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摘要：《中国药典》对药品微生物限度方法学验证提出要求已实施了10多年，但目前它仍是药品生产企业工作中的重点难点。本文通过查阅文献并结合自身工作经历，论述了药品微生物限度方法学验证研究的必要性，对比现版与旧版药典相关要求与方法的差异，以帮助药品检验机构和药品生产企业正确解读、执行2015年版《中国药典》，并开展相关工作。
关键词：药品；微生物限度；方法学验证
引言
在药品微生物限度检验工作中，由于受到药物自身性质、操作环境的影响，因此误差几乎是不可避免的，其中单因素占百分之二十五，多因素占百分之七十五，因此加强检验环境管理，降低误差率的发生，是相关研究人员应该考虑的问题，本文将立足于药品微生物限度检验的要求，深入研究影响药品微生物限度检验的因素，以供相关从业人员借鉴学习。
一、微生物限度检查方法学验证的必要性
《中国药典》要求之前的研究早在加05版《中国药典》规定之前，就已经有研究人员进行了抗生素类71和中成药类坤。驯药品的微生物检查方法验证研究，指出含抑菌成分的药品应采用培养基稀释法或低速离心．薄膜过滤法联合使用，用一定量冲洗液冲洗后正面贴膜培养，可大大提高方法的加菌回收率。提出了对报批产品的审批要求申报单位提供药品微生物限度检查方法学验证的研究资料；在审核新药质量标准时，对164个品种进行了微生物限度方法学验证，提出对照菌回收率在70％以上时验证方法才有效。
1设备的影响以及控制方法
在药品微生物限度检验过程中，使用到的设备较多，包括温度计、玻璃容器、培养箱、容量仪器，因此加强设备的管理，是减少药品微生物限度检验的重要途径。
2 计数误差
计数误差是药品微生物限度检验误差最常见的形式，造成这种现象，有主观原因，也有客观原因。主观原因是相关研究人员的疏忽，或者违规操作造成的，在细菌鉴别的过程中，需要按照一定的流程进行操作，并且为确保实验环境的纯净，需要事先对玻璃容器与容量容器进行消毒处理，确保容器内没有抑菌物质，由于专业素质的不足，经常会发生实验流程上的失误，从而导致计量误差，对药品微生物限度检验结果产生了不良影响。客观原因是因为菌落生长小而密集，这在一定程度上给计数工作提出了一定的难度，同时，随着培养时间的延长，菌落还会在边缘生长，这些客观原因都会导致计数误差的产生。
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3 控制方法
为了方便微生物菌落的鉴别，可以通过增加稀释液的方式，这样不仅有利于菌落的计数，还有利于菌落的对照试验。对于一些难以计数的菌落，相关研究人员可以适当的延长培养时间，从而增加细菌菌落，为了防止菌落沿着培养基的边缘生长，可以加入TTC营养琼脂，从而保证菌落与培养皿中的颗粒、沉淀物分开鉴别。
4 无菌室方面造成的误差
药品微生物限度检验通常在无菌室进行，一方面，是为了减少不可控因素的影响，提高药品微生物限度检验的准确性。另一方面，无菌室内部的洁净情况，还会直接影响到灭菌消毒的有效性，因此加强无菌室的检查，能够有效的减少药品微生物限度检验中的误差。
二、检品自身的影响
①检品自身的特性会对检查结果产生一定的影响，因为自然环境不确定性较大，药品容易受外部微生物污染，并且污染类型具有多样性，程度难以明确，另外，药品微生物限度检查的对象都是活的微生物，其易变性较大，这也是检品的独特之处；②部分检品中含有抑菌成分，这些抑菌成分的存在也会导致检验结果产生偏差；③检品对培养温度所产生的影响，研究发现部分含菌量非常高的检品，如果置于 30℃的温度进行培养，规定时间内，菌落生长较为缓慢，对此，应在规定时间内视情况增加培养时间。针对药品自身的影响，检验人员应通过平时的工作不断积累经验，学习并掌握相关的知识，严格按照检验技术规范进行操作，以提高检验准确性。
三、药品检验机构和药品生产企业面临的困难
关于医院制剂开展方法学验证的困难，如在检验仪器投入方面，有的单位甚至连过万元的设备都没有，也无开展方法学验证所需的生物安全柜等设备，菌种保存无法有效控制；人员专业素质不高，大部分日常工作仅以开展简单检验为主，缺乏相应培训和业务交流；领导不够重视等。微生物方法学验证存在工作量大、不同实验室方法欠佳、重复劳动过多等问题。对12家药品生产企业36个品种的验证资料进行统计分析，发现存在诸多缺陷，如验证结果和结论表述不清楚或不全面、未提及试液制备或制备方法错误、未提供所验证药品品种处方、记录不全、无证无编号等。国家收集资料整理分析，出台一些具体品种的的微生物限度检查标准，以方便药品监督抽查检验，但经过了这么多年，相关验证还是药品检验机构和药品生产企业的联系和沟通，集中从上而下的管理并未落实。笔者结合从事10多年药品微生物检验工作的经历，在审核各厂家不同品种的微生物限度方法学验证材料时发现，大型药品生产企业在这方面相对规范，而中小型比较薄弱，药典和标准解读不到位，导致验证项目不全或多余、方法设计不合理、实验研究不规范等问题。
结束语
药品微生物限度检查是我国医疗卫生工作的一项重要内容，对于药品的质量与安全有十分重要的作用，直接关系到百姓的身体健康与生命安全。为提高药品质量，还应重视对于药品生产环节的管理，加强高风险药品监管，并且督促企业严格按照GMP要求进行生产，把握好人员、物料、工艺、生产环境等要素，以提高药品源头安全。一直以来致力于我国药品微生物限度检查事业的广大工作人员还应继续提高无菌意识、规范意识、质量意识、责任意识，严格按照药品检验的标准进行规范检验，确保百姓用上放心药。
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论文作者:汤澍
论文发表刊物:《中国误诊学杂志》2018年第23期
论文发表时间:2018/10/9
标签：药品论文; 微生物论文; 限度论文; 菌落论文; 误差论文; 法学论文; 药典论文; 《中国误诊学杂志》2018年第23期论文;