化妆品卫生质量检测与安全性评价论文_李宝君,

摘 要：随着我国经济快速发展，人民生活的质量不断提高，化妆品作为日常消费品发展迅速。化妆品因其使用期限长、接触人群广泛且直接接触于人体皮肤，因此化妆品的卫生质量安全受到了大众的关注。本文应用荧光定量PCR技术检测部分地区化妆品卫生质量与安全，以期为从事化妆品的卫生质量检测和安全性监督提供技术参考。

关键词：化妆品，卫生质量检测，安全性评价

我国是仅次于欧盟和美国的第三大化妆品消费国。化妆品在清洁修饰美化等方面作用颇多逐渐成为了生活中必不可少的一部分，因此，化妆品的安全性逐渐受到了广大消费者的关注。同时，随着人们对绿色化学理念，环保意识的认识逐渐深入，通过快速检测技术以保障化妆品的快速质量检测与质量安全被广泛的应用于行业检测汇总[1]。基于此，本文通过对部分地区采集的化妆品样本进行荧光定量PCR检测进行检测，以期为化妆品行业这发展提供技术参考。

1.1 材料

1.1.1主要试剂与仪器

Taq酶购自TOYOBO-东洋纺生物科技有限公司；缓冲液购自Takara公司；MarkerⅡ、细菌DNA快速提取试剂盒均购自大连宝生物公司；固体培养基与液体培养基由本实验室制备；高速离心机购自Eppendor公司；普通PCR仪购自Eppendorf公司、核酸蛋白电泳仪、凝胶成像系统均购自Bio-Rad公司。

1.2 方法

1.2.1 样品采集与处理

2019年3月-2019年10月于不同市场和超市共购买103份化妆品样本，根据采集市场地点分别标记编号。随机抽取103份样本中的100份样本，各取2g样本加入10ml混匀，根据细菌DNA快速提取试剂盒的使用说明提取DNA，确定细菌基因组DNA的浓度和纯度，将提取后的样本放置-20℃待用。

1.2.2 阳性样本的制备与处理

大肠杆菌，金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌由本实验室保存，取-80℃保存的甘油中的菌液于各自的培养基中进行划线培养，37℃培养24h 后挑取单菌落于各自的液体培养基中，37℃摇菌培养12~16h。取10毫升菌液培养的菌液于无菌离心管中，室温3000rpm离心8分钟，将3种菌体加入到剩余的3份化妆品样品中制备人工污染的化妆品样本作为阳性对照组。取阳性样本各10ml，根据细菌DNA试剂盒的说明书提取DNA并确定细菌基因组DNA的浓度和纯度，将提取后的样本放置-20℃待用。

1.2.3 PCR 反应条件

根据参考文献中最佳的PCR反应体系：5μL10xPCRbu，5μLMg2+（50 mmol / L），1μLdNTPs（10 mmol / L），2μL正向引物（10μM）和2μL每种靶DNA的反向引物（10μM）， 1μLTaqDNA聚合酶，50 ng模板DNA，ddH2O至50μL。 循环参数为：在94℃初始变性10分钟，然后进行34个循环，在94℃变性1分钟，在58℃退火1分钟，在72℃延伸1分钟，和 最终在72°C下延伸10分钟。

表1 针对大肠杆菌，金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌的3对特异性引物的序列

2. 结果

2.1 人工污染的阳性样本提取DNA 的浓度及纯度

用分光光度计分别检测大肠杆菌，金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌基因组DNA 在 260nm和280nm波长处的OD值，OD260/OD280 的数值均在1.7～1.8 之间，结果表明DNA提取纯度符合要求；初始质量浓度：大肠杆菌 4.6μg/mL，金黄色葡萄球菌 3.9μg/mL，绿脓杆菌5.9μg/mL。

2.2 化妆品样本的检测

根据参考文献报道的方法对样本进行检测，结果显示，阳性样本的PCR反应条带在，与报道的条带大小相符。剩余的100份样本中，检测出大肠杆菌1例，检出率为1%，金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌基因的检出率为0%。结果表明，该市场内的所检测的化妆品中存在感染大肠杆菌的情况，但没有感染金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌的情况。

表2 化妆品样本的检测情况

3.讨论

为了确保化妆品的使用安全，化妆品的原料以及产品必须符合我国家卫生标准，在化妆品投入市场前，需按照相关卫生标准进行卫生质量的检测[2]。目前我国对化妆品卫生质量检测与安全评价主要从微生物有毒化学物和独立实验三方面进行，本文微生物这一方面，对该市场内采集的100份化妆品样本进行检测，通过荧光定量PCR方法检测结果显示，该100份样本中大肠杆菌检出率为1%。根据我国对化妆品中的微生物标准规定显示，细菌总数方面，每克或每毫升的化妆品内活菌的总数不应大于1000个，每毫升或一千克每克活菌的总数可以作为推定化妆品是否被细菌污染以及污染程度的标准之一。大肠杆菌主要源于人和动物的粪便，大肠杆菌的检出，可表明该样本是否被肠道致病菌或寄生虫等风源微生物污染，因此，大肠杆菌菌群的的检测被认为是化妆品卫生指标的检测项目。绿脓杆菌是我国化妆品质量检测中的菌株之一，广泛的存在于空气和水中，对人体具有治病能力，可引起人皮肤化脓性感染，因此，在化妆品中也不应检出绿脓杆菌。金黄色葡萄球菌是化妆品样本主要病原体之一，该菌体可产生多种肠毒素，引发人体胃肠道疾病，具体表现为呕吐，恶心和腹泻等症状，金黄色葡萄球菌可引起皮肤化脓性感染，情况严重时可导致人败血症的出现[3]。在本次检测中化妆品样本中检出一例金大肠杆菌的感染，需要引起相关部门的重视。

参考文献

[1] 郭项雨, 陈萌, 孟宪双, 等. 化妆品样品前处理与检测技术研究进展[J]. 色谱, 2020, 38(2):151-161.

[2] 何炫锋, 黄茜茵, 叶海燕, 等. 微商销售化妆品中有害成份调研分析[J]. 智富时代, 2019(3).

[3] 陈超, 陈晓博, 龚立雄. 国内外严重化妆品不良反应纳入标准对比研究[J]. 中国药业, 2019(11):93-95.

论文作者:李宝君,

论文发表刊物:《科学与技术》2019年第22期

论文发表时间:2020/4/29

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