魏峰
（南阳市第二人民医院检验科 河南 南阳 473012）
【摘要】 目的：分析头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌的结果，评价其临床价值。方法：对分离所得的218株葡萄球菌进行mecA基因的检测，对比头孢西丁纸片扩散法与苯唑西林纸片扩散法的应用效果。结果：苯唑西林纸片扩散法结果与mecA结果符合率为96.3%，而头孢西丁纸片扩散法结果为99.43%。在CNS的检测结果上，头孢西丁在特异性与敏感性（100%、94.6%）上均高于苯唑西林（95.9%、88.2%），具有统计学意义（P＜0.05）。结论：头孢西丁纸片扩散法对耐甲氧西林葡萄球菌的灵敏度较高，检测结果与PCR检测结果相关性高，且操作简便，可在临床应用上推广。
【关键词】 头孢西丁；耐甲氧西林葡萄球菌；mecA基因；苯唑西林
【中图分类号】R37 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）15-0150-02
MRS是重要感染病原菌，其耐药性的产生主要是与mecA基因的控制编码产生的PBP2a（青霉素结合蛋白）有关，从而导致出现青霉素的耐药性，主要有效的抗生素为万古霉素[1]。但因MRS的基因突变使万古霉素对其敏感性大幅度降低，因此，临床应用上如何快速有效的检测出MRSA是治疗过程中的关键。本文以mecA基因检测法结果为标准，比较苯唑西林纸片扩散法与头孢西丁纸片扩散法对MRS的检测结果，取得了较为满意的结果，现具体报告如下。
1.资料与方法
1.1 一般方法
218株耐甲氧西林葡萄球菌均由我院自2014年10月份至2015年9月份于就诊人群中采集，标本来源如下：142株为痰液、38株为分泌物、15株为分泌物、14株为脓液、9株为咽拭子。经API STAPH系统鉴定，葡萄球菌的分类如下：78株为金黄色葡萄球菌、47株为溶血葡萄球菌、52株为表皮葡萄球菌、11株为腐生葡萄球菌、7株为模仿葡萄球菌、8株为里昂葡萄球菌、5株为松鼠葡萄球菌、5株为赛氏葡萄球菌、2株为人葡萄球菌、3株为缓慢葡萄球菌。金黄色葡萄球菌A TCC29213与A TCC25923为质控菌株。
1.2 试剂与仪器
离心机、零下80℃冰箱、PCR扩增仪、由英国OXOID生产的苯唑西林纸片（规格为每片1μg）、头孢西丁纸片（规格为每片30μg）、由杭州天和微生物试剂公司生产的水解酪蛋白( M-H)琼脂、生物梅里埃公司生产的金黄色葡萄球菌乳胶凝集试剂、PCR引物序列为5′-GGT TAC GGA CAA G GTG AAA TAC TGA-3′、5′-AGT TCT GCA GTA CCG GAT TTG C -3′，扩增时mecA作为靶基因，最终所得片段为533bp。
1.3 方法
1.3.1 PCR检测mecA基因 首先提取模板，再将DNA提取液加入PCR反应体系中，在93℃下预变性，时长为2分钟，在93℃（60s）、55℃（60s）、72℃（60s）的循环条件下循环35次，结束后在72℃下延伸2分钟。对照时，以金黄色葡萄球菌A TCC29213为准，出现相对分子质量为533bp的阳性模板时视为阳性。
1.3.2纸片扩散法 以美国临床实验室标准化协会（NCCLS）制定的相关标准为准，在生理盐水中置入18～24h的单个纯菌落，制成菌悬液，并涂在M-H培养基的表面上，贴上1μg的苯唑西林与30μg的头孢西丁的纸片，在35℃条件下培养24小时。
1.4 评定标准
金黄色葡萄球菌的结果评定：苯唑西林与头孢西丁的抑菌圈分别为①耐药：直径≤10mm与≤19mm；②敏感：直径≥13mm与≥20mm。
凝固酶阴性葡萄球菌的结果评定：苯唑西林与头孢西丁的抑菌圈分别为①耐药：直径≤17mm与≤24mm；②敏感：直径≥18mm与≥25mm。
1.5 统计学方法
本次研究全部数据均采用SPSS 17.0统计学软件进行统计分析，计量资料采用t检验用（x-±s）表示；计数资料采用χ2检验用（%）表示，以P＜0.05为界限，作为是否具有统计学差异的标准。
2.结果
2.1 三种方法结果
PCR检测mecA结果：测定218株菌株，共58株MRSA（耐甲氧西林金黄色葡萄球菌），119株MRCNS（耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌），检出的耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的阳性例数为177株（81.2%）；苯唑西林纸片扩散法结果：测定218株菌株，共58株MRSA（耐甲氧西林金黄色葡萄球菌），116株MRCNS（耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌），检出的耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的阳性例数为174株（79.8%），与mecA结果有11例不符合，符合率为96.3%；头孢西丁纸片扩散法结果：测定218株菌株，共58株MRSA（耐甲氧西林金黄色葡萄球菌），119株MRCNS（耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌），检出的耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的阳性例数为177株（81.2%），与mecA结果相同，但出现了在一株凝固酶阴性葡萄球菌的结果上，头孢西丁法结果为MRCNS，mecA结果为阴性，符合率为99.43%。所得数据具有统计学意义（P＜0.05）。
2.2 基因与表型不同的CNS（凝固酶阴性葡萄球菌）的药敏试验
表1 基因与表型不同的CNS药敏结果
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3.讨论
近年来革兰阳性菌感染率逐年上升，以葡萄球菌属为主，耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)是其中之一。目前临床上的检测方法主要有以下几种，分别为PBP2a胶乳凝集法、mecA基因检测法、苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁纸片扩散法等。本文采取了苯唑西林纸片扩散法与头孢西丁纸片扩散法，以PCR基因检测结果为标准，苯唑西林纸片扩散法结果与mecA结果有11例不符合，符合率为96.3%；而头孢西丁纸片扩散法结果与mecA结果相同，但出现了在一株凝固酶阴性葡萄球菌的结果上，头孢西丁法结果为MRCNS，mecA结果为阴性，符合率为99.43%。说明了头孢西丁纸片扩散法与mecA表达有较高的相关度，其原因可能是因为头孢西丁头孢西丁与青霉素结合蛋白相互作用。在基因与表型不同的CNS的药敏试验结果上显示，在抑菌环直径的对比上，苯唑西林为17.5-18.5毫米，为临界值，结果为MSCNS，而头孢西丁低于24毫米，结果为MRCNS，后者与mecA结果一致。其产生的原因大体是因为头孢西丁的诱导力对低含量的青霉素结合蛋白产生影响，促进MRS的生长。在CNS的检测结果上，头孢西丁在特异性与敏感性（100%、94.6%）上均高于苯唑西林（95.9%、88.2%），具有统计学意义（P＜0.05）。本研究结果与倪语星[2]等学者所得一致。
综上所述，头孢西丁纸片扩散法对耐甲氧西林葡萄球菌的灵敏度较高，检测结果与PCR检测结果相关性高，且操作简便，可在临床应用上推广。
【参考文献】
[1]陈颖,周建党,郭建军等.头孢西丁扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌异质性耐药菌株的评价[J].中南大学学报（医学版）,2007,32(1):179-182.
[2]王大方,倪语星.头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌[J].检验医学,2004,19(6):487-489 .
论文作者:魏峰
论文发表刊物:《医药前沿》2016年5月第15期
论文发表时间:2016/6/22
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