宁夏回族自治区石嘴山市第二人民医院病理科 宁夏石嘴山 753000
【摘 要】目的 探讨改良后快速冰冻切片制片方法的切片质量和效果，为提高术中快速冰冻切片质量寻求一种全新的技术与方法。方法 选择2015年1月-2015年12月我院病理科采用Shandon As 620 E型恒温箱冷冻切片机对术中切除的甲状腺、乳腺、肝脏、胆囊等2800例新鲜标本组织作为研究对象，按照随机分组的方法分为两组，每组1400例标本组织，其中1400例标本组织采用传统的常规冰冻切片取材、普通胶水包埋、切片、染色后封片的方法制作切片标本为对照组；另外1400例标本组织在传统制片的基础上，对标本的固定液进行改良采用甲醇和甲醛混合液固定，然后用HE染色，最后用碱水返蓝封片为实验组。比较两组标本制作所花时间、切片制作的效果（包括切片的完整性、形态、染色的效果）、术后诊断的准确性，并对两组数据进行统计学分析。结果 实验组标本制作方法制作的切片所花时间明显低于对照组患者，差异有统计学意义（P＜0.05）；而切片制作的效果包括切片的完整性、形态、染色的效果以及与术后诊断的相符率明显高于对照组制片方法，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 改良后快速冰冻切片制片方法不仅能保证患者术中快速冰冻切片的质量，而且简便快捷，能够快速准确的为外科手术医生提供病理诊断结果，是一种全新的技术和方法，值得推广运用。
【关键词】快速冰冻切片；改良；制片方法；病理诊断
冰冻切片（frozen section）是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断[1]。快速冰冻切片是用于手术中病理诊断的一种方法，病理医生在收到手术标本后约l5分钟之内做出诊断，马上电话告诉手术医生，以便迅速作出下一步治疗决策。病理诊断的正确与否直接关系到手术台上处理患者的下一个步骤[2]。随着时代的变迁，科技的发展，许多年前被认为是非常重要的技术，现在也逐步被淘汰了，这样就决定了病理医生必须具备良好的素质，能够快速熟练地应用冰冻切片技术，并且不断摸索改良冰冻切片技术以达到外科学发展的要求。本研究旨就我院病理科医生在我们的工作实践中不断的摸索，逐渐摸索加上不断的实验，选择2015年1月-2015年12月我院病理科采用Shandon As 620 E型恒温箱冷冻切片机对术中切除的甲状腺、乳腺、肝脏、胆囊等2800例新鲜标本组织作为研究对象，按照随机分组的方法分为两组，每组1400例标本组织，其中1400例标本组织采用传统的常规冰冻切片取材、普通胶水包埋、切片、染色后封片的方法制作切片标本为对照组；另外1400例标本组织在传统制片的基础上，对标本的固定液进行改良采用甲醇和甲醛混合液固定，然后用HE染色，最后用碱水返蓝封片为实验组。比较两组标本制作所花时间、切片制作的效果（包括切片的完整性、形态、染色的效果）、术后诊断的准确性，并对两组数据进行统计学分析。取得一定成绩，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 一般资料
选择2015年1月-2015年12月我院病理科采用Shandon As 620 E型恒温箱冷冻切片机对术中切除的甲状腺、乳腺、肝脏、胆囊等2800例新鲜标本组织作为研究对象，试剂包括：甲醇和甲醛混合液（甲醇10ml、甲醛90ml）、苏木素染色液、伊红、碱水（30-50%肥皂水）、二甲苯、乙醇。
1.2 方法
1.2.1取材，未能固定的组织取材，不能太大太厚，厚者冰冻费时，大者难以切完整，最好为24×24×2mm。
1.2.2包埋，取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴上包埋剂，速放于冷冻台上，冰冻。小组织的应先取一支承器，滴上包埋剂让其冷冻，形成一个小台后，再放上细小组织，滴上包埋剂。
1.2.3切片，将冷冻好的组织块，夹紧于切片机持承器上，启动粗进退键，转动旋钮，将组织修平。调好欲切的厚度，根据不同的组织而定，原则上是细胞密集的薄切，纤维多细胞稀的可稍为厚切，一般在5～10um间。调好防卷板。制作冰冻切片，关键在于防卷板的调节上，这就要求操作者要细心，准确地将其调较好，调校至适当的位置。切片时，切出的切片能在第一时间顺利地通过刀防卷板间的通道，平整地躺在持刀器的铁板上。这时便可掀起防卷板，取一载玻片，将其附贴上即可。应视不同的组织选择不同的冷冻度。冷冻箱中冷冻度的高低，主要根据不同的组织而定，不能一概而论。如：切未经固定的脑组织，肝组织和淋巴结时，冷冻箱中的温度不能调太低，在-10- -15℃左右，切甲状腺、脾、肾、肌肉等组织时，可调在-15～20℃左右，切带脂肪的组织时，应调至-25℃左右，切含大量的脂肪时，应调至-30℃。
1.2.4固定，组织块不须经各种固定液固定，尤其是含水的固定液，在未达到固定前，更不能使用。临床快速冰冻切片，不须要预先固定，一是为了争取时间，二是固定了的组织，反而增加了切片的难度。如果使用未完全固定的组织做冰冻切片，就会出现冰晶。这是因为含水的固定液在组织未经固定前，其中的水份也可渗入到组织中去，当冰冻发生时，这些水份就存留于组织中，形成了冰晶。我们采用甲醇和甲醛混合液（甲醇10ml、甲醛90ml）对标本进行固定。
1.2.5染色，切片固定30秒－1分钟，水洗，染苏木素3－5分钟，分化，于碱水中返蓝20秒，脱水，透明，中性树胶封固。
1.3观察指标 观察两组标本制作所花时间、切片制作的效果（包括切片的完整性、形态、染色的效果）、术后诊断的准确性，并对两组数据进行统计学分析。
1.4统计方法 采用SPSS17.0统计学软件处理，两组计量资料以（x±s）表示，用单因素方差分析；以P＜0.05 为差异有统计学意义。
2结果
2.1实验组标本制作方法制作的切片所花时间明显低于对照组患者，差异有统计学意义（P＜0.05）；而切片制作的效果包括切片的完整性、形态、染色的效果以及与术后诊断的相符率明显高于对照组制片方法，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。
备注：▲表示P<0.05，▲▲表示P<0.01。
3 讨论
传统的病理检查首先需要将切下的病变组织器官作一系列技术处理，包括固定、取材、脱水、浸蜡、包埋、切片和染色等，一般需花费24小时方可完成全部制片过程，然后由病理医生用显微镜观察，并做出诊断，这种检查方法称为常规石蜡切片，是病理检查中最常用的方法。但是，这种方法从外科医生将病变组织切下，到做出病理诊断，前后通常需要3天的时间。有时外科医生希望在手术过程中马上了解病变的性质，以便及时确定手术范围，并做出相应的处理，就要求病理医生在手术过程中做出病理诊断，此时就必须快速切片诊断，快速冰冻切片是目前应用的最广泛的方法。快速冰冻切片是用于手术中病理诊断的一种方法，病理医生在收到手术标本后约l5分钟之内做出诊断，马上电话告诉手术医生，以便迅速作出下一步治疗决策。病理诊断的正确与否直接关系到手术台上处理患者的下一个步骤。冰冻切片病理诊断对手术治疗有重大帮助和指导意义，诊断要力求正确、迅速和可靠。然而，快速冰冻切片要在如此之短的时间内做出诊断，难度相当高，取材有局限性，制作切片的质量也不如常规石蜡切片高。因此，冰冻切片的确诊率比常规切片低，有一定的延迟诊断率和误诊率。为了减少误诊率和提高诊断的效率，我们病理科医生有责任对快速冰冻切片的方法进行改良，寻找一种全新的方法来解决这些问题。对此，我院病理科医生在实践工作中不断摸索，对快速冰冻切片方法不断改良，并经过大量的实验证明此举是有效的。
首先，我们对固定液进行了改良。我们根据各种固定液的性质和特点，经过大量的实验证实，运用甲醇和甲醛混合液（甲醇10ml、甲醛90ml）对标本进行固定[3]。甲醛可以防止水解酶和其他物质的移位、弥散，常用4℃、24小时的甲醛固定能很好地保存酶类，而甲醇对组织具有很强的穿透力，两种固定液混合在一起就可以达到使组织固定均匀、不脱片。另外，冰冻切片附贴于载玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定1分钟后即可染色。以往，为了防止切片脱落，当切片附贴于载玻片后，即用电吹风吹干后再固定。根据实验对比认为这种做法欠妥未经固定的切片，强热作用后，蛋白发生变性，核内含有的物质由于热的作用融合在一起，染色后镜下分辨不出核内的各种物质。冰冻切片附贴于载玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定，这样可以使切片中细胞内各种物质都在没有任何变化的情况下被固定起来，核染色质清晰，核仁明显，其他物质都完好保存[4]。其次，我们改用传统的氨水返蓝为肥皂水返蓝，传统氨水有刺激性气味并有毒，改用肥皂水返蓝不仅可以节约时间，而且效果非常佳。通过我们的改良，表1可见，实验组标本制作的时间缩短了，但是制作的效果和术后的诊断相符率却高了。
4结论
改良后快速冰冻切片制片方法不仅能保证患者术中快速冰冻切片的质量，而且简便快捷，能够快速准确的为外科手术医生提供病理诊断结果，是一种全新的技术和方法，值得推广运用。
参考文献：
[1]栗娜，黄虎，周木秀，制作冰冻切片的质量控制[j]，重庆医学，2007 36（18），1908
[2]胡未鸣，汤建国，苏立众，喉部分切除术术中冰冻切片对预后评估的意义[j]，中国耳鼻咽喉头颈外科，2009 16（5），242
[3]许平，等，快速冰冻切片制备方法的改善[j]郑州大学学报：医学版.2010，45（2）；241-243.
[4]吴春莲，蔡芳，赵斌，等，常见组织快速冰冻切片技术探讨[j]，当代医学，2012，18（28）：146-147
论文作者:陈,贞,夏玉荣
论文发表刊物:《航空军医》2016年第6期
论文发表时间:2016/6/16
标签：切片论文; 冰冻论文; 组织论文; 标本论文; 病理论文; 方法论文; 快速论文; 《航空军医》2016年第6期论文;