（绵竹市人民医院 四川绵竹 618200）
【摘要】目的：探究耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌耐药机制。方法:收集我院分离的肠杆菌科细菌3600株。应用PCR法对其耐药基因IMP、NDM、KPC、VIM、OXA的耐药性检测，同时进行测序，分析基因型别。结果：耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌检出16株，检出率0.44%，细菌对妥布霉素的耐药性为25.67，对阿米卡星的耐药率为3.87，对其他常用的抗菌类药物均呈现出较高耐药性。16株细菌中KPC阳性8株，占50%，IMP阳性8株，占50%，VIM阳性4株，约占25%，OXA阳性1株，约占6.25%。结论：产碳青霉烯酶在细菌分离中，发挥重要的作用，KPC、IMP是主要的基因型，因此，加强对产碳青霉烯酶的监测具有重要的意义。
【关键词】耐碳青霉烯；肠杆菌科细菌；耐药性
【中图分类号】R37 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2017）23-0056-02
【Abstract】Objective To investigate the resistance mechanism of carbapenem resistant Enterobacteriaceae.Method A total of 3600 strains of Enterobacteriaceae isolated from our hospital were collected. The resistance genes of IMP, NDM, KPC, VIM, OXA and PCR were detected by the method of DNA sequencing, and the genotype was analyzed simultaneously.Result Carbapenem resistant Enterobacteriaceae were detected in 16 strains, the detection rate was 0.44%, the bacterial resistance to tobramycin was 25.67, on Amikacin's drug resistance rate was 3.87, of other commonly used antimicrobial drugs showed higher resistance to.16 strains of bacteria KPC were 8 strains, accounting for 50%, 8 strains were IMP positive VIM, accounting for 50%, 4 strains were positive, accounting for about 25% of OXA, 1 strains were positive, accounting for about 6.25%.Conclusion Carbapenems play an important role in the isolation of bacteria. KPC and IMP are the major genotypes. Therefore, it is of great significance to strengthen the monitoring of carbapenems.
【Key words】Carbapenem-resistant;Carbapenem-resistant;Drugresistance
肠杆菌科细菌包括大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌等，可引起呼吸系统感染、泌尿道感染、胆道感染等多种类型的感染，现已成为院内感染的重要条件致病菌。在对产超广谱β－酰胺酶肠杆菌科细菌进行治疗的过程中，碳青霉烯类抗菌药物一直被认为是首选的治疗药物，同时也是对该疾病进行治疗的最后治疗方式。但是由于该药物在临床实践中的广泛应用，使得肠杆菌科细菌对该药物的敏感性逐渐降低，进而导致耐药性的出现。为了对该药物的耐药机制进行较好的掌握，以便为临床合理用药提供可靠的科学依据，本文特就耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的耐药基因展开研究，现阐述如下。
1.资料与方法
1.1 菌株来源
特收集2014年2月-2017年2月，我院临床分离的肠杆菌科细菌3600株，作为此次研究对象。在此实验研究中菌株的细菌鉴定和药敏测试均使用法国梅里埃生物公司生产的全自动细菌分析鉴定和药敏测定系统进行，同时，使用K-B法对细菌的药敏率进行复查。实验研究中，菌株的入选标准完全符合实验当年CLSI所规定的进行。
1.2 PCR扩增与测序
对CRE采用PCR扩增对碳青霉烯酶基因，关于细菌DNA的提取主要使用加热煮沸法进行，关于引物的设计主要依据GenBank中提供序列进行设计，而合成的步骤主要由上海生物工程公司进行。序列表如表1所示。
1.3 PCR反应系统
模板DNA2μl,10×PCR缓冲液（Ｍｇ2＋plus）2μl，2.5mmol/LｄNTP混合物2μl，10μｍ/μl正义和反义引物各1μl，5U/μl,rTaq酶0.3μl，无菌水16.7μl，总体积25μl。
1.4 PCR反应条件
94℃５min，94℃30s，退火温度30s，72℃30s，30个循环，72℃延伸７min。扩增产物经1%琼脂糖（含SYBRGreen）电泳分离，凝胶成像系统成像，观 察 结 果。由上海基康公司ABI3730测序仪测序扩增产 物，所得结果在Gen－Bank网上查询比对。
1.5 统计学处理
研究采用SPSS21.0对数据进行分析，计数资料以n（%）形式表示，组间比较应用卡方检验，若P＜0.05，差异存在统计学意义。
2.结果
2.1 病菌检出率及其病原菌分布情况
此次实验研究中的3600株肠杆菌科细菌中，共检测出耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌16株，临床检出率为0.44%，其中肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的检出率最高。具体数据将以表2的形式进行呈现。
2.3 耐碳青霉烯类肠杆菌可细菌的耐药性分析
耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌对妥布霉素的耐药性为25.67，对阿米卡星的耐药率为3.87，除对上述两种药物的耐药性较低外，对其他的临床常用的抗菌类药物均呈现出了较高的耐药性。
2.4 基因检测结果分析
16株细菌中KPC阳性8株，占50%，IMP阳性8株，占50%，VIM阳性4株，约占25%，OXA阳性1株，约占6.25%。具体数据将以表4的形式进行呈现。
3.讨论
肠杆菌科细菌作为社区和院内感染的重要病原菌，可引起呼吸道、尿路以及菌血症等各种部位的感染。碳青霉烯类抗菌药物对大多数产超广谱β－内酰胺酶和质粒介导的Ampc酶具有较高的稳定性，是目前治疗革兰阴性菌抗菌谱最广，抗菌活性最强的一类抗菌药物。但是随着该类药物大量使用甚至过度治疗，临床耐药现象已在肠杆菌科细菌中开始出现，并呈逐年增加趋势，为患者的临床用药治疗带来了较大的难度。
碳青霉烯类抗菌药物包括亚胺培南、美罗培南以及厄他培南等，自20世纪80年代应用于临床以来，表现出具有良好的抗菌疗效，被认为是治疗革兰阴性杆菌，尤其是肠杆菌科细菌所致的严重感染最有效药物之一。然而，近年来，随着其在临床上的广泛应用，肠杆菌科细菌对其敏感性发生了明显的改变。据美国SENTRY监测结果显示，1998-2004年间美国并未发现CRE菌株。然而，自2005年以后，CRE菌株不仅在美国被检出，而且在法国、南美等多个国家均有其检出的报道。不仅如此，CRE菌株的检出率呈上升的趋势。据国内
CGINET监测结果显示，2005年-2010年间CRE菌株的检出率从0.4%骤升到了8.5%。因此，定期对临床分离的 CRE菌株进行监测对于指导临床合理使用抗菌药物、预防和控制耐药菌株的播散具有十分重要的意义。
在此次实验研究中，通过实验研究所得数据结果可知：3600株肠杆菌科细菌中，共检测出耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌16株，临床检出率为0.44%，其中大肠和肺克的检出率最高；16株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌在痰液标本中分离的最多，其次则依次为脓液、尿液、血液和胆汁；耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌对妥布霉素的耐药性为25.67，对阿米卡星的耐药率为3.87，除对上述两种药物的耐药性较低外，对其他的临床常用的抗菌类药物均呈现出了较高的耐药性。22株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌中KPC阳性11株，约占50%，IMP阳性11株，约占50%，VIM阳性6株，约占27.27%，OXA阳性2株，约占9%。这一结论与我国报道有所不同，也与国外研究报道不同，这可能与地区不同和菌株来源不同有关。本研究还发现多耐药基因携带状况严重。
对≥３类化学结构不同的抗菌药物耐药的细菌为多药耐药菌株。从药敏试验结果分析，16株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌对大多数常用菌药物耐药率均高，均为多药耐药菌株。其中对氨苄西林和头孢唑林耐药率为100％，因此治疗时首先应避免使用该类药物。碳青霉烯类菌药物中，对亚胺培南耐药率最高为，这与医院临床习惯使用该药治疗有关。对阿米卡星耐药率最低，这可能与该药具有较强耳毒性和肾毒性临床应用较少有关，但其低耐药率也提示临床对于耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌感染棘手患者可考虑使用。
综上所述，在对耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌进行分离的过程中，产碳青霉烯酶发挥重要的作用，且KPC、IMP是主要的基因型，加强对产碳青霉烯酶的监测具有重要的意义和作用。因此，耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的感染将是我们面临的一个严重棘手的问题，通过对耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的耐药基因检测可了解耐药现状以及存在的机制，更有效的控制耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌引起的感染暴发和流行。
【参考文献】
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论文作者:熊樱
论文发表刊物:《心理医生》2017年23期
论文发表时间:2017/9/11
标签：杆菌论文; 细菌论文; 菌株论文; 阳性论文; 药物论文; 检出论文; 耐药性论文; 《心理医生》2017年23期论文;