法论文; 《中国医院药学杂志》2016年9月论文;