胡克武[1]2000年在《甲肿方治疗非毒性甲状腺肿的临床疗效与机理研究》文中认为本课题研究的非毒性甲状腺肿指单纯性甲状腺肿和甲状腺腺瘤，是临床常见的内分泌系统疾病，由精神、环境、遗传等因素引起，以甲状腺弥漫性或结节性肿大而不伴有甲亢为特征。甲肿方是导师李任先教授的经验方，临床观察对甲状腺肿有良好的疗效。为系统总结导师治疗甲状腺肿的经验，探讨甲肿方的作用机制，在回顾古今文献的基础上，本课题系统地观察了该方的临床疗效，并研究其对甲状腺肿大鼠甲状腺功能、显微及超微结构、甲状腺细胞增殖与凋亡及其凋亡相关调控基因蛋白表达的影响，以期为今后进一步的研究奠定基础。理论研究 非毒性甲状腺肿属中医“瘿”病范畴，其中单纯性甲状腺肿相当于“气瘿”，甲状腺腺瘤相当于“肉瘿”。秦汉时中医便认识到瘿病发病与水土有关，并用海藻、昆布等含碘中药进行治疗。唐宋时期进一步认识发病与饮食、情志失调有关，病理环节主要为气滞和痰凝，治法采用疏肝理气、解郁消肿等。此期将瘿分为石、肉、筋、血、气瘿五类，还创造性地将动物甲状腺作为治疗药物。明清时期已积累了大量的治瘿方剂。西医对本病的治疗存在缺陷，如补碘疗效不高；甲状腺激素疗效尚可，但剂量不易掌握、易导致甲亢；手术疗效好，但术后常需长期甚至终身服用甲状腺激素来预防复发或维持甲状腺功能。因此寻找更安全、有效和方便的甲状腺肿治疗药物仍是一个有意义的课题。近十年的研究报道显示，许多中药方剂具有较好的疗效，但大多数研究为低层次重复，缺乏科学的设计，结论的说服力不强。博士学位论文·甲肿方沽疗非霉性甲状回肿的临床疗效与机理研究 临床研究 共有28例自愿受试者完成为期2至6个月的临床观察，均诊断为单纯性甲状腺肿或甲状腺腺瘤（气樱、肉樱），且经彩色B超证实甲状腺弥漫性肿大，或l和有囊性、实质性或混合性结节，排除甲亢及恶性肿瘤。按辨证辨病相结合的原则，辨证分为脾虚痰凝、肝郁气滞痰凝和其它型，分别给予甲肿方1号、甲肿方＊号以及两方合用进行治疗。另选取16例同期接受L－T．治疗的病例为对照。结果甲肿方组临床治愈忙．86％、显效32．N％、总有效8929Oh；而L－L组治愈31．25％、显效18．75％、总有效62．50％。临床疗效比较，总有效率之间差异有显著性意义0＜0刀5人甲肿方组11例、卜L组6例完成6个月随访，前组复发 2例，后组复发 3例，复发率甲肿方组低于 L－T4组，差异有显著意义o叱刀5人观察衰明甲肿方无毒副作用。本研究亦提示，甲肿方能升高血 T4、T3、FT3，降低 TSH，但作用不如 L·T4明显。 实验研究 取56只大鼠，每日灌服丙基硫氧啼唆，共6周。其中20只从第ZI天，同时沼服甲肿方，共3周。每周处死大鼠一批。另取18只大鼠为正常对照，每日用自来水灌胃1次，分批处死。以戊巴比妥钠麻醉，眼眶采集血样，剥取甲状腺组织，电子天平称取湿重。甲状腺标本分为二份，一份置于 10％甲醛固定，用于光镜观察和免疫组化检测；一份于戊二醛固液中固定，用于电镜观察。结果显示，造模大鼠甲状腺湿重约为正常大鼠的吕倍；T3、T4、FT3降低和TSH升高；FSS基因蛋白表达增加以及bel正基因蛋白表达减少；且出现明显的显极及超微结构的病理性改变。而甲肿方治疗大鼠甲状腺湿重较模型大鼠减轻 213；T沪 T4、FT3、TSH以及显微、超微结构趋子正常；甲状腺细胞增殖与凋亡比值增大并接近正常；Fas基因蛋白表达先继续增加，后渐降低，而比．2一2 一一中文扬耍基因蛋白表达先继续降低，后渐增加，最后两者均接近正常。 结 论 甲肿方临床疗效较 L14高，作用较 L－T4持久，无副作用，对患者甲状腺激素有一定的调节作用。甲肿方还可使甲肿大鼠甲状腺明显缩小，使其甲状腺显微、超微结构趋于正常：可使甲肿大鼠＊、L、＊L升高及TSH降低；抑制细胞增殖，促进细胞凋亡，调节增殖与凋亡之间的动态平衡；促进凋亡受体FSS基因蛋白的表达和抑制凋亡抑制基因belZ蛋白表达。
王秋虹[2]2016年在《林兰教授治疗甲亢经验及甲亢宁胶囊调控FRTL-5细胞ERK通路的机制研究》文中指出甲状腺机能亢进症(以下简称甲亢)是当前最常见的甲状腺疾病之一。口前该病的发病机制尚不明确,尚缺乏针对性的治疗药物,常规抗甲状腺药物无法解决甲状腺细胞过度增殖和甲亢复发问题。林兰教授从医50余载,对甲亢的治疗等方面认识深刻,研发了许多有效的治疗方剂,中药甲亢宁胶囊(以下简称“甲亢宁)即是其防治甲亢的临床经验的精髓之一。本论文首先对导师林兰教授治疗甲亢的经验进行了系统的整理,然后以体外培养的FRTL-5甲状腺细胞作为研究对象,从干扰和过表达两个方面,探讨甲亢宁通过调控ERK信号通路,抑制甲状腺细胞增殖、促其凋亡从而调节甲状腺细胞生长的可能分子机制。1临床研究目的：基于导师林兰教授治疗甲亢的临床资料,通过数据分析,总结其治疗甲亢的方药运用规律。结合与导师交流,人机结合,以人为主,总结其治疗甲亢肝损害、甲亢合并白细胞减少症、甲亢合并突眼、甲亢伴月经病等的临床经验。为总结和提炼甲亢中医药防治规律提供循证依据。方法：将2013年12月-2015年12月林兰教授在广安门医院内分泌门诊确诊的160例甲亢患者的437诊次的病例录入EXCEL2007表格。利用SPSS19.0软件、weka3.7数据挖掘软件、Liquorice数据挖掘软件,运用频数分析、聚类分析、关联规则、复杂网络等方法分析林兰教授处方用药规律。通过与导师交流,整理导师治疗甲亢、甲亢合并肝损害、甲亢合并白细胞减少症、甲亢合并突眼、甲亢伴月经病等的临床经验。结果：(1)筛选出符合标准的甲亢病例160例,得到治疗本病所涉及的中药167味,使用总频次为9032次,其中频数在10次以上的药物共有64味,总频数为8634次。其中生龙骨、煅磁石、珍珠母、麦冬、酸枣仁、五味子、夏枯草、法半夏、山慈菇等是林老治疗甲亢的核心药物。(2)将林教授437诊次治疗甲亢的处方中所有中药按照药物出现的总频次进行排序,频次超过10次的作为高频中药。参考第七版《中药学》教材及《中华本草》,将69味高频中药按照功效进行分类,并将各类中药中的所有药物使用频次加和并排序。统计结果显示,林兰教授治疗甲亢使用最多的是补虚药、安神药,其次为清热药、活血化瘀药、平肝息风药等。在补虚类药物使用上,以用补血药和补阴药为主,补气药和补阳药为次。林教授治疗甲亢常用具有滋阴潜阳、安神功效的中药。(3)采用SPSS19.0软件对高频中药进行聚类分析,结果显示林兰教授的治疗甲亢的处方分为九类：益母草、丹皮、山萸肉、紫河车、当归；盐杜仲、泽泻、炒白术、覆盆子、益智仁、香附、黄连、木香、红花、川芎、檀香、生黄芪、制远志、决明子：菌陈、黄柏、生牡蛎、珍珠母；白芍、生龙骨、五味子、夏枯草、麦门冬、太子参、柏子仁、酸枣仁；山慈菇、牛蒡子；枸杞子、煅磁石、钩藤；郁金,元胡；半夏,枳实。(4)采用Liquorice数据挖掘软件对高频中药进行分析,结果显示林兰教授的治疗甲亢的核心处方以滋阴潜阳、化痰散结、益气养阴功效为特点,生龙骨、煅磁石、夏枯草、枸杞子、钩藤、太子参、麦冬、白芍、五味子、生地、熟地、柏子仁、酸枣仁是最常见的方剂组合。(5)采用weka3.7数据挖掘软件,运用关联规则方法分析常用药对,并结合与导师交流,总结出林教授临床常使用的药对为：熄风潜阳组合—生龙骨、煅磁石；化痰散结组合—山慈菇、牛蒡子、浙贝母、连翘；疏肝理气组合—柴胡、白芍；理气化痰组合—半夏、枳实、郁金、元胡；益气养阴组合—太子参、麦冬、五味子；健脾燥湿组合—苍术、厚朴；安神组合—生龙骨、生牡蛎、煅磁石、珍珠母；酸枣仁、柏子仁；健脾化湿组合—茯苓、泽泻；滋补肝肾组合—覆盆子、益智仁、杜仲；养肝明目组合—枸杞子、决明子；祛风明目组合—青葙子、密蒙花。(6)通过与导师交流,总结了导师治疗甲亢分气滞痰凝、阴虚阳亢、阴虚火旺、气阴两虚四型论治,重视化痰活血,强调配合西药治疗。导师治疗甲亢合并突眼,强调辨主症论治。治疗甲亢合并肝损害,提倡分期论治。治疗甲亢伴白细胞减少症,以益气滋阴养血为治疗大法。治疗甲亢伴月经病,应用甲状腺药物维持治疗的同时,运用中药人工周期疗法。结论：本课题首次利用频数分析、聚类分析、关联规则、复杂网络等数据挖掘技术,对林兰教授治疗甲亢的临床用药规律进行了分析,并结合口传心授,总结出了林兰教授对甲亢、甲亢突眼、甲亢合并肝损害、甲亢合并白细胞减少、甲亢伴月经病的处方用药规律和治疗体会。2实验研究目的：从ERK信号传导通路探讨中药甲亢宁胶囊治疗甲亢的分子机制。方法：以原代培养的FRTL-5细胞为研究对象,采用CCK-8法筛选出甲亢宁抑制FRTL-5细胞增殖的最佳浓度,作为干预FRTL-5细胞的药物浓度。实验共设立对照组(Con)、甲亢宁组、甲亢宁+ERK1/2-siRNA组、siRNA阴性序列组(NO)、siRNA干扰组、过表达慢病毒组、甲亢宁+过表达慢病毒组、空病毒组(NC)等组别,分别采用CCK-8法检测甲亢宁对各组细胞增殖情况的影响、放免法测定各组细胞上清中的cAMP释放量、AV/PI双染法测定各组细胞凋亡率、Western Blot法以及RT-qPCR法观察ERK通路上增殖、凋亡相关基因(c-Raf、 p-ERK1/2、ERK1/2、Caspase-9、CyclinD1、Bcl-2、Bax)mRNA和蛋白表达的变化。以ERK1/2为切入点,利用RNAi技术阻断ERK信号传导通路,并应用慢病毒载体对ERK信号传导通路进行过度活化,从ERK1/2基因沉默和过表达两方面研究甲亢宁调控FRTL-5细胞ERK通路的机制。结果：(1)本实验采用原代培养出的FRTL-5细胞,冻存了足够的细胞,为后续的实验研究奠定了基础。(2)本实验采用CCK-8法检测法观察出不同甲亢宁浓度、不同干预时间的FRTL-5细胞增殖情况,经过重复实验,最终确定以5.438mg/ml的含甲亢宁的F12完全培养基干预的第24h作为FRTL-5细胞的干预浓度最为适宜。(3)采用CCK-8法证实了甲亢宁对FRTL-5细胞增殖具有抑制作用。(4)采用Annexin V/PI双染法检测了甲亢宁对转染ERK1/2-siRNA和感染ERKl/2过表达慢病毒的FRTL-5细胞凋亡的影响,结果显示,与对照组相比,甲亢宁组细胞发生凋亡(P<0.01),经ERK1/2-siRNA干扰后FRTL-5细胞发生凋亡,甲亢宁协同组细胞凋亡更加显著(P<0.05),ERK1/2-siRNA组、ERK1/ 2-siRNA阴性序列组的凋亡率与对照组相比增加但无统计学意义。与甲亢宁组相比,甲亢宁+ERK1/2-siRNA组、甲亢宁+ERK1/2慢病毒组的细胞凋亡率差异无统计学意义,其余各组的细胞凋亡率与甲亢宁组相比差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与ERK1/2-siRNA阴性序列组相比,甲亢宁+ERK1/2-siRNA组细胞的凋亡率明显升高(P<0.01)。与空病毒组相比,甲亢宁组、甲亢宁+ERK 1/2-siRNA组的凋亡率明显升高(P<0.01)。(5)采用放免法测定各组细胞上清中的cAMP释放量,与对照组相比,ERK1/2-siRNA组、ERK1/2-siRNA阴性序列组的cAMP释放量无显著差异,其余各组的cAMP释放量与对照组相比,均有所降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),其中甲亢宁组的cAMP释放量降低最为显著。与甲亢宁组相比,对照组、ERK1/2-siRNA组、ERK1/2-s iRNA阴性序列组的cAMP释放量差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。(6)RT-qPCR法检测结果显示,与对照组相比,甲亢宁组、ERK1/2-siRNA组、甲亢宁+ERK1/2-siRNA组的c-Raf、ERK1、ERK2、CyclinD1、Bc1-2 mRNA表达量均显著降低(P<0.01)；甲亢宁组的BaxmRNA、Caspase-9mRNA表达量增高但无统计学意义,ERK1/2-siRNA组、甲亢宁+ERK1/2-siRNA组的BaxmRNA、Ca spase-9mRNA表达量显著增高(P<0.01)；与对照组相比,过表达慢病毒组、甲亢宁+慢病毒组的c-Raf、ERK1、ERK2、Bax的]mRNA表达量明显增高(P<0.01),CyclinD1mRNA、Bcl-2mRNA的表达量明显降低(P<0.01)。(7)Western Blot法检测结果显示,甲亢宁组、ERK1/2-siRNA组、甲亢宁协同组的c-Raf、p-ERK1/2、ERK1/2、CyclinD1、Bcl-2的蛋白表达均显著下调(P<0.01)；甲亢宁组的Caspase-9蛋白表达量增高(P<0.01),ERKl/2-siRNA组、甲亢宁协同组Bax、Caspase-9的蛋白表达显著上调(P<0.01)；与对照组相比,过表达慢病毒组、甲亢宁+慢病毒组的c-Raf、p-ERK1/2、ERK1/2、Bax的蛋白表达明显上调(P<0.01),CyclinD1mRNA、Bcl-2的蛋白表达明显下调(P<0.01)。结论：ERK1/2-siRNA可以协同甲亢宁所致的抑制FRTL-5细胞增殖、促其细胞凋亡的作用；ERK1/2的过表达使FRTL-5细胞获得更高的增殖与抗凋亡能力,对甲亢宁的抗药性显著增加；甲亢宁对ERK1/2的磷酸化起阻断作用,甲亢宁通过调控ERK1/2的表达从而调节FRTL-5细胞中c-AMP、c-Raf、Bax、Bcl-2. Caspase-9 及 CyclinD1的表达,而抑制FRTL-5细胞增殖、促进其凋亡,从而改善甲状腺细胞动力学平衡,调控甲状腺细胞生长。
张奋[3]2008年在《化痰散结中药甲肿消对甲状腺细胞凋亡影响的实验研究》文中研究表明目的甲状腺肿大广泛存在于各种类型的甲状腺疾病中,主要是由于甲状腺细胞增殖＞凋亡而引起的。中医治疗甲状腺肿大具有几千年的历史,而化痰散结法为基本治法,在临床上有较好的疗效。化痰散结中药分为富碘中药和非富碘两类,目前对非富碘中药作用机制研究尚少,有待进一步的阐明。通过研究化痰散结组方中药甲肿消(组方:夏枯草等)对甲状腺细胞凋亡的影响,探讨其治疗甲状腺肿大的作用机理,以期为中医临床应用化痰散结法治疗甲状腺肿大提供基础研究支撑。方法制备甲肿消含药动物血清,干预甲状腺FRTL细胞株,研究含药血清对FRTL细胞株凋亡的影响。实验共分六组:A:正常组、B:空白血清对照组(1%空白血清)、C:小剂量组(1%含药血清)、D:中剂量组(5%含药血清)、E:大剂量组(10%含药血清)、F:谷光甘肽(GSHNO)诱导凋亡对照组(2%的GSHNO)。收集各组细胞,分别提取RNA和蛋白。采用实时荧光定量PCR法检测Bax、Bcl-2的mRNA表达,Western-Blot免疫印迹法检测其蛋白表达情况。采用SPSS11.5软件分析各组细胞Bax、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达数据,统计方法主要包括单因素方差分析、LSD-t检验、Dunnett-t检验、Tamhane检验。结果甲肿消大剂量和中剂量组能使甲状腺细胞促凋亡基因Bax的mRNA和蛋白的表达水平明显升高;各中药组Bcl-2的mRNA和蛋白表达未见统计学差异性;各中药组Bax/Bcl-2比值均有升高趋势,中剂量组差异显著(p＜0.05);GSHNO诱导凋亡对照组的Bax mRNA和蛋白表达以及Bax/Bcl-2比值均明显升高。结论化痰散结中药甲肿消有促进甲状腺细胞凋亡的作用,可以上调促凋亡基因Bax的表达,提示甲肿消治疗甲状腺肿大可能是通过促进甲状腺细胞凋亡而实现,而Bax可能是其主要作用位点。
李楠[4]2017年在《贝牡莪消中药复方对FRTL-5细胞增殖与凋亡影响的实验研究》文中提出研究目的:利用体外细胞培养的研究方法,从细胞水平观察贝牡莪消中药复方对体外细胞培养的FRTL-5细胞增殖和凋亡的影响,探讨以"活血行气,化痰散结"为原则创制的贝牡莪消中药复方对甲状腺肿大的作用机制。研究方法:1、细胞增殖抑制实验对照组为正常L-15完全培养基;实验组分别为浓度为1.Omg/ml、2.Omg/ml、5.0mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml 的贝牡莪消培养液。取对数生长期的FRTL-5细胞,接种在96孔板中,加入不同含药浓度的培养基,于24h、48h观察细胞增殖状态,采用CCK-8检测法在酶标仪450nm波长下测定吸光度值(OD值).计算贝牡莪消中药复方对FRTL-5细胞生长抑制率。2、Bax,Bcl-2的mRNA水平检测收集各组细胞,提取RNA,采用实时荧光定量PCR法检测Bax,Bcl-2的mRNA表达。采用SPSS 20.0软件分析不同浓度贝牡莪消中药复方在不同时间对FRTL-5细胞增殖抑制情况及各组细胞Bax,Bc l-2 mRNA的表达数据。结果:1、采用CCK-8检测法测得不同浓度贝牡莪消培养液对FRTL-5细胞增殖具有抑制作用。2、贝牡莪消中药复方能使FRTL-5细胞促凋亡基因Bax的mRNA表达水平明显升高,尤其以浓度为15mg/ml和20mg/ml的贝牡莪消培养液效果明显,以20mg/ml差异最为显著(p<0.05),贝牡莪消中药复方能使甲状腺细胞抗凋亡基因Bcl-2的mRNA表达水平下降,以浓度为15mg/ml的贝牡莪消培养液效果最为明显。结论:贝牡莪消中药复方有抑制FRTL-5细胞增殖及促进FRTL-5细胞凋亡的作用,可能是通过上调促凋亡基因及下调抗凋亡基因以达到促进甲状腺细胞凋亡的目的,提示贝牡莪消中药复方治疗甲状腺肿大的机制可能是通过抑制甲状腺细胞增殖及促进甲状腺细胞凋亡而实现。
参考文献：
[1]. 甲肿方治疗非毒性甲状腺肿的临床疗效与机理研究[D]. 胡克武. 广州中医药大学. 2000
[2]. 林兰教授治疗甲亢经验及甲亢宁胶囊调控FRTL-5细胞ERK通路的机制研究[D]. 王秋虹. 中国中医科学院. 2016
[3]. 化痰散结中药甲肿消对甲状腺细胞凋亡影响的实验研究[D]. 张奋. 中国中医科学院. 2008
[4]. 贝牡莪消中药复方对FRTL-5细胞增殖与凋亡影响的实验研究[D]. 李楠. 黑龙江中医药大学. 2017
标签：中医学论文; 甲状腺论文; 细胞凋亡论文; 对照组论文; 甲亢论文; 细胞增殖论文; 细胞毒性论文; 药品论文; bcl-2论文; bcl-2蛋白论文;