邓国伟
湖南省益阳市资阳区妇幼保健院 413001
【摘 要】目的：探讨FQ-PCR与ELISA法检测诊断婴幼儿巨细胞病毒感染的临床价值。方法：选取我院2012年12月-2014年12月间135例临床疑似婴幼儿巨细胞病毒感染患儿为研究对象，采用酶联免疫吸附试验（ELISA法）检测患儿的血清HCMV-IgM抗体，同时采用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测患儿尿液HCMV-DNA水平。结果：ELISA法检测血清HCMV-IgM的阳性率为16.30%，FQ-PCR法检测尿HCMV-DNA的阳性率为36.30%，FQ-PCR法检测阳性率明显高于ELISA法，两组数据比较有统计学差异（P<0.01）；二者检测HCMV感染的一致率为78.52%。结论：相比于ELISA法检测，FQ-PCR法监测尿HCMV-DNA，检出率和敏感性更高，简单易行，在HCMV的早期诊断和疗效判断中有重要意义，有临床推广价值。
【关键词】巨细胞病毒；婴幼儿；聚合酶链反应；酶联免疫吸附试验
人巨细胞病毒（HCMV）是一种线状双链DNA病毒，是我国婴幼儿常见的感染病之一，其病变能累及多个系统器官，且无特异性临床表现，只在尿中排毒[1]。因此，对婴幼儿巨细胞病毒感染做出早期诊断具有极其重要的意义。本文采用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）与酶联免疫吸附试验（ELISA）两种检测方法对135例疑似婴幼儿巨细胞病毒感染患儿进行实验室检查，并对检测结果进行了对比分析，现将结果汇报如下。
1资料与方法
1.1一般资料
本研究病例选自2012年12月-2014年12月来我院就诊的确诊或疑似HCMV感染患儿，共135例，收集入选患儿的尿液和血清标本，其中男71例，女64例，年龄2个月-5岁，平均（2.8±0.7）岁。依据《巨细胞病毒感染诊断方案》[2]，CMV-IgM阳性表示为活动性或原发CMV感染，尿液PCR-CMV-DNA阳性则可诊断为CMV感染并有产毒性。
1.2 方法
1.2.1采集标本：采集所有入选患儿静脉血2ml，进行血清分离，并放置在-20℃冰箱保存，尽量一周内进行HCMV-IgM检测；留取所有患儿3ml新鲜晨尿，置于无菌干燥管中，1d内进行HCMV-DNA检测。
1.2.2 实验室检测（1）尿HCMV-DNA检测。使用FQ-PCR法检测，仪器采用Light Cycler荧光定量PCR仪，CMV-DNA检测采用广州中山达安基因公司提供的试剂盒，检测范围为103～107copi-es/ml。严格按照试剂盒说明书进行提取尿液HCMV-DNA操作。进行实时荧光定量PCR的扩增，操作条件为93℃，2分钟预变性；93℃，45s，55℃，60s，计10个循环；93℃，30s，55℃45s，计30个循环；最终在55摄氏度45s处进行单点荧光检测。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆反应体系是50μl，选用FAM通道进行HCMV-DNA定量检测，依据质控标准，结果＞1×103copies/ml判定为阳性[3]。（2）HCMV-IgM检测。采用ELISA法检测，采用上海贝尔公司提供的试剂盒，按照试剂说明书操作并判断结果。
1.3 数据处理方法 本研究数据采用SPSS17.0处理分析，计数资料间比较采用X?检验，以ɑ=0.05为检验水准。
2 结果。
ELISA法检测血清HCMV-IgM阳性率与FQ-PCR法检测尿HCMV-DNA阳性率比较有统计学差异（X?=13.93，P<0.01），二者检测HCMV感染的一致率为78.52%（106/135）。详见表1：
表1 血清HCMV-IgM与尿HCMV-DNA检测结果（n）
HCMV-IgM检测结果尿HCMV-DNA检测合计
HCMV-DNA阳性HCMV-DNA阴性
HCMV-IgM21122
HCMV-IgM2885113
合计4986135
3讨论
HCMV属于疱疹病毒科β亚科，其直径为180-250nm，HCMV感染在我国流行广泛，尤其是免疫力低下的小儿及胎儿容易受害，是引发小儿智力低下、发育迟缓、先天畸形的重要病原体。目前临床上治疗HCMV感染主要采用更昔洛韦，其抗 HCMV特异性较强，疗效较好，对小儿HCMV感染进行早期、准确、快速的诊断，对患儿合理、及时治疗及其预后有积极的意义。
临床上检测HCMV的经典方法是病毒分离，不过HCMV病毒分离培养比较困难，且受多种影响因素干扰，分离敏感性较差，临床实验室不宜开展应用。临床上应用较多的检测技术则是ELISA检测法，该检测方法是活动性HCMV感染的重要评估指标，它通常在机体感染后3-5d出现，且能够持续至3-6个月。同时，临床上还常用FQ-PCR法对HCMV感染进行检测。研究资料显示，该检测方法能快速且准确的检测各类病原体，它能在HCMV感染早期灵敏的检测到HCMV-DNA，该检测方法还能对抗病毒治疗效果进行监测。研究者提出，相较于ELISA法检测，FQ-PCR法可以更早检测到病毒感染，甚至在临床症状出现时间的前3-10d即能检测出HCMV病毒[4]。此外，对于婴幼儿患者，以尿液为临床检测标本，标本更易收集，操作简单易行，对患儿无创，容易被家长接受，且也便于在药物治疗过程中实施连续监测。
综上，相比于ELISA法检测，FQ-PCR法监测尿HCMV-DNA，检出率和敏感性更高，简单易行，在HCMV的早期诊断和疗效判断中有重要意义，有临床推广价值。
参考文献：
[1]沈丹，黄少军，汪晶晶.三种标本CMV-DNA量检测在儿童巨细胞病毒性肝炎诊断和治疗监测中的应用[J].肝脏，2015，20（1）：35-37.
[2]李云，王惠萱，姜昌丽，范泉水.荧光定量PCR检测婴幼儿巨细胞病毒感染情况分析[J].国际检验医学杂志，2011，32（16）：1841-1844.
[3]陈廷瑞，卢立党，郭爱红，等.350例新生儿巨细胞病毒感染现状调查与分析[J].中国妇幼保健，2013，28（2）：271-272.
[4]饶月丽，董敖.儿童人巨细胞病毒感染临床分析[J].临床血液学杂志，2014，7（3）：224-226.
论文作者:邓国伟
论文发表刊物:《航空军医》2016年第1期供稿
论文发表时间:2016/4/12
标签：婴幼儿论文; 患儿论文; 病毒感染论文; 巨细胞论文; 血清论文; 阳性论文; 定量论文; 《航空军医》2016年第1期供稿论文;