新疆福海县疾控中心 836400
摘要：目的：探讨AMOS-PCR方法在临床鉴定布鲁氏菌种型的特异性和实用性。方法：用常规方法以及AMOS-PCR方法对来自某医院临床诊断为布病的30份患者血样进行分型，以常规组方法布鲁氏菌种型分型标准为金标准，计算AMOS-PCR检测方法的灵敏度和特异度。结果：两组检测方法分别符合理论研究值，符合率为100%。对于羊种布鲁氏菌，AMOS-PCR检测诊断的灵敏度为100%，牛种布鲁氏菌的AMOS-PCR检测诊断的灵敏度为98%。结论：AMOS-PCR方法在鉴定布鲁氏菌种型的特异性和实用性较高，具有临床推广意义。
关键词：AMOS-PCR方法；灵敏度；特异度；布鲁氏菌种型
布鲁氏菌病是有布鲁氏杆菌感染引起的一种人畜共患传染病，主要临床症状表现为波浪形发热，其主要传播途径为经皮肤粘膜，消化道，呼吸道传播。据世界卫生组织报告，每年全球大约有50万新增布鲁氏菌病，同时，世界卫生组织指出，往往很多处于布鲁氏菌疾病急性期患者常常被误诊，每年的布鲁氏菌病的真实发病情况远远超过实际报告情况。所以，布鲁氏菌病的及时准确诊断对于此病的防控具有积极意义。布鲁氏菌病确诊的最佳方式是分离得到病原，所以布鲁氏病菌的准确鉴定和分离是控制治疗该病的重点。布鲁氏病菌种型的鉴定主要集中在DNA同源性测定，DNA限制性内切酶图谱分析，血清学检测，PCR扩增等方法，本研究将探讨AMOS-PCR方法在临床鉴定布鲁氏菌种型的特异性和实用性。
1 资料与方法
1.1 一般资料
本研究采用的样品来自某医院2016年1月-2017年10月临床诊断的布鲁氏疾病患者血样30份，患者平均年龄为35.23±5.32岁，男性和女性患者各15例。
1.2研究方法
对本次研究的30例布鲁氏疾病患者血样分别进行方法以及AMOS-PCR方法进行布鲁氏菌分型，同时以常规组方法布鲁氏菌种型分型标准为金标准，计算AMOS-PCR检测方法的灵敏度和特异度。具体操作为对所有布鲁氏菌患者血样注入双向血培养瓶（法国梅利埃公司）中，充分混匀后，将双向培养瓶置于37℃保温箱中进行培养，每隔一天进行观察，有菌落生长则将其置于布鲁氏琼脂培养皿进行再次培养，当布鲁氏琼脂培养皿中出现菌苔后溶于400微升去离子水，混匀后于-80℃进行冷冻24小时，煮沸10min，取上清液，制备DNA样本。
常规组检测方法，以布鲁氏菌的菌落特征，经过革兰染色情况，噬菌体裂解情况以及血清凝集实验进行菌株分型。AMOS-PCR组样品分别使用AMOS引物（北京赛百盛生物有限公司）和PCR引物（北京天根生化科技有限公司）进行扩增，最后使用1.5%琼脂凝胶电泳监测扩增产物，对样品进行分型。
2结果
经过5天的37℃的恒温培养，在双向培养瓶中和琼脂培养皿中分别出现了无色，半透明，大小为5毫米的菌落，其边缘整齐，露珠状，明显的折光性，符合布鲁氏菌的菌落特征，经过革兰染色情况，噬菌体裂解情况以及血清凝集实验进行菌株分型，常规检测组共计检测到15份羊种布鲁氏菌，13种牛种布鲁氏菌，2个血样未分型，AMOS-PCR组样品经过扩增以后，16份血样和13份血样分别扩增产生29条特异性片段，大小为498bp和178bp，其中1位患者血样为扩增产生跳大。两组检测方法分别符合理论研究值，符合率为100%。详见表1。对于羊种布鲁氏菌，AMOS-PCR检测诊断的灵敏度为100%，牛种布鲁氏菌的AMOS-PCR检测诊断的灵敏度为98%。
3讨论
国内外常见的布鲁氏病菌的鉴定方法主要是根据布鲁氏病菌的主要生理特征，例如血清因子，染料抑菌，CO2需求/硫化氢的产生以及噬菌体裂解的特点来进行鉴定。传统的方法实验的时间比较长，同时还需要大量的活菌参与试验。大量的活菌参与试验带来的后果势必会造成实验室的污染亦或是引起不必要的流行[4]。PCR扩增的方法对布鲁氏病菌进行鉴定，在理论上具有快速，简单，使用活菌数量少等优点，同时通过文献查询获知，该方法在国内外的应用中，其实验与常规检测方法符合率在80%以上，其中以羊种型布鲁氏病菌的检测鉴定水平最高。其次为猪种和牛种。通过以上的研究发现，AMOS-PCR组的检测符合率为100%，虽然从结果上与常规组并无很大差异，但是从检测的具体实施过程分析，常规组检测方法耗费时间在5天左右，且其安全性较低，AMOS-PCR检测，其准确率与常规组一致，检测结果一般在24小时内得出，对于临床工作中疾病的快速诊断具有积极的意义。布鲁氏菌病患者，早期链霉素、四环素族药物、磺胺类药品的联合使用，对于疾病的治疗具有积极的作用同时，布鲁氏菌病的早期诊断，分型对于医生合理选择特异性药品治疗有积极的指导意义，对该种疾病的进一步蔓延与传播有相对的抑制作用，减少该种疾病的误诊率，提高治愈率。
综上所述，AMOS-PCR方法在鉴定布鲁氏菌种型的特异性和实用性较高，具有临床推广意义。
参考文献：
[1]钟旗，范伟兴，何倩倪，等. 用AMOS-PCR对布鲁氏菌种型鉴定的研究[J]. 中国人兽共患病学报，2007，23（7）：683-686.
[2]Matope G，Bhebhe E，Muma J B，et al. Characterization of some Brucella species from Zimbabwe by biochemical profiling and AMOS-PCR[J]. Bmc Research Notes，2009，2（1）：261.
[3]马学平，高建炜，秦迎旭，等. AMOS-PCR在宁夏布鲁氏菌种型鉴定中的应用[J]. 中国病原生物学杂志，2010（9）：652-654.
[4]李坚，李铁锋，王艾琳. 用PCR法对布鲁氏菌进行筛查及分型鉴定的研究[J]. 中国地方病防治杂志，2009（4）：300-302.
论文作者:李慧
论文发表刊物:《健康世界》2017年24期
论文发表时间:2018/1/18
标签：布鲁氏菌论文; 方法论文; 血样论文; 鉴定论文; 布鲁论文; 特异性论文; 灵敏度论文; 《健康世界》2017年24期论文;