余德松1袁大伟2
(1昭通市第一人民医院药剂科云南昭通657000；
2昭通市食品药品检验所云南昭通657000)
作者简介：余德松，男，大学本科，主管药师，从事医院药学工作。【摘要】目的：建立活血消痛颗粒的质量标准。方法：采用薄层色谱法对活血消痛颗粒中当归、苏木进行定性鉴别，并采用高效液相色谱法对方中丹参酮ⅡA进行含量测定研究。色谱柱：Agilent Elipse-C18柱（4.6mm150mm，5μm）；流动相：甲醇-水（75:25）；流速：1.0ml/min；柱温：35℃；检测波长：270nm。结果：薄层色谱斑点清晰，阴性无干扰；丹参酮ⅡA在浓度为2.48-12.40μg/ml范围内呈良好的线性关系，r=0.9998，平均加样回收率为97.84%，RSD=1.98%（n=6）。结论：该方法简便、准确、可靠，可以作为活血消痛颗粒的质量控制方法。
【关键词】活血消痛颗粒；薄层色谱法；高效液相色谱法；丹参酮ⅡAStudy on the Quality Standard of Huoxuexiaotong Granule
Yu DesongYuan Dawei(1The first people's Hospital of Zhaotong City Department of pharmacy; Yunnan, Zhaotong, 657000;2Zhaotong Institute for food and drug control, Yunnan, Zhaotong, 657000)
【Abstract】Objective: To establish quality standards for Huoxuexiaotong granule. Methods: TLC was used to distinguish Danggui, Sumu, HPLC was used for the determination of tanshinone ⅡA. The column was Agilent Elipse-C18 column（4.6mm150mm，5μm）; mobile phase were methanol - water (75:25); the detection wavelength was at 270nm; flow rate at 1.0ml?min-1 and column temperature at 35℃. Results: The TLC spots were clear and negative sample is non-interference; tanshinone ⅡA. show a good linear relationship in the range of 2.48-12.40μg/ml, r = 0.9998, the average recovery was 97.84% with RSD=1.98% (n = 6). Conclusion: The method is simple, accurate, reliable and can be used as quality control for Huoxuexiaotong granule.
【Key words】Huoxuexiaotong granule; TLC; HPLC; tanshinone ⅡA
【中图分类号】R2563【文献标识码】B【文章编号】1003-5028(2013)10-0509-01
活血消痛颗粒为临床效验方剂，由丹参、当归、苏木、木通、萆薢等药物组成。具有活血化瘀、消肿定痛等功效，临床常用于跌打损伤初期、瘀血肿胀疼痛等。通过现代研究将其开发为医院制剂，从而方便临床患者用药。本研究采用薄层色谱法对该制剂中的当归、苏木等药材进行了定性鉴别研究；并采用高效液相色谱法对制剂中的丹参酮ⅡA进行了含量测定研究，从而为更好地控制活血消痛颗粒的内在质量提供参考。
1仪器与试药
Agilent 1100(美国)高效液相色谱仪， Agilent Elipse-C18(4.6mm×250mm,5μm)柱；VWD 检测器，二元梯度泵。硅胶G 薄层板(自制)。
活血消痛颗粒(中试产品，批号：1008001，1008002，1008003)。当归对照药材(120927-200512)、苏木对照药材(121067-200503)，丹参酮ⅡA对照品(110766-200417)均购于中国药品生物制品检定所。
甲醇为色谱纯，水为双蒸水，其它试剂均为分析纯。
2薄层鉴别
2.1当归薄层鉴别:取本品10g，加水50ml使溶解，加入稀盐酸调节PH至2~3，加入乙醚振摇提取3次，每次10ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材1g，加水30ml，加热回流0.5h，滤过，滤液加入稀盐酸调节PH至2~3，同法制成对照药材溶液。再按处方比例，取缺当归的其他各味药，按制备工艺加工制成当归阴性对照样品，按供试品溶液制备方法制成当归阴性对照溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照药材溶液15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯-甲酸-(4:1:0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。
3丹参酮ⅡA的含量测定
3.1色谱条件:色谱柱：Agilent Elipse-C18(4.6mm×250mm,5μm)柱；流动相：甲醇-水（75:25）；流速：1.0ml/min；柱温：35℃；检测波长：270nm。
3.2对照品溶液的制备:精密称取丹参酮ⅡA对照品适量，加甲醇使溶解，制成每1ml含丹参酮ⅡA 6.2μg的对照品溶液，即得。
3.3供试品溶液的制备:取本品10g，研细，混匀，取约1g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，加热回流1小时，密塞，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
3.4阴性干扰试验:按制剂工艺制备处方中除去丹参的阴性对照样品。照3.3项下供试品溶液制备的方法制得供试品阴性对照溶液。精密吸取对照品和阴性对照溶液各10μl，按含量测定项下方法测定，结果显示阴性无干扰。
3.5精密度试验：精密吸取上述丹参酮ⅡA对照品溶液10μl，重复进样5次，测得峰面积积分值，结果RSD=1.32%（n=5）。
3.6稳定性试验:依法制备供试品溶液（批号：1008001），按含量测定项下方法测定5次，每次间隔2小时，结果测得丹参酮ⅡA峰面积积分值RSD=1.80%（n=5），结果表明8小时内稳定。
3.7重复性试验:按拟定的含量测定方法，对同一批样品（批号：1008001）分别制备供试液，测得峰面积并计算含量，RSD=1.2%（n=5）。
3.8回收率试验:取已知含量的样品（批号：1008001），分别精密加入一定量的丹参酮ⅡA对照品，按供试品制备与测定方法，以上述色谱条件，平行做6组，结果见表1。表1丹参酮ⅡA回收率测定结果(%)
样品测定：分别精密吸取对照品溶液与样品供试液各10μl，按上述色谱条件测定，结果见表2。
表2活血消痛颗粒含量测定结果（n=3）
4讨论
4.1活血消痛颗粒为医院临床经验方剂，成分较为复杂。薄层鉴别中曾采用《中国药典》2010年版一部苏木项下鉴别方法试验，结果阴性对照有干扰，在参考相关文献的基础上进行试验，不断调整展开剂，最后采用正文所述方法进行鉴别，色谱斑点清晰，阴性对照无干扰［1~4］。
4.2丹参作为活血消痛颗粒的君药，具有活血祛瘀、调经止痛等功效，.其中主要活性成分丹参酮ⅡA、丹酚酸B等。本研究曾采用《中国药典》2010年版一部丹参项下含量测定方法试验［5］，结果显示丹参酮ⅡA的出峰时间适中，出峰前后无杂质峰的出现，微调流动相比例，丹参酮ⅡA峰形、面积均未变化，可以和复方中其他杂质成分分离开来，阴性无干扰，可以用于活血消痛颗粒中丹参酮ⅡA的含量测定。
参考文献
［1］国家药典委员会．中国药典(一部)［S］．北京：中国医药科技出版社，2010：153.
［2］赵焕新，王元书，刘爱芹，等. 苏木研究进展［J］. 齐鲁药事，2007，26（2）：102105.
［3］陈华，蔡丽云. 舒筋络片薄层色谱鉴别［J］. 中国药师，2008，11（4）：478479.
［4］侯世海，檀香，紫檀香. 降香及苏木的紫外光谱和薄层色谱鉴别［J］. 青海医药杂志，1999，29（10）：5455.
［5］国家药典委员会．中国药典(一部)［S］．北京：中国医药科技出版社，2010：70.
论文作者:余德松1袁大伟2
论文发表刊物:《河南中医》2013年10月第2期供稿
论文发表时间:2014-3-19
标签：薄层论文; 溶液论文; 苏木论文; 阴性论文; 色谱论文; 颗粒论文; 当归论文; 《河南中医》2013年10月第2期供稿论文;