曲周县医院057250 邯郸，（方保锋）
【摘要】目的 探讨载脂蛋白L-I（apolipoproteinL-I，apoL-I）基因变异是否与中国人冠状动脉粥样硬化性心脏病（coronary atherosclerotic heart disease, CHD）患者血脂及载脂蛋白水平相关联。方法 应用多聚酶链反应（PCR）和限制性片段长度多态性（restriction fragment length polymorphism，RFLP）方法对邯郸地区390名正常人及382例冠心病患者apoL-I基因外显子Ile244Met多态性位点进行分析。 结果apoL-I基因Ile244Met位点Met等位基因频率在正常人群和冠心病患者分别为0.172和0.148，两者的差异无统计学意义。正常人群中，Ile/Ile基因型携带者和Met等位基因携带者的血脂及载脂蛋白水平的差异无统计学意义。冠心病患者中Ile/Ile基因型携带者血清TG水平较Met等位基因携带者（Ile/Met和Met/Met基因型者）显著升高（2.64±0.54mmol/L vs 1.98±0.36mmol/L，P＜0.05）。结论 apoL-I基因Ile244Met位点多态性与中国人冠心病患者的血清TG相关联。
【关键词】载脂蛋白L-I基因；限制性片段长度多态性；基因变异
【中图分类号】R977【文献标识码】A【文章编号】1001-5213(2016)09-0038-01
载脂蛋白L (apolipoprotein L, apoL)是新近发现的一类载脂蛋白，由apoL-I ～ apoL-VI共六个成员组成[1].apoL-I主要存在于血浆HDL组分中[2]。在正常白种人群、高脂血症及糖尿病患者血浆apoL-I水平与甘油三酯和胆固醇水平成正相关[3]，推测apoL-I可能与血脂代谢关系密切。本研究首次对该基因多态位点在中国汉族人冠心病患者中进行了研究。
1.对象与方法
1.1 对象
(1)冠心病组：选取2015年1月-12月邯郸市第一医院心内一科收治的冠心病住院患者共382例作为冠心病组, 所有患者住院期间均行选择性冠脉造影检查并初次诊断为冠心病, 其中男230例, 年龄35-76岁; 女152例, 年龄48-75岁; 平均( 61.3±7.2)岁, 均为一支及以上血管腔径狭窄大于或等于50%者。(2)对照组：选择冠脉造影检查正常患者390名，其中男250名，女140名，年龄38-75岁，平均58.6±8.2岁。以上两组均排除先天性心脏病、心脏瓣膜病、肾脏疾病、严重高血压、肝脏疾病、内分泌及代谢性疾病，并排除入院前正在口服降脂药物的患者。以上研究对象均经知情同意后参加该项研究。
1.2 方法
1.2.1 血液基因组DNA分离
抽取空腹l2～14 h后静脉血1mL，提取基因组DNA。
1.2.2 PCR扩增
采用PCR扩增目的片段，上游引物为5’-GTCAGGATGGTCTCAATCTCCTG-3’，下游引物为5’-CACCTCCTTCAATTTGTCAAGGC-3’。PCR反应总体积为25ul,含0.3～0.5ugDNA，终浓度为 200umol/L的四种dNTP，0.2uM的引物，2.5U/100ul的Taq酶。进行PCR反应。
1.3.3 PCR扩增产物消化及电泳
取6ulPCR扩增产物，加限制性内切酶NcoI及其缓冲液，37℃消化3小时，消化产物进行电泳，凝胶成像仪下观察，拍照，分型。
1.3.4 血脂及载脂蛋白的测定
抽取空腹8～12 h静脉血，血脂水平在邯郸市第一医院检验科检测。血清TC、TG、LDLC、HDLC水平测定采用终点比色法，载脂蛋白测定采用免疫透射比浊法，试剂盒均购自南京汇标生物科技有限公司。非高密度脂蛋白胆固醇（nHDL-C）=TC- HDL-C。
1.4 统计学分析
用Windows SPSS13.5统计软件建立数据库及进行统计学分析。主要统计指标均进行正态性检验，并以±S表示。冠心病组和对照组间的基因型频率及等位基因频率差异用卡方检验。两组间血脂及载脂蛋白水平比较用t检验。P<0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 正常对照组和冠心病组的血脂及载脂蛋白水平的比较
由表1可见，与正常对照组相比，CHD组血清TG、TC、LDLC、nHDLC、apoB，Lp（a）均显著升高（P＜0.01），HDLC和apoAⅠ显著降低（P＜0.01）。
M：DNA分子量标准；1：PCR产物； 2，4，6：基因型Ile/ Ile；3：基因型Met/Met; 5：基因型Ile/ Ile
2.3不同基因型亚组血脂及载脂蛋白水平的比较
由于Met/Met基因型携带者例数较少（正常对照组9例，CAD组7例），我们将Met/Met和Ile/Met基因型携带者合并为一组与Ile/Ile基因型携带者进行比较。冠心病组Ile/Ile基因型携带者其血清TG显著高于Met等位基因携带者（Ile/Met 和Met/Met型者）（2.64±0.54mmol/L vs 1.98±0.36mmol/L，P＜0.05）。正常对照组中，Ile/Ile基因型携带者与Met等位基因携带者血脂及载脂蛋白水平的差异无统计学意义。
3 讨论
冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary atherosclerotic heart disease)简称冠心病,其病理基础是冠状动脉粥样硬化导致官腔狭窄，高脂血症是冠心病的重要危险因素之一。本研究从apoL-I基因变异的角度探讨该基因变异是否与冠心病有关联。
ApoL-I基因定位于第22号染色体的长臂22q12.1-13.1区域,全长约1.8kb,其编码蛋白质为413个氨基酸。蛋白质二级结构中含有4个脂质结合的两性α螺旋结构，在血浆中具有对HDL的高亲和性 [2]。其外显子7 Ile244Met位点是apoL-I基因常见的多态位点。
本研究未发现apoL-I基因Ile244Met多态性对正常人群血脂及载脂蛋白水平存在影响。但CHD组Ile/Ile基因型携带者血清TG水平显著高于Met等位基因携带者（2.64±0.54mmol/L vs 1.98±0.36mmol/L, P＜0.05）。在本研究中，是否Lys/Lys基因型携带者存在冠心病的易患因素，尚待进一步研究。
上述结果表明，apoL-Ⅰ基因Ile244Glu位点多态性与中国人冠心病患者血清TG水平相关联。
参考文献
[1] 何成毓,林玲,李洁琪等.冠心病患者载脂蛋白AV与脂蛋白(a)关系研究[J].临床心血管病杂志,2011,27(4):291-293.
[2] 张勇,卢群,鲁敏等.冠心病肥胖及非肥胖患者血白细胞水平变化及临床意义[J].西安交通大学学报（医学版）,2011,32(6):708-712.
论文作者:李琴 王倩 李玉玲 冯海斌 王晓丽 段立萍 信栓力 刘吉祥
论文发表刊物:《中国医院药学杂志》2016年9月
论文发表时间:2016/10/28
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