【摘要】 目的：探讨VGLL4、YAP蛋白在胃癌组织中表达的意义及其相关性。方法：采用免疫组织化学SP法检测183例胃癌组织中VGLL4，YAP蛋白的表达情况, 分析其表达与胃癌临床病理参数的关系，判断患者预后的相关性。结果：VGLL4、YAP的阳性表达主要位于细胞核，少数在胞浆表达。VGLL4蛋白在胃癌组织中的表达减少，且与浸润深度，淋巴结转移和TNM分期呈负相关。YAP在胃癌组织中表达增加，且与患者年龄、肿瘤分化、浸润深度，淋巴结转移和TNM分期呈正相关。结论：VGLL4在胃癌组织在中呈明显下降趋势，且与肿瘤发展和恶性程度呈负相关，是潜在的抑癌蛋白。YAP是原癌蛋白，在胃癌组织中表达增高，与肿瘤发展和恶化呈正相关。
【关键词】 胃癌 免疫组化 VGLL4 YAP
胃癌是一种常见的消化道恶性肿瘤，在世界范围内发病率居第4位，死亡率居第5位【1】。在我国，每年胃癌新发病例40万例，死亡约35万例，新发和死亡均占全世界胃癌病例的40%【2】。胃癌可发生于任何年龄，但以40～60岁多见，近年来有年轻化的趋势，且早期症状不明显，发现时多数已到晚期，预后较差，5年生存率仅为30-40%，是一种严重威胁人类身体健康的疾病【3】。因此，进一步研究胃癌发生的分子机制，对于提高胃癌的早期诊断，及时治疗及准确的判断预后，制定合适的治疗方案尤为重要。Hippo 信号通路是近年发现的重要抑癌通路，原癌蛋白YAP 是其下游主要的效应分子，它的异常表达与胃癌、肺癌等多种癌症的“生死存亡”息息相关，是肿瘤治疗的潜在分子靶点，因此靶向YAP 的抑制剂可能会更有效直接地纠正失调的Hippo 信号通路，杀死肿瘤。转录辅助因子退变样蛋白4（VGLL4）是最新发现的原癌蛋白YAP 的一个“致命对手”， VGLL4 能抢先一步控制YAP 的活性“开关”，从而抑制肿瘤细胞生长，为胃癌等肿瘤治疗提供了新的策略和途径【4-5】。
本研究以我科近年来确诊的183例胃癌患者为研究对象，按性别，年龄，肿瘤大小、有无淋巴结转移、有无远处转移及肿瘤分期等不同预后因素进行分组，分别检测癌组织及周围正常组织中VGLL4、YAP的表达情况，判断VGLL4、YAP的表达与胃癌患者预后的相关性，从而为胃癌的治疗提供新的思路。
1 材料与方法
1.1 材料
选自沧州市人民医院病理科2011年6月至2015年6月库存胃癌患者的石蜡包埋组织183例，重新制备4μm切片，HE染色，由两名有经验的诊断医师进行审核及组织学分型。其中女性54例，男性129例，，年龄24-89岁，平均60.5岁，组织学分型及临床分期不等。
1.2 方法
1.2.1 免疫组织化学方法 兔抗人YAP多克隆抗体，VGLL4单克隆抗体（bs-3605R，bs-9185R），均购自北京博奥森生物技术有限公司。免疫组织化学SP法严格按照试剂说明的要求进行，YAP一抗稀释浓度为1：100，VGLL4一抗稀释浓度为1：200，用已知阳性组织切片做阳性对照，用PBS代替一抗做阴性对照，同时每例取一张切片做HE染色观察形态。
1.2.2 结果判定标准 YAP，VGLL4蛋白着色部位为胞核，少数病例可见胞浆着色。采用阳性细胞比例和着色强度两项计分法综合评定阳性结果，即首先将染色强度打分：0分为无色，1分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色。将阳性细胞百分比分成5级：无阳性细胞为0分，阳性细胞《25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分。着色强度积分和数量积分相加：0分为（﹣），2～3分为（±），4～5分为（﹢），6～7分为（﹢﹢），其中（﹢）（﹢﹢）判读为阳性。
1.3统计学分析
采用SPSS13.0统计学软件，运用χ2检验进行统计学分析。
2 结果
2.1 YAP，VGLL4阳性免疫反应定位 YAP蛋白在胃癌组织中主要在胞核和（或）胞质表达，呈棕黄色颗粒，小部分胃癌组织及周围正常胃粘膜组织中未见表达。VGLL4蛋白在周围胃粘膜组织中主要在胞核表达，呈棕黄色颗粒，在部分胃癌组织中表达减少甚至无表达（图1）。
图1 YAP（1A、1B）、VGLL4（2A、2B）在正常胃黏膜及胃癌组织中的表达（SP法 x 400）
2.2 YAP，VGLL4蛋白表达的相关性及与胃癌临床病理参数的关系VGLL4蛋白在胃癌组织中的表达减少，且与浸润深度，淋巴结转移和TNM分期呈负相关。YAP在胃癌组织中表达增加，且与患者年龄、肿瘤分化、浸润深度，淋巴结转移和TNM分期呈正相关（表1）。
表1 YAP，VGLL4蛋白表达的相关性及与胃癌临床病理参数的关系
1讨论
Hippo 信号通路是近年发现的重要抑癌通路，原癌蛋白YAP 是其下游主要的效应分子，正常情况下，YAP是不表达或低表达的，通路中的一些分子通过一系列的磷酸化来抑制YAP的表达，一旦上游或下游分子发生突变，这些分子就会激活原先不表达的YAP，作为转录共激活因子与TEAD1结合诱导靶基因表达，从而发挥调控细胞增殖和凋亡，上皮间质化转移与癌变的作用，产生肿瘤【6、7，9】，因此YAP蛋白达与胃癌、肺癌等多种癌症的“生死存亡”息息相关，是肿瘤治疗的潜在分子靶点，因此靶向YAP 的抑制剂可能会更有效直接地纠正失调的Hippo 信号通路，杀死肿瘤。转录辅助因子退变样蛋白4（VGLL4）是最新发现的原癌蛋白YAP 的一个“致命对手”， VGLL4 能抢先一步控制YAP 的活性“开关”，从而抑制肿瘤细胞生长，为胃癌等肿瘤治疗提供了新的策略和途径。研究人员发现，VGLL4 在胃癌组织中明显减少，且与肿瘤的发展及恶化明显负相关，是潜在抑癌蛋白，且癌细胞对于该多肽抑制剂的敏感性与癌细胞本身的YAP/VGLL4 比率成正相关【8】。但目前在国内研究甚少，我省还未有相关方面的报道。
本实验研究证实，VGLL4蛋白在胃癌组织中的表达减少，且与浸润深度，淋巴结转移和TNM分期呈负相关。YAP在胃癌组织中表达增加，且与患者年龄、肿瘤分化、浸润深度，淋巴结转移和TNM分期呈正相关。本课题研究成功进一步阐述VGLL4、YAP在胃癌组织中的表达情况，为胃癌及其相似肿瘤患者提供新的治疗思路，准确判断胃癌患者的临床预后，指导术后临床治疗，减少过度治疗及低治疗，提高患者的生活质量，促进康复，具有重要的临床及社会意义。
参考文献：
【1】JEMAL A,BRAF F,CENTER MM,et，al.Global cancer statistic[J].CA Cancer J Clin，2011,61（2）：69-90.
【2】中华医学会消化内镜学分会，中国抗癌协会肿瘤内镜专业委员会，中国早期胃癌筛查及内镜诊治共识意见（2014年，长沙）[J].中华消化杂志，2014,34（7）：433-448.
【3】孙秀娣，牧人，周有尚，等.中国胃癌死亡率20年变化情况分析及其发展趋势预测[J].中华肿瘤杂志，2004,26（1）：4-9.
【4】张靖，朱金水.Hippo-YAP信号通路与胃癌相关性研究[J].国际消化病杂志，2011,31(4):207-208.
【5】Wenjing Zhang, Yijun Gao, Peixue Li,et al.VGLL4 functions as a new tumor suppressor in lung cancer by negatively regulating the YAP-TEAD transcriptional complex[J]. Cell Research 2014,24(7):331-343.
【6】Baia GS,Caballero OL,Orr BA,et al.Yes-associated protein 1 is activated and functions as an oncogene in meningiomas[J].Mol Cancer Res，2012,10（7）：904-913.
【7】SERRANO I,Mcdonald PC,LOCK F,et al.Inactivivation of the Hippo tumour suppressor pathway by integrin-linked kinase[J].Nat Commun,2013,4:2976.
【8】Shi Jiao, Huizhen Wang, Zhubing Shi, et al.A peptide mimicking VGLL4 Function Acts as a YAP Antagonist Therapy against Gastric Cancer[J].Cancer Cell，2014,25(10):166-180.
【9】Harvey K F,Zhang X,Thomas D M.The Hippo pathway and human cancer.Nat Rev Cancer,2013，13(4):246-257.
论文作者:韩新影 1, 刘红正2,杜文雅 1, 张志刚1（通讯作
论文发表刊物:《医师在线》2016年11月下第22期
论文发表时间:2017/1/4
标签：胃癌论文; 组织论文; 肿瘤论文; 蛋白论文; 阳性论文; 淋巴结论文; 患者论文; 《医师在线》2016年11月下第22期论文;