顾爱国[1]2004年在《苦皮藤内生真菌农用活性成分的研究》文中研究指明本论文以一株编号为 2B 的苦皮藤内生真菌为出发菌株，应用形态学的方法鉴定了其种属地位；研究了其代谢产物的农用生物活性，并对目标活性物质进行分离和结构解析，采取诱变育种手段选育了高产菌株，并对高产菌株的发酵条件进行了优化。通过试验结果的分析和讨论，取得了以下结论： 1 根据真菌的分类及鉴定方法，用光学显微镜观察 2B 菌株气生菌丝、大型分生孢子、小型分生孢子及菌落性状，对比相关分类系统，将 2B 菌株鉴定为层出镰刀菌(Fusarium proliferatum)。 2 在对 2B 菌株发酵产物生物活性研究中，发现 2B 菌株发酵产物甲醇提取物有明显的抑菌活性，在 1000 μg·mL-1浓度下对番茄早疫病菌（Alternaria solani）、烟草赤星病菌（Alternaria alternata）、小麦根腐病菌（Bipolaris sorokiniana）、玉米大斑病菌（Exserohilum turcicum）4 种供试菌的菌丝生长和孢子萌发抑制率均大于 80%；在盆栽试验中，对黄瓜霜霉病菌（Pseudoperonospora cubensis）的治疗和保护作用均在 70%以上。 3 采用常压柱层析、HPLC 制备等方法，在生物活性追踪指引下，从 2B 菌株发酵产物分离出 4 个化合物 2B-1，2B-2，2B-3，2B-4。经波谱技术( IR，1H NMR，13C NMR，COSY，MS)，结合化学检验方法，并与相关文献对比，将分离得到的化合物分别鉴定为 enniatin B，enniatin B1，enniatinA1，ergosterin。化合物 2B-1，2B-2，2B-3 在 100μg·mL-1浓度下，对玉米大斑病原菌菌丝生长抑制率分别为 68.18%，87.49%，90.91%。 4 建立了恩镰孢菌素（enniatins）的 HPLC 检测方法。检测条件为色谱柱 (C18 柱，0.9×30cm,10μm)；流动相(V∶V)甲醇∶水(88∶12)；流速 1 mL·min-1；检测波长UV229nm；室温下 5μL 进样，该方法相对标准偏差 RSD< 1%，平均回收率在 98%以上。 5 采用紫外线（UV）,甲基磺酸乙酯（EMS），超声波+UV + EMS 3 种诱变方式进行复合诱变，同时结合形态变异与产量之间的相关关系，挑选形态差异明显的单菌落，然后通过摇瓶发酵筛选 enniatins 高产菌株，通过 3 轮诱变筛选大幅度提高了菌种的生产能力，最后得到的突变株 UE152 代谢 enniatinns 总产量为 59.72 mg·100mL-1，是出发菌株摇瓶效价 2.9 倍，且该突变株的高产遗传特性稳定。 6 通过单因子试验和多因子正交试验筛选获得 UE152 菌株最佳的摇瓶培养基配方和发酵条件为葡萄糖 2%、土豆 20%、蛋白胨 0.5%、NH4Cl 0.3%、MgS040.1%和 CaCO30.1%，培养温度 26℃，接种量 10 块菌饼（每 50 mL 发酵液），初始 pH 值为 6.0~7.0，装液量 50 mL（每 250 mL 叁角瓶），转速 160rpm，发酵时间 120h。在上述实验条件下enniatinns 总产量可达 88.68 mg·100mL-1，从正交试验结果分析当中看出，如果适当增加通气量，产量可望更高。
兰琪[2]2002年在《苦皮藤内生真菌中杀虫杀菌活性物质的初步研究》文中进行了进一步梳理植物内生真菌(Plant endophytic fungi)是在植物寄主中度过全部或近乎全部生活周期而不使寄主表现任何症状的一类真菌。作者于2000年9月至2002年6月对杀虫植物苦皮藤(Celastrus angulatus)中内生真菌的杀虫杀菌活性物质进行了初步的研究，取得了以下结果： 采用常规的内生真菌分离方法，以马铃薯葡萄糖培养基、Czapek培养基为分离用培养基，从苦皮藤根和侧枝的表皮、韧皮部和木质部中分离得到39株内生真菌。 以粘虫为供试昆虫，在500μg／ml的浓度下测定了39株内生真菌发酵产物粗提物的胃毒和触杀活性。结果表明，1B菌株菌丝体的丙酮提取物对3龄粘虫有毒杀作用，24h后的死亡率为85.3％。 以番茄灰霉病菌(Botrytis cintrea)、小麦赤霉病菌(Gibberella zeae)、苹果炭疽病菌(Glomerella cingulata)、玉米小斑病菌(Bipolaris maydis)和辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsici)为供试菌种，在500μg／ml的浓度下，采用抑制菌丝生长速率法对39株内生真菌发酵产物进行了杀菌活性筛选，发现1L、2B和5J 3菌株的发酵产物丙酮粗提物均对供试病原菌有不同程度的杀菌活性。盆栽试验结果表明，在500μg／ml的浓度下，3菌株的丙酮粗提物对小麦白粉病的治疗和保护作用均在60％以上，1L和2B 2菌株的丙酮粗提物对黄瓜霜霉病的治疗和保护作用均在50％以上。 在活性追踪指引下，采用Pre-TLC技术，从IB菌株菌丝体的丙酮粗提物中分离到1个杀虫活性物质1B-4，采用红外光谱和核磁共振波谱技术初步鉴定为一类羟基取代的长链脂肪酸类化合物，可能为两个异构体的混合物。 在活性追踪指引下，采用常压柱层析、HPLC制备等技术，从1L菌株发酵产物的丙酮提取物中分离到3个结晶1L-3、1L-6和1L-8，其中1L-6杀菌活性最强，在500μg／ml浓度时，抑制番茄灰霉病菌的菌丝生长达92.7％。 采用菌落观察和孢子观察相结合的真菌分类方法，对1I、2B和5I叁株内生真菌进行了菌株鉴定，初步判断1I为Rhynchosporium sp.喙孢霉属，2B为Fusarium prolifenafum.镰刀菌属，5I为Pestalotiopsis sp拟盘多毛孢属。
邹强[3]2007年在《苦皮藤内生真菌As菌株农药活性成分初步研究》文中研究指明本论文以一株编号为As的苦皮藤内生真菌为出发菌株,研究了其代谢产物对12种作物病原真菌的离体活性以及盆栽防治小麦白粉病的效果;应用形态学的方法鉴定了其种属地位;从菌丝体提取物中分离得到叁个化合物,测定了其对几种作物病原真菌的抑菌活性,并对化合物Z02的结构进行了初步研究;采用正交试验法对As菌株的发酵条件进行了优化。通过对试验结果的分析和讨论,取得了以下结论:1生物测定结果表明,As菌株发酵产物中菌丝体的甲醇和乙酸乙酯提取物对多种植物病原真菌具有明显的抑菌活性,其中甲醇提取物的抑菌活性较乙酸乙酯强。甲醇提取物在4000μg·mL-1浓度下对苹果腐烂病菌和番茄灰霉病菌的菌丝生长抑制率均大于80%;在浓度为5000μg·mL-1时对玉米弯孢叶斑病菌、马铃薯干腐病菌和烟草赤星病菌孢子萌发的抑制率均超过80%。盆栽试验结果表明,As菌株发酵菌丝体的甲醇提取物在4000μg·mL-1浓度下对小麦白粉病的治疗和保护作用均在65%以上。2根据As菌株气生菌丝、大型分生孢子、小型分生孢子及菌落性状,对比相关分类系统,将As菌株初步鉴定为半知菌亚门尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)。3采用硅胶柱层析、反相HPLC制备等方法,在生物活性追踪指引下,从As菌株代谢产物菌丝体甲醇提取物中分离出3个化合物Z01、Z02、Z03。采用UV,1H NMR,13C NMR,MS等技术对化合物Z02的结构进行了研究,但其结构尚无法确定;化合物Z01、Z03由于没有合适的溶剂,因此相关的波谱测试无法进行。3个化合物的生测结果表明,在200μg·mL-1浓度下,Z01没有明显的抑制孢子萌发活性,而Z02、Z03有明显的抑制孢子萌发活性,其中Z02抑菌活性最强,抑制玉米弯孢叶斑病菌孢子萌发的EC50仅为86.63μg·mL-1。4通过单因子试验和多因子正交试验对As菌株的培养基配方和发酵条件进行了优化。最佳培养基配方为:葡萄糖2%、土豆20%、蛋白胨0.5%、0.1%K2HPO4和0.1% MgSO4。最佳发酵条件为:初始pH值为6.0~7.0,种龄96h,接种量5块菌饼(每100 mL发酵液),培养温度26℃,发酵时间168h,装液量100mL(每250 mL叁角瓶),转速180rpm。
杨春平[4]2005年在《从苦皮藤内生菌中筛选农用抗生素的研究》文中研究表明植物内生菌是在植物体内度过全部或近乎全部生活周期而不使寄主表现任何症状的微生物,是一类相对较新的类群。已从一些植物中分离到了能代谢农用活性物质的内生菌。本研究的目的是分离苦皮藤内生真菌和内生放线菌,并对其代谢产物的农用活性进行筛选,然后对菌株活性成分进行分离和鉴定。主要结果如下:1.采用组织块法和匀浆法,以马铃薯葡萄糖培养基、苦皮藤煎汁培养基为内生真菌分离用培养基,高氏一号培养基、牛肉膏蛋白胨培养基为内生放线菌分离用培养基,从苦皮藤根和茎的表皮、韧皮部和木质部中分离得到81株内生菌,其中内生真菌68株,内生放线菌13株。2.从81株内生菌中,筛选到一株产生杀虫活性成分的菌株Hd3和5株产抗菌物质的菌株A10、2C2、a4、a5和c4。Hd3菌株菌丝体的乙酸乙酯提取物5%的丙酮溶液对3龄粘虫的胃毒致死率为100%。菌株A10、2C2、a4、a5和c4发酵产物对小麦赤霉病菌、玉米大斑病菌、番茄灰霉病菌、苹果炭疽病菌、烟草赤星病菌、番茄早疫病菌和小麦纹枯病菌的菌丝生长有不同程度的抑菌活性。盆栽实验结果表明,5株菌株的代谢产物对小麦白粉病菌的保护作用均在65%以上,a4和c4 2菌株的发酵液原液对黄瓜霜霉病菌的保护作用达到60%。3.在活性追踪指引下,采用TLC和HPLC技术,从Hd3菌株菌丝体的乙酸乙酯粗提物中分离到2个杀虫活性物质H4.5和H4.6。其中H4.5的结构为2,3-二甲氧基-5-甲基苯酚,为首次从微生物中分离得到的化合物,并首次发现该化合物具有杀虫活性,对3龄粘虫的LD50为3.78μg/头(胃毒)。根据真菌的分类及鉴定方法,对比相关分类系统,将Hd3菌株鉴定为曲霉属环绕亚属真菌。
钱勇[5]2006年在《苦皮藤内生真菌A10杀菌活性成分研究》文中研究说明本论文以一株编号为A10的苦皮藤内生真菌为出发菌株,研究了其代谢产物的农用生物活性,对目标活性物质进行分离和结构解析,并对菌株进行了初步的鉴定,观察了添加物质对代谢产物的影响。主要结果如下:1对A10代谢产物进行了杀菌活性研究。生物测定结果表明,A10菌株发酵产物菌丝体的甲醇和乙酸乙酯提取物对多种病原真菌具有较强的杀菌活性。其中乙酸乙酯提取物的杀菌活性较甲醇好,在1000μg·mL~(-1)浓度下对烟草赤星病菌、小麦根腐病菌、玉米大斑病菌、番茄灰霉病菌、苹果轮纹病菌的菌丝生长抑制率均大于90%。盆栽试验结果表明,A10菌株发酵产物菌丝体的乙酸乙酯提取物在2000μg·mL~(-1)浓度下对小麦白粉病的治疗和保护作用均在70%以上。2根据真菌的分类及鉴定方法,用光学显微镜观察A10菌株气生菌丝、分生孢子、产孢细胞及菌落性状,对比相关分类系统,将A10菌株初步鉴定为卵形孢霉属(Oosporawallr)。3采用常压柱层析、HPLC制备等方法,在生物活性追踪指引下,从A10菌株代谢产物菌丝体提取物中分离出5个化合物QY01、QY02、QY03、QY04、QY05。经波谱技术鉴定QY01、QY04、QY05分别为细胞松弛素D ,麦角甾醇,卫矛醇,QY02和QY03由于含量低于5mg未作进一步的鉴定,但结合光谱分析,可断定它们和QY01为同系物。在100μg·mL-1浓度时,QY01、QY02、QY03对烟草赤星病菌的活性比较高,达到50%以上。因此,我们可以初步推断,A10菌株代谢产物的抑菌活性主要是由这3个化合物贡献的,其中以QY01的活性最高,它对烟草赤星病菌的EC50为35.01μg·mL~(-1)。4比较溴化乙锭和2-氨基吡啶两种添加物质在不同的浓度下对A10菌株代谢产物的影响,结果表明,在添加物质为溴化乙锭,添加浓度为0.4×10-6mg·mL~(-1)时,A10菌株代谢的生物量和代谢产物细胞松弛素D均比未添加的原始培养液下的含量有明显的增加,且随着添加浓度的增大,含量均明显上升。而添加2-氨基苯胺的处理,在添加浓度为0.01 mg·mL~(-1)时,A10菌株代谢的生物量和代谢产物细胞松弛素D均比原始的发酵培养基的低,且随着所添加浓度的增加,生物量和代谢产物细胞松弛素D的含量显着的减少。
武金占[6]2007年在《苦皮藤内生真菌筛选及其代谢产物的农药活性研究》文中进行了进一步梳理植物内生真菌一般是指生活在植物组织体内的一类并不引起明显病害症状的真菌,它是一个庞大的特殊真菌类群,几乎所有的植物组织中都发现有内生真菌的存在[1]。由于真菌与植物之间长期的相互作用和共同进化,其代谢产物十分丰富,对其内生真菌的研究将有利于我国微生物资源的开发和珍稀植物资源的保护。本文以卫矛科植物苦皮藤为研究对象,研究其内生真菌的抑菌杀虫活性,并对菌株活性成分进行分离和鉴定。主要结果如下:1.采用组织块法,以马铃薯-葡萄糖培养基为内生真菌分离用培养基,从苦皮藤根和茎中分离得到56株内生真菌。筛选出5株产抗菌物质的菌株2K3, 2KR6, 2KR7, 1KM8和1KR8。这五株菌株的发酵产物对番茄灰霉病菌(Botrytis cirerea)、烟草赤星病菌(Alternaria alternate)、小麦赤霉病菌(Gibberella zeae)、玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum)、苹果炭疽病菌(Glomerella cingulata)和马铃薯干腐病菌(Fusarium coeruleum)的菌丝生长有不同程度的抑菌作用。2.2K3菌株发酵产物的甲醇提取物有明显的抑菌作用,在1000μg·mL-1浓度下对番茄灰霉病菌、烟草赤星病菌、小麦赤霉病菌、玉米大斑病菌、苹果炭疽病菌和马铃薯干腐病菌等病原菌的菌丝生长抑制率均大于85%;盆栽试验结果表明,2000μg·mL-1的2K3菌株发酵产物的甲醇提取物对小麦白粉病菌(Erysiphe graminis)的治疗和保护作用均在70%以上。3.通过单因子试验对2K3菌株培养条件进行了优化。结果表明:培养温度26℃,接种量15块直径5mm菌饼(每瓶100 mL发酵液),初始pH值为7.0左右,转速180rpm,发酵时间240h,对2K3菌株抑菌活性最为有利。4.根据真菌的分类及鉴定方法,对比相关分类系统,将2K3菌株鉴定为镰孢菌属(Fusarium)真菌。
顾爱国, 吴文君, 高巍, 张晓强[7]2007年在《苦皮藤内生真菌2B菌株代谢产物农用生物活性研究》文中研究指明从新鲜苦皮藤植株中分离得到1株内生真菌,编号为2B。对2B菌株发酵产物生物活性的研究发现,2B菌株发酵产物甲醇提取物有明显的抑菌活性,在1 000 mg/L浓度下对番茄早疫病菌(Alternaria solani)、烟草赤星病菌(Alternaria alternata)、小麦根腐病菌(Bipolaris sorokiniana)、玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum)等4种供试菌的菌丝生长和孢子萌发抑制率均大于80%;在盆栽试验中,对黄瓜霜霉病菌(Pseudoperonospora cubensis)的治疗和保护作用均在70%以上。采用常压柱层析、HPLC制备等方法,在生物活性追踪指引下,从2B菌株发酵产物中分离出4个化合物2B-1、2B-2、2B-3、2B-4。化合物2B-1、2B-2、2B-3在100 mg/L浓度下,对玉米大斑病菌菌丝生长抑制率分别为68.18%、87.49%、90.91%。
杨春平[8]2008年在《卫矛科植物内生菌的分离及其农药生物活性研究》文中提出植物内生菌作为筛选农用抗生素的一类资源微生物，在农药的研究与开发中越来越受到重视。为了开发卫矛科植物内生菌资源，以期发现新的具有农药研究价值的微生物，本论文对4种卫矛科植物内生菌进行了研究，主要涉及菌种的分离、筛选、菌株鉴定、菌株诱变选育、代谢产物活性及活性成分分离以及发酵条件优化等的研究，取得了如下结果：(1)分别采用组织块培养法和匀浆法从4种新鲜卫矛科植物中分离到161株内生真菌和28株内生放线菌，通过杀虫活性、抑菌活性及遗传稳定性实验，从中筛选到能产生抑菌活性成分的内生真菌3株(Hd3、2QR1和1F8)和内生放线菌4株(a4、a5、c4和YDG17)。其中，菌株Hd3和2QR1的代谢产物也具有杀虫活性。(2)利用引入链霉素耐药性，分别对5株无抑菌活性和1株弱抑菌活性的卫矛科植物内生放线菌进行诱突，共获得链霉素变异株301株。对301株变异菌株发酵产物以枯草芽孢杆菌为指示菌进行活性筛选，获得具有显着抑菌活性且遗传稳定的突变株2株，即YDG05-44和YDG09-32。室内生物测定结果表明，YDG05-44和YDG09-32菌株的发酵产物对其它几种细菌及植物病原真菌也具有显着的抑菌活性。(3)对YDG17、YDG09-32和Hd3菌株的发酵条件进行了优化研究，确定了最佳培养基组成及培养条件。响应面分析及正交实验结果表明，YDG17菌株发酵的摇瓶培养基配方为：葡萄糖32．00 g／L，小米28．77 g／L，蛋白胨3．00 g／L。发酵条件为：pH 7，250mL叁角瓶装60mL发酵液，接入6×10~7cfu／mL菌量，32℃培养120h。YDG09-32菌株发酵的摇瓶培养基配方为：乳糖21．06 g／L，小米20．82 g／L，牛肉膏4．72 g／L，MgSO_4·7H_2O 0．38g／L。发酵条件为：pH 7～9，250mL叁角瓶装80mL发酵液，接入6×10~6cfu／mL菌量，29℃培养96h。Hd3菌株的摇瓶培养基配方为：葡萄糖24．71g／L，MgSO_4·7H_2O 1．08 g／L，土豆244．17 g／L。发酵条件为：pH 6～7，250mL叁角瓶装90mL发酵液，接入9×10~3cfu／mL菌量，31℃培养9d。(4)研究了YDG17菌株的代谢产物。室内生测结果表明，YDG17菌株的发酵液对几种供试细菌和病原真菌均有一定的抑制作用。对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtills)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichis coli)、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)的抑菌圈直径分别为27．0，27．0，15．3，11．3，14．0mm。对小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)、番茄早疫病菌(Alternaria solani)、西瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporum f．sp．niveum)和桃腐烂病菌(Cytospora leucostoma)抑制菌丝生长的EC_(50)(以发酵液中的干物质计)值分别为259．98、336．13、100．72、470．11和198．58mg／L；对小麦赤霉病菌(F．graminearum)、西瓜枯萎病菌(F．oxysporum f．sp．niveum)和番茄灰霉病菌(B．cinerea)抑制孢子萌发的EC_(50)值为分别为151．67、220．69和87．84mg／L。离体子叶法测定结果表明，发酵液原液对番茄灰霉病的保护效果为97．62％，治疗效果为79．63％。盆栽试验结果表明，发酵液原液对番茄灰霉病的保护效果为71．34％，治疗效果为64．23％。通过捷克八溶剂系统纸色谱测定YDG17菌株发酵液中主要活性成分为碱性水溶性抗生素。采用离子交换法，通过抑菌活性追踪法，分离得到YDG17菌株发酵液的主要抑菌活性组分YA，ESI-MS／MS对YA化学成分进行分析，结果表明YA中的主要活性成分为链丝菌素类化合物，通过MS／MS谱图和母离子碎片峰信息，以及与标准化合物谱图进行对比，鉴定其中5个化合物为N-乙酰化链丝菌素D、N-乙酰化链丝菌素C、链丝菌素D、链里定酸-链丝菌素E和链丝菌素F。(5)研究了YDG09-32菌株的代谢产物。离体活性测定结果表明，YDG09-32菌株的发酵滤液和菌丝体中均有含有抑菌活性成分，不仅对供试细菌有一定的抑制作用，同时对小麦赤霉病菌(F．graminearum)、玉米弯孢菌(Curvularia lunta)、番茄灰霉病菌(B．cinerea)和苹果炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)等植物病原真菌有较强的抑制活性。通过Doskocilova八溶剂系统分析，判断YDGA09-32菌株发酵滤液和菌丝体提取物中的抑菌活性成分为同一类物质，即放线菌素类抗生素。YDG09-32菌株代谢的抑菌活性成分对光、热、酸和碱均有较好的稳定性。发酵产物在pH 5～11之间处理3h，或在90℃处理30min以及日光照射10d后，对抑菌活性均无明显影响。采用大孔吸附树脂吸附、硅胶柱层析及薄层制备等技术对YDG093-32菌株发酵滤液中抑菌成分进行分离纯化，得到Bh1～Bh7 7个组分，生测结果表明，仅组分Bh1、Bh5和Bh6对枯草芽孢杆菌具有较好的抑菌活性。Bh1～Bh7组分由于纯度不够，未能进行结构鉴定。(6)研究了Hd3菌株的代谢产物。分别对Hd3菌株菌丝体甲醇、乙酸乙酯和石油醚提取物及发酵滤液乙酸乙酯萃提物进行了杀虫、抑菌活性研究。结果表明，Hd3菌株的杀虫活性物质主要存在于菌丝体乙酸乙酯提取物中，在1000mg／L时，对粘虫3龄幼虫的24h死亡率为100％；抑菌活性物质主要在发酵液中，其乙酸乙酯萃取物对小麦根腐病菌(Bipolaris sorokiniana)、苹果炭疽病菌(C．gloeosporioides)、小麦赤霉病菌(F．graminearum)、番茄灰霉病菌(B．cinerea)、棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum f．sp．vasinfectum)和玉米弯孢菌(C．lunta)抑制菌丝生长的EC_(50)值分别为77．7，74．9、75．6、138．3、166．0和130．9 mg／L，对棉花枯萎病菌(F．oxysporumf．sp．vasinfectum)、番茄灰霉病菌(B．cinerea)、小麦根腐病菌(B．sorokiniana)和玉米弯孢菌(C．lunta)抑制孢子萌发EC_(50)值分别为184．4，102．8，154．5和79．7mg／L；盆栽试验结果表明，Hd3菌株发酵滤液乙酸乙酯萃取物在浓度为2000mg／L时，对小麦白粉病的保护和治疗效果分别为61．9％和81．6％。对Hd3菌株菌丝体乙酸乙酯提取物中的杀虫活性成分进行分离，得到一个纯化合物H4．5，经波谱分析，鉴定为2，3-二甲氧基-5-甲基苯酚，该化合物对3龄粘虫(平均体重3．75mg)的LD_(50)为3．78μg／头。通过活性追踪，采用硅胶柱层析、HPLC制备对菌株发酵滤液乙酸乙酯萃提物中抑菌活性成分进行分离，得到H03～H09，H20 8个化合物，生测结果表明，化合物H03、H04、H20具有较强的抑菌活性。经波谱分析，化合物H03、H04、H05、H07、H08和H20分别鉴定为geodin、chlorotrypacidin、methyl asterrate、methyl dichloroasterrate、methyl chloroasterrate和asterric acid，均为首次从内生黄柄曲霉代谢物中分离到的化合物。(7)通过对YDG17、YDG09和Hd3菌株形态学及分子生物学鉴定，确定Hd3菌株为曲霉属真菌：YDG09和YDG17菌株均为链霉菌属放线菌。YDG17菌株与菌株S．vinaceusdrappuss的16SrDNA同源性为99％，同时，菌株在形态特征、培养特征、生理生化特征等方面与模式菌株也比较相似。因此，将YDG17菌株鉴定为Streptomyces vinaceusdrappuss。YDG09菌株与模式菌株S．rubrolavendulae的16SrDNA同源性为99％。除了YDG09菌株不利用阿拉伯糖、甘露醇而利用鼠李糖及在克氏一号培养基上难于生长与S．rubrolavendulae菌株存在差异外，在生理生化及形态特征上两株菌均相似。因此，建议将YDG09菌株定为S．rubrolavendulae菌株的一个变种(Streptomycesrubrola vendulae var euonymus)。Hd3菌株与模式菌株Aspergillus flavipes的ITS区序列同源性为100％，在形态特征等方面两株菌也相似，因此，鉴定Hd3菌株为黄柄曲霉Aspergillus flavipes。
韩江涛[9]2008年在《冬青卫矛内生真菌筛选及其代谢产物的农药活性研究》文中认为植物内生真菌能够产生结构新颖、功能特殊的次生代谢产物,是新活性化合物的潜在资源,在农业医药行业中具有重要的应用前景。本研究对冬青内生真菌进行分离并对其次生代谢产物进行了农用活性筛选。主要研究结果如下:1.采用组织培养法从冬青卫矛(Euonymus japonicus)中分离到49株植物内生真菌,经初筛和复筛,筛选出一株具有杀菌活性的菌株M-1。2.对M-1菌株发酵液进行了杀菌活性研究。M-1菌株发酵液对番茄早疫病菌( Alernaria solani )、西瓜枯萎病菌( Fusarium oxysporium )和苹果炭疽病菌(Colletotrichum gloesporioides)菌丝生长抑制率达到80.3%、78.5%和87.8%。M-1菌株发酵液对枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌圈直径分别为23.0mm、20.0mm、16.0mm和20.0mm。M-1发酵液的乙酸乙酯萃取物对苹果炭疽病菌的毒力最高, IC_(50)值为63.6μg/mL。Doskochilova溶剂系统鉴定表明M-1菌株的发酵液中含有硫藤黄菌素类抗生素。3.通过单因子实验获得了冬青卫矛内生真菌菌株M-1摇瓶发酵的最佳培养条件。最佳培养基配方和发酵条件为20%胡萝卜、2%葡萄糖、0.4%酵母粉、0.2% MgSO_4和0.2% ZnSO_4,培养温度26℃,接种量:每100 mL发酵液18块菌饼,装液量为110/250mL,初始pH为7.5左右,发酵时间240h。4.根据真菌的分类及鉴定方法,对比相关分类系统,将M-1菌株初步鉴定为半知菌亚门,链格孢属(Alternaria)真菌。
刘正琼[10]2012年在《鱼腥草内生真菌分离及其抑菌活性研究》文中进行了进一步梳理植物内生真菌是指存在于健康植株组织内,对宿主不造成明显病症的一类真菌。内生真菌与宿主植物之间是互惠互利内共生的关系,其产生的次级代谢产物能够直接或间接的促进植物的生长和提高宿主的抗逆性。大量研究还表明,很多植物内生真菌也具有抗病原真菌的能力,在生物防治方面有一定的作用。本文以鱼腥草内生真菌为研究对象,对其内生真菌在鱼腥草不同器官分布情况进行了调查,对内生真菌的抑菌活性进行了筛选,并对抑菌活性较高的目标菌株进行了形态与分子鉴定和培养条件的研究。主要结果如下：1、对叁份不同鱼腥草材料W01-100、W01-94和W01-86分秋(2009年10月)、春(2010年3月)两次分别进行采样,采用组织块分离法对各材料叶片、地上茎和地下茎3个不同部位进行了内生真菌的分离,共获得了127株内生真菌。2、内生真菌在鱼腥草不同部位的数量分布趋势为：叶片>地上茎>地下茎。叁份材料中,W01-100中共分离出43株内生真菌,占总数的33.86%；W01-86共分离出50株内生真菌,占总数的39.37%；W01-94共分离出34株内生真菌,占总数的26.77%。春季所采样品中分离的内生真菌占总数的34.65%；秋季所采样品中分离出内生真菌占65.35%。3、通过平板拮抗试验,鱼腥草内生真菌对5种植物病原菌(小麦赤霉病、马铃薯早疫病菌、辣椒疫霉病、西瓜枯萎病菌和核盘菌)有不同程度的抑制作用,能够同时对3个以上病原菌的抑制率达到40%以上的有26个。采用菌丝生长速率法测定这26个内生真菌的抑制活性,最后筛选出12,28,A5菌株为抑制活性较强内生真菌。4、结合形态鉴定和分子鉴定两种方法,认为12号菌株为拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis)的小孢拟盘多毛孢(pestalotiopsis microspord);28号菌株为毛壳菌属(Chaetomium)的球毛壳菌(Chaetomium globosum);菌株A5为镰刀菌属(Fusarium)的(Fusarium nematophilum)。5、以西瓜枯萎病为指示病原菌,对28号菌株的抑菌物质热稳定性和发酵条件进行了研究,结果发现28号菌株发酵液中的抑菌物质在80℃以下能够保持很好的热稳定性。在培养基A中培养后,28号菌株的菌丝生长量最大；在马丁氏培养基中培养后,抑菌活性最大。发酵培养基初始pH值为6.9时为其菌丝生长较佳pH值；初始pH为7.5时,抑菌物质积累最多。250m1叁角瓶装150m1的培养基中发酵4天时,其菌丝量和抑菌活性最大,但在发酵8天以后,抑菌活性则逐渐下降。28号菌株发酵液对另外10种植物病原菌也均有很好抑制作用,尤其对玉米大斑病、莴苣灰霉病、草莓灰霉病的抑制率甚至高达100%,说明28号菌的发酵液有良好的广谱抑菌作用,有进一步深入研究和开发利用价值。
参考文献：
[1]. 苦皮藤内生真菌农用活性成分的研究[D]. 顾爱国. 西北农林科技大学. 2004
[2]. 苦皮藤内生真菌中杀虫杀菌活性物质的初步研究[D]. 兰琪. 西北农林科技大学. 2002
[3]. 苦皮藤内生真菌As菌株农药活性成分初步研究[D]. 邹强. 西北农林科技大学. 2007
[4]. 从苦皮藤内生菌中筛选农用抗生素的研究[D]. 杨春平. 西北农林科技大学. 2005
[5]. 苦皮藤内生真菌A10杀菌活性成分研究[D]. 钱勇. 西北农林科技大学. 2006
[6]. 苦皮藤内生真菌筛选及其代谢产物的农药活性研究[D]. 武金占. 西北农林科技大学. 2007
[7]. 苦皮藤内生真菌2B菌株代谢产物农用生物活性研究[J]. 顾爱国, 吴文君, 高巍, 张晓强. 江苏农业科学. 2007
[8]. 卫矛科植物内生菌的分离及其农药生物活性研究[D]. 杨春平. 西北农林科技大学. 2008
[9]. 冬青卫矛内生真菌筛选及其代谢产物的农药活性研究[D]. 韩江涛. 西北农林科技大学. 2008
[10]. 鱼腥草内生真菌分离及其抑菌活性研究[D]. 刘正琼. 四川农业大学. 2012