何昕 黄洋洋 冯海军 杨巨庆
（哈尔滨医科大学附属第五医院儿科 黑龙江大庆 163000）
【中图分类号】R363 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2019）06-0149-02
新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）是围生产期窒息及缺氧所导致的缺氧缺血性脑组织损伤。研究显示，HIE患病率为3‰，其中死亡率高达15%～20%[1]，因此探究HIE的发病机制关键且必要。
目前发现，90%的HIE发生在围产期，各种原因可引起母体与胎儿之间血液循环及气体交换障碍、导致围产儿血氧浓度降低，引起HIE[2]。当前其病理机制主要包括：能量代谢障碍学说、氧自由基损伤、钙离子超载理论、兴奋性氨基酸的毒性作用等 [3]。
血管内皮细胞位于血管的最内层，是血液与血管平滑肌之间的一层半通透性屏障，是血流动力学功能及细胞增生调节的重要因素[4]。血管内皮细胞在保持血流通畅、调节血管通透性以及调控血管平滑肌细胞生长等方面发挥关键作用。循环中NO含量、内皮细胞数量及eNOS等常用于反映血管内皮功能及内皮损伤的指标。
血同型半胱氨酸是评估心血管疾病风险的指标之一，研究发现HIE患者血同型半胱氨酸水平显著升高[5]。血同型半胱氨酸可通过产生甲基诱发甲基化反应，引起血管内皮损伤[6]。
1.材料方法
1.1 材料
7日龄wistar大鼠，雌雄不限，体重16.8±2.1g，由哈尔滨医科大学大庆校区实验动物中心提供。根据HIE的临床诊断标准选择2012年1月至2015年12月本院收治的80例HIE患儿[7]。选择同期住院的无窒息史及神经系统症状的78例新生儿为对照。
1.2 方法
新生7日龄wistar大鼠，麻醉后仰卧固定，游离左侧颈总动脉结扎，手术后缝合颈部切口，恢复2小时后再置于缺氧环境中，通入8%02+92%N2的混合气体，持续通气2小时后取出。假手术组只游离而不结扎动脉，不用放置于缺氧箱中。
1.3 血清同型半胱氨酸检测
取HIE组和对照组患儿血清，患儿家长知情同意。wistar大鼠分别于术后24h取血，分离血清用色谱法测定其中同型半胱氨酸含量。
1.4 脑血管内皮细胞氧化应激指标的测定
取小鼠脑组织，分离颈内动脉，大脑中动脉等血管，离心取上清，按试剂盒说明分别检测小鼠脑血管SOD、GSH、MDA、LDH的水平。
1.5 NO和eNOS水平检测
根据NO含量测定试剂盒说明书，取小鼠脑血管组织匀浆，按照公式计算出组织中的NO含量。将匀浆，通过western blot检测脑组织中eNOS的蛋白表达。
1.6 统计分析
运用软件SPSS18.0对数据进行方差分析，差异显著时P＜0.05，差异极显著时P＜0.01，结果以（x-±s）表示。
2.结果
2.1 血清同型半胱氨酸检测结果
通过试剂盒检测血清中Hcy含量，结果显示，与对照组相比，缺血缺氧组小鼠血清中Hcy含量含量显著升高（P＜0.01），HIE患者血清Hcy含量高于对照组。
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2.2 小鼠脑组织氧化损伤指标
我们发现，与对照组相比，模型组沙鼠的SOD和LDH的活性，GSH含量显著降低（P＜0.01），MDA的含量显著升高（P＜0.05），以上结果表明，缺氧缺血诱导小鼠脑血管氧化应激损伤。
2.3 小鼠脑血管NO含量及eNOS表达
结果显示，HIE组小鼠脑血管组织的NO含量显著降低（P ＜0.05），western blot结果显示，HIE组小鼠脑血管组织的p-eNOS表达显著下调（P＜0.01）HIE患者血清NO含量低于对照组；结果表明，缺氧缺血后脑血管内皮细胞损伤。
2.4 HIE组与对照组患儿血清NO含量比较
本文结果显示HIE患儿血清Hcy、NO含量较对照组均有增高，差异有统计学意义（P＜0.01），模型小鼠较对照组SOD和LDH的活性，GSH含量显著降低，MDA的含量显著升高（P＜0.01），p-eNOS的表达显著下调，模型组小鼠脑组织中NO含量显著降低（P＜0.01）。
3.结论
HIE导致新生儿死亡和神经系统发育缺陷的重要病种[7]，更甚者出现癫痫、智力落后、脑性瘫痪等，因此探究HIE的病理生理机制对临床的诊疗意义重大。
Hcy与循环功能障碍及血管内皮损伤有密切的关系。目前关于高Hcy血症与各种疾病的研究较多，VanBeynum等研究显示，高Hcy血症可增加儿童脑损伤的风险[8]，然而Hcy与HIE的相关性研究较少。
Hcy可损伤血管内皮细胞，研究显示同型半胱氨酸可导致血管内皮细胞内胆固醇生成和沉积增加，进而影响血管内胆固醇的代谢，形成粥样硬化斑块[9]。
本研究结果显示，HIE患者及新生缺氧缺血小鼠血清Hcy增高，脑血管内皮细胞NO减少，eNOS表达降低，提示内皮细胞功能障碍。因此，本研究初步结果显示，血清高Hcy可能会导致内皮细胞功能障碍，进而加重HIE患者的脑损伤，对HIE的临床诊疗具有重要的指导意义。
【参考文献】
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[9]鄢高亮，孔文杰，王栋.血浆同型半胱氨酸水平对急性冠状动脉综合征患者介入治疗后对比剂肾病的影响[J].中华心血管病杂志,2016，44（1）:32-37.
黑龙江省卫生厅指导性项目，编号：2005-116.
论文作者:何昕,黄洋洋,冯海军,杨巨庆
论文发表刊物:《心理医生》2019年第6期
论文发表时间:2019/4/1
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