曹经瑗, 梁米芳, 郭可謇, 孟庆玲, 尚丹[1]2000年在《从噬菌体抗体库筛选获得中和性人源抗甲型肝炎病毒Fab抗体》文中提出目的 研制人源抗甲型肝炎病毒基因工程抗体 ,为预防甲型肝炎病毒感染提供有效的方法。方法 采用噬菌体表面展示技术 ,从一名甲型肝炎恢复期病人的抗凝血中分离淋巴细胞 ,提取总RNA逆转录后 ,用一组人IgGFab特异性引物扩增。 结果 克隆和表达了 8株人源抗甲型肝炎病毒抗体Fab段基因 ,经ELISA检测为特异性人抗甲型肝炎病毒Fab段抗体。结论 该 8株人源抗甲型肝炎病毒Fab抗体都能与具有中和活性的鼠抗甲型肝炎病毒单克隆抗体产生竞争抑制反应 ,选其中的 2株做体外中和实验 ,证明都有中和甲型肝炎病毒的活性
于长明[2]2000年在《人源抗甲型肝炎病毒抗体基因的克隆及表达研究》文中进行了进一步梳理抗体分子的研究及应用一直是免疫学乃至整个生物学研究的热点。在生物制品中，抗体类占了很大的份额，因此抗体工程的发展倍受人们的关注。抗体技术由最初的血清多克隆抗体发展到杂交瘤单克隆抗体技术，直到目前的基因工程抗体技术，尤其是噬菌体抗体库技术的出现，将抗体工程推到了一个新的发展阶段。甲型肝炎病毒(HAV)是危害人类健康的重要致病原之一，目前已有多种用于接触前预防的甲肝疫苗。但对于接触后预防或短期到HAV高流行区的旅游者的预防，则多采用免疫球蛋白作被动免疫。血源性免疫球蛋白虽然效价高，应用效果好，但可能被血源病原体污染，且浪费血源。因此基因工程人源抗体有望成为接触后预防的首选制剂。为此，我们用HAV的细胞培养抗原对已有的人源噬菌体抗体库进行筛选，获得了与HAV抗原有结合活性的噬菌体抗体，并改建成Fab及全分子抗体，并用不同的表达系统进行了表达。 一、人源抗HAV Fab基因的克隆及可溶性表达 用抗体捕获的HAV抗原对噬菌体抗体库进行三轮淘筛，筛选出与HAV抗原有特异性结合能力的抗体，并对其重、轻链基因进行了序列测定，分析表明重链Fd基因属IgG1亚类，轻链基因属κ亚类。在此基础上构建了可溶性Fab表达载体，并获得可溶性表达。
佚名[3]2000年在《中华实验和临床病毒学杂志2000年第14卷主题词索引》文中进行了进一步梳理(以汉语拼音为序 )Ａ癌基因蛋白质类 慢性肝炎和原发性肝癌肝组织Ｐ2 1和Ｐ15蛋白的表达及与细胞凋亡的关系 (王业东 ,王林杰 ,王松山等 )(2 ) :15 7癌基因蛋白质类 ,病毒性 宫颈癌组织中人乳头瘤病毒 16型Ｅ7蛋白致癌机理初探 (王平 ,
曹经瑗, 梁米芳, 孟庆玲, 王晓芳, 许永刚[4]2004年在《抗甲肝病毒人源基因工程全抗体分子在杆状病毒中的表达》文中研究表明目的 探讨人源抗甲型肝炎病毒全抗体分子在杆状病毒中的表达。方法 将获得的人源抗甲肝病毒中和性抗体Fab段基因克隆入含信号肽及Fc的杆状病毒表达载体中并在杆状病毒细胞中表达。结果 获得了中和性人源抗甲肝病毒全抗体分子的表达产物并进行了纯化 ,轻重链表达产物位置大小正确 ,HAFc16抗体能与具有中和活性的鼠抗甲肝病毒单克隆抗体产生竞争抑制反应 ,并能在体外中和甲肝病毒 ,另一株HAFc78抗体同样具有体外中和甲肝病毒的活性 ,但系抗不同位点的抗体。结论 获得的人源抗甲肝病毒全抗体分子表达产物具有很好的体外中和甲肝病毒的活性 ,且为抗不同位点的抗体 ,为这些抗体的进一步开发及应用打下了基础 ,为防止甲型肝炎暴发流行提供应急措施。
曹经瑗, DeJaeger, Geert, 李川, 孟庆玲, Terryn, Nancy[5]2005年在《Pichia pastoris酵母中表达人源中和性抗甲型肝炎病毒scFv-Fc融合抗体的研究》文中指出为了探讨人源抗甲型肝炎(甲肝)病毒scFv-Fc融合抗体在酵母中的表达特性,将获得的人源抗甲肝病毒中和性单链可变区抗体(scFv抗体)基因克隆入含信号肽及人IgG1Fc抗体基因的酵母细胞表达载体中,获得了一株中和性人源抗甲肝病毒pPiscFv-FcHA16融合抗体的分泌表达,并对表达产物进行了纯化。同时对表达产物的生物学特性进行了一系列鉴定。表达的pPiscFv-FcHA16融合抗体为具有不同糖基化形式的同源二聚体,与相应的CHO细胞表达的IgG抗体相比,pPiscFv-FcHA16融合抗体仍保持很好的抗原结合活性,以及与中和性鼠抗甲肝病毒单克隆抗体的竞争抑制能力。同时也保持了对甲肝病毒的体外中和活性。这些结果表明,在酵母中表达的单链可变区(scFv)与IgG1Fc区的融合抗体具有很好的生物学活性,有希望用做体外诊断,用纯化相应的抗原,或者可能用于体内预防与治疗。
曹经瑗, 梁米芳, 郭可謇, 孟庆玲, 纪燕[6]2001年在《人源中和性抗甲型肝炎病毒抗体Fab段基因的序列分析及可溶性表达》文中研究表明在用噬菌体表面呈现系统获得人源抗甲型肝炎 (甲肝 )病毒中和性基因工程Fab抗体的基础上 ,对所获得的 4株中和性Fab抗体轻重链可变区基因进行了序列分析、可溶性表达及生物学特性鉴定。 4株Fab抗体重链可变区拥有 99%同源的核苷酸序列和相同的CDR区氨基酸序列 ,属于VHⅢ基因家族。而轻链可变区核苷酸序列同源性为 95 %和相似的CDR区氨基酸序列 ,属于VL5基因家族。这些重组抗体都能与人甲肝恢复期血清及具有中和活性的鼠抗甲肝单克隆抗体产生竞争抑制反应 ,表明其针对甲肝病毒结构蛋白上的主要抗原决定簇
参考文献：
[1]. 从噬菌体抗体库筛选获得中和性人源抗甲型肝炎病毒Fab抗体[J]. 曹经瑗, 梁米芳, 郭可謇, 孟庆玲, 尚丹. 中华实验和临床病毒学杂志. 2000
[2]. 人源抗甲型肝炎病毒抗体基因的克隆及表达研究[D]. 于长明. 第四军医大学. 2000
[3]. 中华实验和临床病毒学杂志2000年第14卷主题词索引[J]. 佚名. 中华实验和临床病毒学杂志. 2000
[4]. 抗甲肝病毒人源基因工程全抗体分子在杆状病毒中的表达[J]. 曹经瑗, 梁米芳, 孟庆玲, 王晓芳, 许永刚. 中华实验和临床病毒学杂志. 2004
[5]. Pichia pastoris酵母中表达人源中和性抗甲型肝炎病毒scFv-Fc融合抗体的研究[J]. 曹经瑗, DeJaeger, Geert, 李川, 孟庆玲, Terryn, Nancy. 病毒学报. 2005
[6]. 人源中和性抗甲型肝炎病毒抗体Fab段基因的序列分析及可溶性表达[J]. 曹经瑗, 梁米芳, 郭可謇, 孟庆玲, 纪燕. 病毒学报. 2001