·论 著·

氢氯噻嗪对吗啡中毒家兔体内吗啡代谢动力学的影响 ^*

王 勇^1,2，吴玉红^1,2，卜 娟^1,2，殷豪健³，黄子夏³

1.重庆警察学院刑事科学技术系，重庆 401331；2.重庆市“毒物毒品分析”重点实验室，重庆 401331； 3.重庆警察学院2015级刑事科学专业，重庆 401331

摘 要: 目的 建立LDHW-FFZ1-WuYH层析柱提取吗啡的方法，以及探讨氢氯噻嗪对吗啡中毒家兔体内吗啡代谢动力学的影响。方法 选择家兔6只，随机分为实验组(吗啡+氢氯噻嗪)和对照组(吗啡)，每组3只。实验组经耳缘静脉注射盐酸吗啡生理盐水溶液，随后采用氢氯噻嗪生理盐水经口灌胃，30 min后分别于1、2、3、4、5、6、7、8 h经颈总动脉各取1 mL血液冷冻保存待检。对照组仅采用经耳缘静脉注射盐酸吗啡生理盐水溶液，30 min后分别于1、2、3、4、5、6、7、8 h经颈总动脉各取1 mL血液冷冻保存待检。采用LDHW-FFZ1-WuYH层析柱进行前处理、气相色谱氮磷检测器(GC/NPD)定量检测吗啡水平。结果 LDHW-FFZ1-WuYH层析柱提取回收率高。对照组在3、4、5、8 h的吗啡水平均高于实验组，差异有统计学意义(P <0.05)。结论 建立了LDHW-FFZ1-WuYH层析柱提取吗啡的方法，该法成本低、方便快捷、回收率高、杂质水平低，可应用于吗啡中毒致死案件检材的前处理。利尿剂氢氯噻嗪可加速吗啡在体内的代谢速度，缩短吗啡在家兔体内的代谢时间。

关键词: 层析柱；吗啡；氢氯噻嗪；毒物代谢动力学

吗啡属于啡类生物碱，具有镇痛、止咳、止泻及镇静催眠作用，主要用于疾病晚期患者的止痛^[1]。公安禁毒工作中，吗啡属于常见毒品之一，对吸食毒品可疑人员快速筛查时常采集尿液进尿检板测试^[2-3]。部分嫌疑人为了逃避打击，常采用一些手段加速体内毒品的排泄，如大量饮水或服用利尿剂等。氢氯噻嗪是临床常用利尿剂之一，而国际奥委会将其定为违禁药中S5类，其主要作用是通过加速排尿减轻体质量，同时通过排尿加速其他违禁药的排泄，起到掩蔽作用。本文探讨氢氯噻嗪对吗啡在家兔体内代谢的影响，旨在为法医检测吸毒者利用氢氯噻嗪加速吗啡排泄、逃避法律制裁的案件提供依据^[4-5]，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 一般材料 选择实验室喂养的6只家兔作为研究对象，中位体质量2 kg。随机分为对照组(吗啡)和实验组(吗啡+氢氯噻嗪)，每组3只。

1.2 仪器与试剂 岛津GC-2010plus型气相色谱仪条件：Rtx-5ms(30.00 m×0.25 m×0.25 mm)毛细管柱，柱温为220 ℃(保持6 min)以12 ℃/min升至280 ℃(保持7 min)；检测器(NPD)，温度300 ℃；Inject温度280 ℃；载气为氮气(99.99%)，流速为2.14 mL/min；氢气流速为1.5 mL/min；空气流速为145 mL/min；尾吹27.5 mL/min；分流比为20.0。岛津气象色谱-质谱(GC-MS)仪条件：毛细管柱DB-5MS(30 m×0.25 mm×0.25 μm)，EI源(70 eV)。柱温：70 ℃→25 ℃/min→280 ℃ (15 min)。离子源温度250 ℃，进样口温度250 ℃；分流比为50∶1。载气：高纯氦气(99.99%)，流速为1.0 mL/min，恒流模式。试剂：乙酸乙酯、甲醇均为分析纯。盐酸吗啡标准品(1.0 μg/μL，购于公安部第二研究所)；内标SKF525标准液(1.0 μg/μL，购于公安部第二研究所)；氢氯噻嗪药片(每片25 mg，天津力生制药股份有限公司，生产批号：1708011)。LDHW-FFZ1-WuYH层析柱(内装8 mL QFH材料)。

1.3 方法 对照组：分别标号1、2、3号，抽取0.8 mL盐酸吗啡生理盐水溶液(4 mg/mL)，经耳缘静脉注射，观察家兔的呼吸与心跳生命体征，30 min后分别于1、2、3、4、5、6、7、8 h经颈总动脉各取1 mL血液冷冻保存待检。实验组：分别标号4、5、6号，抽取0.8 mL盐酸吗啡生理盐水溶液(4 mg/mL)，经耳缘静脉注射，观察家兔的呼吸与心跳生命体征。30 min后，将2片(50 mg)氢氯噻嗪溶解于生理盐水后经口灌胃，30 min后分别于1、2、3、4、5、6、7、8 h经颈总动脉各取1 mL血液冷冻保存待检。

笔者曾经在授课的七个班级300名学生中进行问卷调查，有52%的同学认为周围的人缺乏感恩意识，在与同学交往中对他人缺乏必要的尊重和沟通。在这样的情况中，很多人意识不到自己的问题，被同学孤立，最后变得不愿与人交往。古人云“百善孝为先”，感恩教育首先倡导感恩父母。在调查中显示大学生的孝心不尽如人意，有27%的大学生不知道自己父母的生日，有31%的大学生只知道父母其中一人的生日，81%的大学生称没有给父母过生日。问他们平时在家是否有做家务活时，有11%大学生称自己从来不做家务活。

2.1 家兔吗啡中毒致死解剖所见 解剖吗啡中毒致死家兔，可见腰大肌出血。

在数学教学过程中，教师应拓展游戏内容，将生活中的数学元素融入到游戏教学中，拓展学生思维，丰富游戏内容，使学生在游戏中学习到数学知识，并应用于实际生活中。例如，在游戏教学中，教师可以组织学生玩儿老鹰捉小鸡游戏，每当老鹰捉住一只小鸡时，教师可以向学生提问：鸡妈妈现在还剩多少小鸡。通过游戏的方式让学生收获知识，获得快乐，生活与学习相结合，为学生创建轻松的学习环境，提升数学教学有效性[3]。

2.3 工作曲线 取空白家兔血液1.0 mL，分别加入1.0 μg/μL吗啡标准溶液，配制成吗啡水平为1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 μg/μL，按1.3的方法提取并检测。以吗啡浓度为横坐标(X )，吗啡与内标SKF_525A的峰面积之比为纵坐标(Y )进行线性回归，所得血液线性回归方程Y =1.415X +0.035，R ²=0.999 1，结果表明，血液中吗啡在0.2～120.0 μg/μL时线性关系良好。

2 结 果

将抽取好的1 mL血液加入10%的HCl溶液共5 mL，振荡30 s，100 ℃水浴加热30 min，冷却至室温，超声30 min，1 800 r/min离心10 min，取上清液，加SKF525A内标液20 μL(1 mg/mL)，振荡1 min。加NaOH溶液调至pH=9。采用LDHW-FFZ1-WuYH层析柱进行前处理，乙酸乙酯洗脱提取，氮吹干，加入丙酸酐1 000 μL-吡啶600 μL(3∶2)溶液衍生化，氮吹仪60 ℃吹干。甲醇20 μL定容，抽取1 μL，采用气相色谱氮磷检测器(GC/NPD)定量检测其中吗啡水平。

护理前两组PBS以及FBS两项血糖指标接近（P＞0.05）；护理后循证护理组PBS以及FBS两项血糖指标的改善幅度更大（P＜0.05）。见表2。

2.4 两组家兔中毒后血液中各时间点吗啡水平的比较 对照组在3、4、5、8 h的吗啡水平均高于实验组，差异有统计学意义(P <0.05)。见表1。

1.4 统计学处理 采用SPSS11.5软件对数据进行分析。计量资料采用表示，组间比较采用t 检验。以P <0.05为差异有统计学意义。

2.2 回收率的检测 取空白家兔血液1.0 mL，分别加入吗啡标准溶液1.0、2.0、3.0 μg/μL，按1.3的方法处理，结果显示，血液中检测到吗啡水平分别为(0.99±0.60)、(1.94±0.30)、(2.94±0.50)μg/μL，回收率分别为99.0%±0.2%、97.0%±0.4%、98.0%±0.6%。

本研究结果显示，LDHW-FFZ1-WuYH层析柱回收率较高，充分证明了其能够应用于生物检材中进行吗啡前处理提取，此层析柱优点：成本低、操作简便、耗时短，不需调节检材的酸碱性，不需对固相萃取柱进行活化，直接将匀浆后的检材过柱，然后用乙酸乙酯有机溶剂洗脱，加入内标SKF525A挥发干燥，定容后直接检测；其次，此层析柱既具有很强的吸水性，同时对检材中的色素有具有很强的吸附性，因此经其提取的洗脱液杂质少，与文献[6-7]报道相符。

表 1实验组和对照组中毒家兔血液各时间点吗啡水平的比较

3 讨 论

（5）依托技术人才优势发展施工服务类经济。利用工程技术人才优势，组织工程施工、监理、设计、水务科技等4家施工服务企业。施工服务类企业注重资质和品牌建设，ISO质量体系建设，开展创优质工程工作，漳河灌区续建配套与节水改造工程2011年项目获2016年中国水利工程优质（大禹）奖，多个项目获湖北省水利建设江汉杯，企业竞争力不断增强。

解剖吗啡中毒家兔尸体，可见腰大肌出血，分析原因可能为家兔吗啡中毒后，肌肉持续强烈收缩，导致血管撕裂，从而表现为腰大肌出血。

根据治疗后临床症状恢复程度进行有效率分析和统计,将治疗效果分为显效、有效和无效。显效:患者肠瘘症状消失,其他并发炎症、粘连现象消失;有效:患者肠瘘症状逐渐消失,临床并发症减轻,同时生命指标趋于平稳;无效:无任何改善。总治疗有效率=显效+有效/总例数*100%,对比两组患者治疗后不良反应,并对两组患者住院时间和治疗后患者满意度评分进行总结和判断。

本研究模拟吸毒人员常用的静脉注射方式，将吗啡静脉注射到家兔体内，吗啡在血液中的水平达到最高，此后随着血液循环分布到靶器官、排泄器官等全身各个组织脏器，其在家兔体内的毒代动力学模型呈二室模型一级吸收^[8]。查阅相关文献资料可知，吗啡在体内的半衰期为3 h^[8]，因此在设计取血时间点时，以3 h为基准点，每隔1 h取血1次，次数不宜频繁，间隔不宜太短，原因在于次数过于频繁，间隔过于太短，家兔机体的应激反应不能充分发挥作用，会使家兔存活时间太短，导致取血时间点太少，从而不能检测到吗啡完全排泄的时间。

本研究结果显示，实验组与对照组在1、2、6、7 h时间点吗啡水平比较，差异无统计学意义(P >0.05)，原因为在中毒后1～2 h时，氢氯噻嗪经灌胃后处于吸收期，对家兔体内吗啡的排泄尚不能起到促进作用；在6、7 h时，氢氯噻嗪在家兔体内已近完全排泄，对吗啡的排泄已无促进作用。而实验组与对照组在3、4、5、8 h时间点吗啡水平比较，差异有统计学意义(P <0.05)，原因为利尿剂氢氯噻嗪在家兔体内起效，对吗啡的排泄具有促进作用；实验组在8 h时未测得体内吗啡，而对照组在8 h仍可测得体内吗啡，原因为利尿剂氢氯噻嗪缩短了吗啡在家兔的体内代谢时间^[9]。

公安机关在检测疑似吗啡吸食者时，常常只需定性检测，无需定量分析，依据上述吗啡在家兔体内的代谢实验结果可知，8 h之前，无论是否摄入利尿剂氢氯噻嗪，对吗啡的定性检测无任何影响；8 h之后，实验组家兔由于利尿剂氢氯噻嗪的作用，体内吗啡检测呈阴性，而对照组家兔体内吗啡检测仍呈阳性。由此可知：(1)毒品检验人员应及时检测疑似吗啡吸食者体内的吗啡；(2)对于疑似吗啡吸食者，检测结果呈阴性时，毒品检验人员应了解吗啡摄入与检测之间的时间间隔，同时侦查人员需调查该疑似吸食者是否摄入氢氯噻氢类利尿剂，企图加速吗啡的排泄，掩盖吸毒事实，逃避法律制裁；(3)对疑似吗啡吸食者体内检测阴性结果进行判读时，毒品检测人员应客观、科学地综合分析^[10]。

综上所述，毒品检测人员在检测疑似吸毒者利用氢氯噻嗪加速吗啡、排泄逃避法律制裁的案件时，如需采血进行定性检测吗啡，应在8 h内尽快采集。

参考文献

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[9] 向平．法医毒物学新技术专题[J].法医学杂志，2018，34(6):577-584.

[10] 贠克明．法医毒物动力学[J]．中国法医学杂志，2008，23(6)：361-369.

Effects of hydrochlorothiazide on the metabolic kinetics of morphine in rabbits ^*

WANG Yong ^1,2,WU Yuhong ^1,2,BU Juan ^1,2,YIN Haojian ³,HUANG Zixia ³

1.Department of Criminal Science and Technology ,Police Academy of Chongqing ,Chongqing 401331,China ; 2.Chongqing Key Laboratory of Toxic Drug Analysis ,Chongqing 401331,China ;3.Criminal Science of Grade 2015,Chongqing Police College ,Chongqing 401331,China

Abstract :Objective To establish a method of extracting morphine by LDHW-FFZ1-WuYH chromatography column and to discuss the effect of hydrochlorothiazide on the metabolic kinetics of morphine in poisoned rabbits.Methods Six rabbits were randomly divided into experimental group (morphine group+hydrochlorothiazide) and control group (morphine),every group had three rabbits.Rabbits in experimental group was extracted and injected with morphine hydrochloride saline solution through ear vein to observe the vital signs of breathing and heartbeat in rabbits.After 30 minutes,hydrochlorothiazide saline was orally administered.After 30 minutes,1,2,3,4,5,6,7 and 8 hours were taken from the common carotid artery for cryopreservation.Control group was only injected hydrochloride saline solution.The vital signs of respiration and heartbeat of rabbits were observed by intravenous injection through ear margin.After 30 minutes,1 mL blood was taken from common carotid artery for cryopreservation at 1,2,3,4,5,6,7 and 8 h,respectively.LDHW-FFZ1-WuYH column was used for pretreatment,gas chromatography (GC/NPD) was used to quantitatively detect morphine content.Results The recovery rate of LDHW-FFZ1-WuYH was high.Morphine levels of control group at 3,4,5,8 h were significantly higher than that of experimental group (P <0.05).Conclusion The method of extracting morphine by LDHW-FFZ1-WuYH column has been established in this study.This method has the advantages of low cost,convenience and rapidity,high recovery rate and low impurity content.It can be applied to the pretreatment of the samples of death cases caused by morphine poisoning.It can be seen that hydrochlorothiazide can accelerate the metabolic rate of morphine,and shorten the metabolic time of morphine in the rabbits.

Key words :chromatographic column;morphine;hydrochlorothiazide;toxicokinetics

中图法分类号： R89

文献标志码： A

文章编号： 1672-9455(2019)18-2596-03

DOI :10.3969 /j.issn.1672 -9455.2019.18.002

*基金项目 ：重庆市教育委员会科学技术研究项目(KJ1715363)；重庆警察学院科研项目(JY201802)；重庆高校创新团队建设计划(CXTDX01041)。

作者简介 ：王勇，男，主检法医师，主要从事法医病理、毒物学方面的研究。

(收稿日期： 2019-01-28 修回日期：2019-05-06)

标签：层析柱论文;  吗啡论文;  氢氯噻嗪论文;  毒物代谢动力学论文;  重庆警察学院刑事科学技术系论文;  重庆市“毒物毒品分析”重点实验室论文;